运用薄层观察分析仪的群组分析功能，轻松测定中药的指纹图谱

运用薄层观察分析仪的群组分析功能，轻松测定中药的指纹图谱 李名桃 长沙克罗玛化玻仪器设备有限公司 （0731-4532986 邮编410008） E-mail: webmaster@chromar.com http://www.chromar.com 指纹图谱测定是最近一二年兴起的中药检测项目，目的是通过一些检测手段，检测出不同批次中药产品的细微差别，即“指纹”化确认；从而为严格控制中药产品—特别是中药注射剂的质量指明方向;要实现此目的，通常用HPLC法检测出各成分的tr、峰面积，并确定其中的一峰为参照峰，再计算出相对保留时间tr及相对峰面积，同时拟订一个范围，以对不同的样品加以确认。这其中存在的问题是：①工作量大，时间长；每进一针样品至少一个小时，大量的试验数据需要一个一个地仔细处理；②易漏失组分，造成指纹不全；HPLC法对样品是有要求的，先要严格的纯化预处理后方可进样，有些组分正是在这种预处理过程中被处理掉了；在一个固定波长下检测，当某个组分在此波长下无吸收时，便不可检出，造成漏失。 鉴于此，开发一行之有效、简单、迅速、全面的方法来测定指纹图谱，很有必要。长沙克罗玛化玻仪器设备有限公司在这一方面做了有益的尝试，开发出了“薄层观察分析仪”。运用其群组分析功能，对中药进行指纹图谱测定，可称得上是快速、简单、全面、有效的方法。 “薄层观察分析仪”是运用简单高效的薄层色谱试验，与薄层扫描仪或HPLC将组分进行数字化报告相同，对薄层板上的斑点距离、光密度、面积、百分面积等进行测定、报告，根据这些数字化的测定，配合TLC图，即可完整地反映指纹图；这样既克服了单纯用TLC法的数据不足的缺点，又克服了用薄层扫描法及HPLC法的复杂、费时、漏失组分的不足。另外运用薄层观察分析仪的群组分析功能，不同的批次的样品的大量数据，该仪器可自动计算处理，进行分组报告，并可报告出二批次样品的相似性（Sim%），真正满足了对指纹图谱的测定要求。 测定实例： 4个中药样品在5×20cm薄层板上进行薄层色谱试验后，薄层板首先在薄层观察分析仪上观察、照相，得彩色TLC图，如图1； 图1 四批葛根药材TLC图 四个批次的样品，每个样品中有十个以上的组分，主要组分均已分离。 分析：对图1中进行分析，分别的结果图及报告：第1批：图2； 第2批：图3； 第3批：图4； 第4批：图5： 图2 第1批样品TLC图分析结果图及报告 图3 第2批样品TLC图分析结果图及报告 图4 第3批样品TLC图分析结果图及报告 图5 第4批样品TLC图分析结果图及报告 各个斑点的各参数如：距离（距离底边的距离）、光密度、面积、百分面积等均已报告出来，输入标样浓度可计算出各自浓度，进行线性回归等。 群组分析：如图6； 图6 4批样品TLC图群组分析结果图（第3批为参照样） 各批次样品的参数均集中报告，供直观比较，可方便地计算出相对距离、相对光密度（高度）、相对面积等，以样品3作为参照样，其它三个样品与其进行比较，计算出各自的相似百分率（sim%），各参数的汇总报告如表1。可单独打印，也可汇总打印。 表1 群组分析结果表 百分含量报告 Ln#\Pk# 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1 22.6 6.16 11.77 4.3 1.86 0.2 14.11 4.53 13.11 2.02 15.96 0.33 2.8 0.25 2 8.36 11.37 11.4 2.83 14.92 1.75 1.82 11.39 3.23 9.55 2.45 17.19 2.93 0.79 3 13.72 8.6 1.72 17.74 20.02 1.73 1.25 6.09 3.27 1.35 3.64 4.14 16.74 4 14.2 11.26 2.19 1.49 22.23 0.67 1.24 10.86 11.3 24.55 0 面积报告 Ln#\Pk# 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1 58023 15811 30225 11032 4783 525 36236 11621 33668 5174 40981 860 7180 646 2 12372 16837 16877 4195 22093 2588 2690 16867 4782 14142 3629 25450 4334 1176 3 38787 24305 4860 50130 56578 4876 3541 17219 9244 3808 10290 11713 47306 4 20105 15949 370 3099 2105 31483 949 1763 15385 16005 34769 0 OD-height报告 Ln#\Pk# 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1 3772 1217 1235 854 510 55 3581 893 2564 1236 3240 135 1022 136 2 832 656 388 375 1654 396 414 961 651 721 329 2736 672 304 3 3696 1084 748 2481 3113 511 576 678 488 281 778 2125 3445 4 1251 621 47 318 336 2218 113 253 1106 977 3702 0 位置报告 Ln#\Pk# 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1 35 58 78 92 151 170 195 216 239 249 262 283 292 302 2 35 58 128 175 194 210 222 238 246 259 276 294 303 309 3 33 76 107 123 173 192 207 218 234 251 282 297 306 4 37 60 97 137 179 197 214 232 245 268 300 336 薄层观察分析仪尚有许多其他的功能，将其用在中药的指纹图谱测定工作中，真正可以起到事半功倍的效果。其优势有4：①在一块20×20cm的薄层板上，可以进行10个样品的分析，可以一次完成，加之薄层色谱试验方法成熟，效果好，对样品无需严格预处理，成本低，速度快，配合薄层观察分析仪后，所有样品斑点几乎是同时测定，可将测量误差减少到极低；②将薄层板在光照（白光、紫外光）下观察完后，对某些不宜用光照观察的组分，可采取显色、加热等二次检测方法检出。成分漏检的机会大大降低；③将薄层色谱试验结果数字化，类似薄层扫描仪结果，但本观察分析仪的分析时间大大缩短了，对易分解的样品特别适用，其群组处理、分析数据的功能，将同一类的数据集中在一起供分析，仪器本身也报告一个相似%的结果。这些均可通过打印机打出，真正将人们从烦琐的事务中解脱出来。④价格便宜，一台仪器4万多一点，仅为进口薄层扫描仪的五分之一不到，是每个试验室都用得起的仪器。 2002．10