摘要：蹇华丽吴振强梁世中(华南理工大学食品与生物工程学院广州510640) 摘要本文讨论目前常用的几种生物反应过程培养液成分在线检测技术，包括原位及非原位在线检测技术，如红外光谱技术、荧光检测技术、生物传感器检测...

摘要：1．假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量，④PCR循环条件。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，...

摘要：真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3‘末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5‘端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量...

摘要：对未知突变进行分析的方法1。RNA酶A切割(RnaseAcleavage)在一定条件下,异源双链核酸分子RNA：RNA或RNA：DNA中的错配碱基可被RNaseA切割,切割产物可通过跑变性胶得到分离。RNA探针可通过将相应的DNA片段克隆至含有...

摘要：因此，人们希望通过各种方法、按照需要定向地改造酶分子，甚至创造出自然界尚未发现的新酶，从而适合各行各业的需要。1、改造酶分子的方法目前改造酶分子的方法主要有两种，即化学修饰法和生物酶工程法。化学修饰...

摘要：作分子生物学实验，核酸纯化、酶切、克隆算是最基本的步骤了。可是如果两个酶分别切吧，费时间不说，切完一个，还要纯化好半天——就是不跑电泳也得酚氯仿抽提，本来就不多的样品这么一折腾，够呛。第一次酶切后，...

摘要：研究者们在分离到某一基因后，要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达——即：有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大...

摘要：无论是从一个胚胎细胞分化为不同的组织器官，或者是从正常的组织突变为肿瘤组织，都可能涉及在同一基因组背景下不同基因的差异性表达。寻找差异表达的基因就有可能揭示细胞分化的机制或者肿瘤的成因，因而也就成为...

摘要：体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，...

摘要：真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3’末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5’端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量...

摘要：三、试剂 1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0。四、操作步骤 （一）动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫...

摘要：（二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂NorthernMax Kit（Cat。），琼脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random Primer，dNTP Mixture，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow F...

摘要：将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：1。磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞...

摘要：体外制备 1。化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合...

摘要：大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。一、水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定...

摘要：如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE，那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定。 在这里，我们不考虑传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有...

摘要：蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心。 双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个E。coli蛋白，并表明蛋白质谱不是稳定的，而是随环境而变化。 双向电泳原理简明，第一向进行等电聚焦...

摘要：一、材料不同来源的DNA(50ng/ul)。 四、操作步骤： 1。 在25ul反应体系中,加入 模板DNA 1ul (50ng) 随机引物 1ul (约5pmol) 10xPCR Buffer 2。5ul MgCl2 2ul dNTP 2ul Taq酶 1单位（U） 加ddH2O 至 25ul 混匀稍离...

摘要：一、材料 基因组DNA(大于50kb,分别来自不同的材料)。 操作步骤 1。 基因组DNA的酶解 (1) 大片断DNA的提取详见基因组DNA提取实验,要求提取的DNA分子量大于50kb, 没有降解。(2) 在50μl反应体系中,进行酶切反应：5μ...

摘要：2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。6．以8000～10000r/min离心10秒沉淀细胞，小心弃去上清液，将细...

摘要：一、直接法1．标本经固定后，PBS洗涤3×3分钟。2．加荧光素标记的抗体，湿盒内37℃孵育50分钟。3．PBS洗涤3×3分钟。5．PBS洗3次，蒸馏水洗2次，每次3分钟，以除去NaCl结晶。

摘要：1．取材：取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成0。3．冷消化：换入0。4．分离：取出皮肤，用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。5．温消化：取出表皮单独处理，用剪刀剪成更小...

摘要：2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3天后，吸除培养液，再加入含BM-2的1640培养液培养4天，如此连续三个轮回。二、加温除菌法：把受污染的细胞置41℃中作用5～10小时。三、动...

摘要：2mol/L盐酸处理5min。3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃ 15min。5、加PCR混合液25μL(10mmol/L Tris-HCl，50mmol/L KCl，1。5mmol/L MgCl2，各加200μmol/L dATP，dCTP，dGTP，1。

摘要：（1）PBS洗2×3min。在每张切片上覆以过量的RNA酶溶液，在37℃孵育30min后用2×SSC冲洗，2×3min，然后与其它保存在PBS的切片一起进行下列处理。0，内含蛋白酶K1μg/ml，孵育15～20min。时间过短探针不易进入，过...

摘要：1mol/l PBS pH7。2冲洗5min。冰冻切片直接入PBS冲洗5min。1mol/l 甘氨酸PBS冲洗5min。

摘要：1．原理 用酰化剂3--（4-羟苯基）丙酸—N琥珀酰胺酯（Bolton—Hunter试剂）做连接试剂，将125I标记在羟苯基的2，5位置上，再将琥珀酰胺酯水解，通过一个酰氨键将3--（4—羟基—5—125I—苯基）接在蛋白或多肽的末...

摘要：1．原理用Iodogen为氧化剂，对蛋白质和多肽抗原进行碘化标记，把125I直接引进分子中的酪氨酸残基上。标记过程中被标记样品不与Iodogen混合，标记后取出样品即停止反应，不使用任何还原剂。2．方法（1）标记之前，...

摘要：本法反应温和，对抗原、抗体免疫活性影响小，已被广泛应用。1．原理此法是利用乳过氧化物酶（Lactoperoxidase）有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用，生成125I+，并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。2．方法以标...

摘要：（1）放射性碘源的选用：无载体的131I或125I均可用于碘化标记，但应尽量选用新鲜的、比放射强度高的、含还原剂量少的放射性碘源。碘源的比放射强度最好≥50～100mCi/ml，至少也要30mCi/ml，否则加入碘源的容量要增...

摘要：Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤：(1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。 (2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼...

摘要：随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5‘...

摘要：当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E。coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3‘羟基末端。同时该酶具有从5‘→3‘的核酸外切酶活性,能从切口的5‘端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3‘端补上...

摘要：一、DNA酶切反应 1、将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0。5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指...

摘要：组织原位杂交简称原位杂交，指组织或细胞的原位杂交，它与菌落的原位杂交不同。菌落原位杂交需裂解细菌释出DNA，然后进行杂交。而原位杂交是经适当处理后，使细胞通透性增加，让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交。因...

摘要：（1）将200mg组织在冰浴条件下用消毒剪刀充分剪碎，加4ml 1×RSB缓冲液（10mmol/L Tris, pH7。4）放入10ml带盖的塑料管中。4ml10%SDS），混匀。由于DNA从核中释放出来，样品变得粘稠。

摘要：1）膜的处理：同DNA的打点法。2）RNA变性：将提取的RNA与50μl 20×SSC/甲醛（30μl 20×SSC加20μl甲醛）混合，65℃水浴15min。3）点样：同DNA的打点法。4）固定：同DNA的打点法。

摘要：SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白分子量,是根据大多数蛋白都能与阳离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物,使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的负电荷，消除了不同蛋白分子的电荷效应,使...

摘要：试剂 (1)溶液A 取三羟甲基氨基甲烷36。23ml,加0。1mol/L盐酸溶液48ml，再加水溶解并稀释至100ml,置棕色瓶内，在冰箱中保存。 (2)溶液B 取丙烯酰胺30。

摘要：0) 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH至3。0，再加水至1000ml。1g，加水100ml使溶解。操作(1)制胶 取琼脂糖约0。