苦参碱常用的方法介绍

     苦参、苦参碱注射液及其它制剂，常以苦参碱为含量测定的指标。苦参碱常用的测定方法有：酸碱滴定法、薄层扫描法 、高效液相色谱法（HPLC法）、高效毛细管电泳法 (HPCE)等，现简单介绍如下：

    ㈠ 酸碱滴定法：
    1989年乌云木其格等以溴甲酚绿为显色剂的两相滴定法测定了扫炎拴中苦参碱的含量，两相滴定时，有机相组成为氨仿-异戊醇， 水相pH为3.9。
    1990年胡梅素等：采用酸碱滴定法测定发欣中苦参碱的含量。
    2002年赵春香等采用提取中和法测定迈清注射液中苦参碱的含量.采用0.O05mol／L的硫酸滴定液和0.Olmol／L的氢氧化钠滴定液
    2003年王以明等采用两相滴定法测定苦参片中苦参碱的含量。用NaCl饱和溶液为水相，含苦参碱的CHCl3为有机相，0.1％邻氯酚红为指示剂，在两相溶液中加入定量的酸标准液，充分振摇后，用标准碱液剩余滴定。
    酸碱滴定法为测定苦参碱最早使用的方法之一，发展到两相滴定法，主要是利用苦参碱在两相中的溶解度不同来测定，它克服了传统酸碱滴定法中操作复杂的特点，操作简单，但误差较大。当用其余方法如HPLC无法分离苦参碱时不失为一种好方法。
    ㈡ 比色法
    1991年，王兆华等采用薄层比色法测定喘咳平气雾剂中苦参碱的含量。以氯仿-甲醇-氨水(5：0.6：0.2)为展开剂，碘蒸气显色。0.2mol／L溴麝香草酚蓝pH7.6的缓冲溶液(0.1mol／L NaH2PO4+0.1mol／L NaOH溶液)6ml、氯仿萃取得到溶液。
    1996年张洪娟等以溴麝香草酚蓝pH7.6的缓冲液为显色剂，采用萃取后比色的方法测定御诊软膏中苦参碱的含量。
    2004年胡海清等采用酸性染料比色法测定复方丁香洗剂中丁香酚和苦参碱的含量。苦参碱与溴麝香草酚蓝络合后于(415±2)nm波长处测定吸收度。
    各种苦参生物碱大都可与溴麝香草酚蓝溶液(pH 7.6)形成离子对，紫外光谱相似，故被测生物碱应尽可能与其他生物碱分离完全。可经氧化铝柱色谱法或其它方法做进一步分离，但操作繁琐。一般若药理作用相似，此方法可适用于医院中药制剂的质量控制。
    ㈢ 紫外分光光度法
    1999年曹志红等采用薄层层析-紫外分光光度法对益肝丸中的苦参碱进行定量研究。紫外-可见分光光度计(日本岛津UV-190) 。展开剂为氯仿-甲醇-氨水(5：1：0.1) ，紫外灯365nm下观察浅黄色荧光带。
    2001年邹桂欣等采用薄层-紫外分光光度法测定参归颗粒中苦参碱的含量。UV-260紫外分光光度什(日本岛津)，展开剂为氯仿-甲醇-氨水(5：0.6：0.2)，10℃ 以下放置的下层溶液；显色剂为改良碘化铋钾溶液。
    2004年丁青龙等采用薄层-紫外分光光度法测定复方苦参素胶囊中苦参碱的含量。752-紫外分光光度计(上海第三仪器厂)，，以氯仿：甲醇：氨水(5：0.6：0.2)的下层溶液为展开剂展开，显色剂为改良碘化铋钾溶液。
    也有资料报道，苦参碱的薄层法测定中使用碘蒸气显色。但使用碘蒸气显色，显色时间不易控制，斑点呈色摸糊，显色之后的碘蒸气不易挥散干净，造成测定结果的重现性较差。一般还是还是    采用2000版药典所载的碘化铋钾溶液显色，斑点清晰可辩。
    采用薄层层析-紫外分光光度法测定苦参碱的含量对所采用的溴麝香草酚兰缓冲液的pH要求较高，pH7.6需要用pH计测定，操作较繁琐。
    ㈣ 薄层扫描法
    2000版《中国药典》所载方法为薄层扫描法。近几年常用的是双波长扫描法，展开系统多为苯-丙酮-醋酸乙酯-浓氨、氯仿-甲醇-氨水这两种系统。现简要介绍几种。
    郑晓晴等采用薄层扫描法测定了鼻咽灵片中苦参碱的含量。CS-900O双波长薄层扫描仪(日本岛津)。薄层板为0.4％CMC-Na硅胶G板，展开剂：苯-丙酮-醋酸乙酯-浓氨(2：3：4：0-2)，显色剂：稀碘化铋钾试液。双波长反射法锯齿扫描，λ1=505 nm，λR=650 nm，SX =3。
    刘云等采用薄层扫描法测定妇乐洗剂中苦参碱的含量CS-930型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；展开剂：氯仿-甲醇-浓氨水(50：6：2)上行展开l5cm；显色剂：稀碘化铋钾试渣。扫描条件：λs=490nm，λR=600nm，Sx=3，△Y=0.2mm，狭缝1.0×1.0mm。
    江海燕采用双波长薄层扫描法对不同广豆根炮制品中苦参碱进行测定。展开剂为氯仿-甲醇-浓氨水(46：6：0.2)，显色剂为改良碘化铋钾溶液。采用入s=510 rim，λR=650nm双波长反射锯齿扫描。
    有文献报道指出，为排除稀碘化铋钾显色剂对背景的干扰，薄层展开后，应在室温下尽量挥干展开剂中残留的氨，显色后立即用干净的玻板封盖。薄层扫描法测定苦参碱的含量，虽然结果较稳定，但操作麻烦，不如HPLC等方法简单，故2005版药典修订为高效液相色谱法（HPLC）。
    ㈤ 高效液相色谱法
    2005版中所载方法为高效液相色谱法，色谱条件为：以氨基键合硅胶为填充剂；乙腈-无水乙醇-0.3%磷酸溶液（80：10：10）为流动相；检测波长为220nm。理论板数按氧化苦参碱峰计算应不得低于2000。
    近年来高效液相色谱法使用频率最多，流动相系统除药典规定外，常有磷酸二氢钾-十二烷基磺酸钠-乙腈、乙腈-硫酸铵-十二烷基硫酸钠、甲醇-水-三乙胺、磷酸缓冲溶液-三乙胺-乙腈等。色谱柱一般都为ODS、苯基柱色谱柱。检测波长：205nm、210 nm、219 nm等。仪器：岛津LC 10ATVP高效液相色谱仪（SPD 10AVP检测器，SPD—M10Avp二极管阵列检测器，岛津色谱工作站。）、Waters高效液相色谱仪(Waters 510泵；Waters 486紫外检测器)等。