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sCD23在SLE患者血清中的检测
中华微生物学和免疫学杂志 1999年第3期第19卷 免疫检测
作者：张开明 尹兴平 周敏 唱文娟 郭志杰
单位：张开明 尹兴平 周敏 唱文娟 030009 太原市中心医院皮肤科；郭志杰 内科
关键词：sCD23；CD23；红斑狼疮；系统性
【 摘要 】 目的 了解sCD23及CD23在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的变化及意义。方法 采用双抗体夹心ELISA法、SP及APAAP免疫组化法检测SLE患者血清sCD23水平、皮损及外周血单个核细胞(PBMC)CD23表达，对sCD23及CD23同ANA、抗dsDNA抗体关系进行了比较。结果 ①病人组血清sCD23水平〔(4.10±3.16）ng/ml〕与正常对照组〔(1.48±0.41)ng/ml〕比较显著增高(P＜0.005),活动期水平明显高于静止期；②血清sCD23与ANA滴度、抗dsDNA抗体等具有明显的平行关系；③皮损表皮少数(3/9)弱表达CD23，PBMC则明显表达CD23。结论 CD23及sCD23在SLE发病中有一定的意义，其主要作用可能与抗原处理和递呈以及促进B淋巴细胞分化、增殖产生自身抗体有关，而且sCD23是监测SLE疾病活动程度一个很好的指标。
Study on the function of sCD23 in SLE
ZHANG Kaiming, YIN Xingping, ZHOU Min, et al. Department of Dermatology, Taiyuan Central Hospital, Taiyuan 030009【 Abstract 】 Objective To elucidate the role of CD23 in the pathogenesis of SLE.Methods We detected the levels of sCD23 in sera and the expression of CD23 in cutaneous lesions and PBMC from SLE patients with ELISA and immunohistochemistry techniques, respectively, then analysed the relationship of CD23 system with the titers of ANA, anti-dsDNA-IgG.Results 1. The levels of sCD23 in patients were significantly higher than controls. Furthermore, in comparison to that in static stage, sCD23 of patients with active disease was markedly higher. 2. The correlationship between CD23 and ANA, anti-dsDNA-IgG was well positive. 3. The expression of CD23 was weak only in minor lesions (3/9), while strongly on the PBMC from all patients.Conclusions CD23 system may play key role in SLE, mainly the antigen presentation process, further promote the differentiation and proliferation of B lymphocytes and production of autoantibodies. The study reveals that CD23 may also be an indicator for monitoring the activity of SLE.
【 Subject words 】 CD23 sCD23 Lupus erythematosus,systemic
CD23有许多重要的生物功能，尤其是在B淋巴细胞异常激活的疾病中具有重要的意义〔1-3〕。因SLE免疫特征是B淋巴细胞多克隆活化，产生大量的自身抗体,为此,我们采用ELISA法及免疫组化法对SLE患者血清可溶性CD23(sCD23)含量及皮损和外周血单个核细胞(PBMC)CD23表达进行了检测，同时对sCD23与血清中总IgE、ANA滴度、抗ds(ss)DNA抗体及ESR等关系进行了相关性研究。
材料与方法
