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Cell:更明亮的蛋白标记系统

来源:生物通
摘要:SunTag在目标蛋白上添加多个微小的多肽表位(橙色),允许人们给一个蛋白添加多个标签。这些表位可以招募连有荧光标记的单链抗体scFv。成像细胞中的单个DNA或RNA分子,一般是在目标分子中插入多个拷贝的特定序列,让荧光标记的蛋白能够结合上来。这个序列的拷贝数越多,目标......

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SunTag在目标蛋白上添加多个微小的多肽表位(橙色),允许人们给一个蛋白添加多个标签。这些表位可以招募连有荧光标记的单链抗体scFv。

成像细胞中的单个DNA或RNA分子,一般是在目标分子中插入多个拷贝的特定序列,让荧光标记的蛋白能够结合上来。这个序列的拷贝数越多,目标分子结合的荧光蛋白就越多,信号也就越明亮。“何不对蛋白做这种处理呢?”加州大学Ronald Vale实验室的博士后Marvin Tanenbaum开始着手解决这个问题。

此前成像细胞内蛋白的主要方式是,在其序列中填入一个发荧光的结构域(比如绿色荧光蛋白GFP)。在一般荧光显微镜下,带GFP结构域的单个蛋白是很暗淡的,但添加太多GFP结构域又会让蛋白变得过大。

Tanenbaum为此开发了SunTag技术。他在目的蛋白中加入多个拷贝(多达24个)的多肽表位,然后将这个蛋白与能识别该表位的荧光抗体共表达。这一技术发表在近期的Cell杂志上。

“这个技术的美妙之处在于它比较简单,”Albert Einstein医学院的Robert Singer说。Tanenbaum和同事对这一系统进行了大量的优化工作,这样的努力是值得的。SunTag不仅可以让蛋白更明亮,还可以将其他类型的蛋白吸引到多肽表位。举例来说,Tanenbaum用这一技术招募了多个转录因子,来增强一个基因的表达。

作者: 2015-1-29
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