1.研究对象：SLE患者共43例。取自1995年6月～1997年2月皮肤科和内科门诊及住院患者,部分病例由山西医科大学第二附院风湿科提供,女30例,男13例,女∶男为2.3∶1，年龄14～56岁，平均37岁，病程20天～7年。诊断标准参照1982年美国风湿病学会修订的诊断标准为依据，其中活动期23例，判断标准采用临床症状评分法，详见文献〔4〕，静止期20例。所有患者采血前两周内均未系统使用过免疫抑制剂及皮质类固醇激素。正常对照组45例，为门诊体检的正常人及健康献血员。
2.试剂：sCD23(相对分子质量为25×103)试剂盒为比利时Medgenix公司产品，批号：4002500；鼠抗人CD23单克隆抗体及APAAP试剂盒购自军事医学科学院邦定生物试剂公司；过氧化酶标记的链霉卵白素(简称SP)试剂盒为美国Zymed公司产品，购自北京中山试剂公司。
3.血清sCD23测定：静脉抽血分离血清，置于-40℃备用待测，所有患者及对照组标本均是最后一次同步测定，采用双抗体夹心ELISA法〔3〕。最后置芬兰Labsystems全自动酶标仪450nm及650nm(双波长法)处测各孔吸光度A值，用标准品浓度(0～25ng/ml)及A值列直线相关方程，然后从中即可求得血清sCD23含量(单位:ng/ml)。
4.皮损免疫组化：共做了9例，取皮损及正常皮肤。正常对照组8例为手术科室切除的正常皮肤组织。活检后按石蜡(固定液为中性缓冲甲醛液)切片操作方法常规制片脱蜡至水，采用SP免疫组化方法〔5〕。最后置显微镜下观察，阳性时在标记处可见棕色颗粒沉积。
5.PBMC CD23免疫组化：患者及对照组各做了18例。肝素抗凝静脉抽血,密度梯度离心常规分离PBMC，离心涂片机涂片,采用APAAP法〔6〕,然后置显微镜下计数300个有核细胞,统计每百个有核细胞阳性细胞数(PBMC CD23+％)。
6.常规检测项目：血和尿常规、血沉、补体(C3、CH50)、IgG、IgA、IgM(上述均由检验科完成)及血清总IgE水平测定(ELISA法，中国医科院免疫所试剂)，ANA、抗ds(ss)DNA抗体(ELISA法，正常＜30％)、ENA多肽抗体谱(免疫印迹法，为恒佳生物公司产品)、LBT等(后者均由本室完成)。
7.统计处理：将上述处理数据输入电脑，采用SPSS软件进行t检验及直线相关与回归分析。
结果
1.SLE患者血清sCD23测定结果：病人组血清sCD23水平与正常对照组比较明显增高，见表1；活动期SLE sCD23水平〔(6.12±3.47）ng/ml〕明显高于静止期〔(2.10±0.72）ng/ml〕；血清sCD23水平与常规检测项目相关分析结果显示sCD23与IgA和IgM之间无明显相关性，见表2。
表1 SLE患者血清sCD23水平测定(
Table 1. The levels of sCD23 in sera from SLE patients
| Group | n | sCD23 |
| SLE | 43 | 4.10±3.16 |
| Control | 45 | 1.48±0.41 |
| t value | 4.91 | |
| P value | ＜0.001 |
表2 SLE患者血清sCD23水平与常规检测项目相关分析结果
Table 2.The correlation between sera sCD23 and other items of SLE patients
| n=43 | ANA | Anti-
dsDNA |
Anti-
ssDNA |
ESR | C3 | CH50 | IgG |
| r value | 0.62 | 0.58 | 0.60 | 0.41 | -0.47 | -0.51 | 0.68 |
| P value | ＜0.001 | ＜0.001 | ＜0.001 | ＜0.01 | ＜0.005 | ＜0.001 | ＜0.001 |
2. 18例SLE患者PBMC CD23免疫组化结果：见表3。PBMC CD23阳性细胞数与其血清sCD23水平经直线相关与回归分析，r=0.74，P＜0.001，两者之间有正相关关系；回归分析结果，t=5.73，P＜0.0005，两者之间有显著的直线回归关系。PBMC CD23含量与其血清IgE相关分析，r=1.36，P＞0.5，两者之间无明显相关关系。
表3 SLE患者PBMC CD23表达结果(
Table 3. The expression of CD23 on PBMC from SLE patients
| Group | n | PBMC CD23+％ |
| SLE | 18 | 14.6±11.5 |
| Control | 18 | 5.1±3.8 |
| t value | 5.48 | |
| P value | ＜0.001 |
3. 血清总IgE测定结果：患者组与对照组血清总IgE水平无明显区别，见表4。血清总IgE与sCD23水平经相关分析，r=0.139，P＞0.5，两者之间无明显的相关关系。
表4 SLE患者血清总IgE水平测定(
Table 4. The content of total lgE in serum from SLE patients
| Group | n | IgE |
| SLE | 43 | 248.9±185.6 |
| Control | 45 | 226.4±147.3 |
| t value | 1.19 | |
| P value | ＞0.2 |
4. 组织CD23免疫组化结果：8例正常对照组表皮角朊细胞均未见CD23表达，9例SLE患者正常皮肤有1例基底细胞可见CD23弱表达，皮损处有3例表皮CD23弱表达，有6例于真皮少数浸润的单个核细胞表达CD23，结果见图1～3。
图1 正常皮肤组织未见CD23表达(×10)
Fig 1. The expression of CD23 was not found in normal skin(×10)
图2 SLE皮损基底细胞及表皮浅层和真皮单核细胞有CD23表达(×40)
Fig 2. CD23 expressed on the basal cell and upper spinous cell in epidermis and monocytes in dermis in SLE lesions(×40)
图3 SLE皮损表皮细胞膜及细胞浆可见CD23表达(×100)
Fig 3. The expression of CD23 was found on the cellular membrane and plasm in SLE lesions(×100)
讨论
CD23是IgE低亲和性受体，是一种相对分子质量为45×103的跨膜蛋白。CD23虽是IgE受体，但却不属于免疫球蛋白Fc受体超家族，而是属于C型植物血凝素家族成员，CD23也具有粘附因子的作用，其配体是CD21。CD23在上皮细胞以及淋巴细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞、血小板、NK细胞等多种类型的血细胞表面均表达〔1,2〕，膜结构CD23在细胞表面表达的时间并不长，迅即经蛋白水解酶分解形成多种大、小不等的可溶性CD23(sCD23)，目前已发现不同大小相对分子质量的sCD23其作用也略有区别〔3〕。CD23与sCD23在调节IgE合成、促进B、T淋巴细胞分化与增殖(但不是必需)以及抗原处理与递呈等方面有广泛的生物学作用〔1-3〕，最近国外有少数报道CD23在SLE中有异常〔2〕。我们研究结果显示，CD23及sCD23在SLE发病中存在着明显异常。
CD23与sCD23在IgE合成中有重要的调控作用，相反，CD23(sCD23)的多数功能又是由IgE介导的，但测定结果显示SLE患者血清sCD23水平显著增高，PBMC CD23表达程度明显增强，而血清中总IgE水平与正常对照组比较无明显区别，增高的sCD23以及PBMC CD23阳性程度与血清总IgE之间无明显的正相关关系。我们分析CD23(sCD23)在SLE中的主要作用可能有两方面：① CD23可与细胞膜的CD21交联，介导B和T细胞粘连，有利于B细胞向T细胞提呈抗原，促进T细胞的成熟；② CD23与sCD23促进B细胞分化、增殖和成熟，阻止生发中心B细胞死亡，使B细胞呈现高反应性，合成和分泌自身抗体，导致或加重自身免疫。所以，sCD23在自身免疫反应抗体合成中有重要的作用。
血清中sCD23来源于CD23阳性细胞，但不同的疾病sCD23的来源细胞可能也不一样。根据血清sCD23与PBMC CD23表达程度具有显著的直线相关与直线回归关系，同时真皮单个核细胞明显表达CD23，我们推测，PBMC可能是SLE患者血清中高浓度sCD23的主要来源之一。由于本研究所测sCD23的相对分子质量为25×103，而sCD23尚有相对分子质量为(12～37)×103之间多种类型的sCD23，因此，SLE患者血清中的sCD23水平可能要比本研究所测水平高得多。今后有待对SLE患者血清中不同类型的sCD23水平及关系进行进一步研究。
研究结果显示，血清sCD23与ANA滴度、ds(ss)DNA抗体及补体之间有高度的正相关和负相关关系，且活动期sCD23水平明显高于静止期，表明sCD23与SLE发病过程密切相关。因此，血清sCD23是监测SLE疾病活动程度的一个较好的指标。
参考文献
1 Armltage RJ, Goff LK, Functional interaction between B cell subpopulations defined by CD23 expression. Eur J Immunol, 1998, 18∶1753-1760.
2 韩连书. CD23与相关疾病的研究进展. 国外医学免疫学分册, 1996, 19∶250-253.
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(收稿：1997-10-24 修回：1998-05-26)