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材料与方法
基因重组乙肝表面抗原（Y-HBsAg）：由本所基因乙肝疫苗室提供，是酵母表达产物经疏水层析后所得纯品。
血源型乙肝抗体诊断试剂（P-HBsAb-RIA）：由本所诊断用品室提供。
试剂质控标准品：用于对诊断试剂进行技术指标评价的质控参考品，包括灵敏度、特异性、精密度及线性，均由中国药品生物制品检定所提供。
临床标本：北京市卫生防疫站提供，HBsAg、Anti-HBs、 Anti-HBc三项指标均为阴性的健康者，经基因重组乙肝疫苗免疫3针后所采集的血清标本。
基因型乙肝抗体诊断试剂（Y-HBsAb-RIA）的制备：选择最佳浓度的Y-HBsAg包被在直径6.4mm的聚苯乙烯珠上，经培育后用牛血清白蛋白封闭未结合部位，用冷冻干燥法除去载体表面水份，置4℃保存。采用氯胺-T法，将125I标记在血源型乙肝表面抗原（P-HBsAg）上，经实验选择最佳工作浓度，与上述Y-HBsAg包被株组成双抗原夹心法的新型试剂。
对比实验：应用基因型试剂(Y-HBsAb)和血源型试剂(P-HBsAb)同时测定质控参考品及免疫后的血清标本，检测方法均采用血源型（成品）试剂的测定步骤及结果判定标准。
结果与讨论
1.用两种试剂同时测定质控参考品灵敏度，根据所测值以阴性对照cpm值的2.1倍判为阳性。实验结果显示，Y-HBsAb试剂的最小检出量要小于2mIU/ml，而P-HBsAb试剂的检测终点为5mIU/ml，见表1。
表1 Y-HBsAb试剂与P-HBsAb试剂灵敏度的比较
| 检测项目 | RIA试剂 | |
| Y-HBsAb试剂 | P-HBsAb试剂 | |
| PC(cpm) |
9642 |
11049 |
| NC(cpm) | 115 | 138 |
| P/N | 84 | 79.57 |
| Cut off(cpm) | 241 | 291 |
| 5mIU(cpm) | 1383(+) | 308(+) |
| 2mIU(cpm) | 627(+) | 215(-) |
2.经基因重组乙肝疫苗免后的血清标本做系列稀释，用两种试剂同时测定，结果证明Y-HBsAb试剂所测标本稀释度终点比P-HBsAb试剂高两个滴度，见表2。
表2 以两种RIA试剂测定的基因重组酵母乙肝疫苗免后抗体滴度
| 样本稀释度 | Y-HBsAb试剂 | P-HBsAb试剂 | ||
| cpm | 结果 | cpm | 结果 | |
| 1× | 12 987 | + | 11 413 | + |
| 10× | 5 454 | + | 3 572 | + |
| 20× | 2 785 | + | 1 219 | + |
| 40× | 1 753 | + | 624 | + |
| 80× | 966 | + | 376 | + |
| 160× | 549 | + | 231 | - |
| 320× | 301 | + | 207 | - |
| 640× | 206 | - | 174 | - |
| 1 280× | 114 | - | 124 | - |
3.Y-HBsAb试剂在重组酵母乙肝疫苗免疫效果观察中的应用及与P-HBsAb试剂的比较：检测对象经重组酵母乙肝疫苗免疫3针后采血，用两种试剂同时测定抗体阳转率，以S/N≥2.1为阳性，依据改良Hollinger公式〔3〕计算GMT值，结果见表3。
3组免后血清标本来自大学生和高中生，分3组进行测定。用Y-HBsAb试剂测定所得抗体阳转率均高于P-HBsAb试剂所测值。而GMT值两组结果，Y-HBsAb试剂高于P-HBsAb试剂，一组低于P-HBsAb试剂。可能由于3组血清标本的测定为分批进行，试验误差所致。
表3 Y-HBsAb试剂应用于基因重组酵母乙肝疫苗效果观察
| 样本来源 | 试剂盒 | 试验次数 | 阳性
样本数 |
阳性率
(%) |
GMT |
| 大学生 | P-HBsAb | 177 | 161 | 91 |
63.90 |
| Y-HBsAb | 177 | 170 | 96 | 77.80 | |
| 高中生 | P-HBsAb | 163 | 151 | 92 | 56.43 |
| Y-HBsAb | 163 | 156 | 96 | 92.90 | |
| 高中生 | P-HBsAb | 129 | 112 | 85 | 100.98 |
| Y-HBsAb | 129 | 121 | 94 | 85.40 | |
应用不同来源的同种抗原制备检测抗体的试剂，对测定由基因重组乙肝疫苗免疫后的抗体应答比原有的血源型试剂更具合理性，不同来源的同种抗原在蛋白结构上有一定的差异，而使表面抗原共同决定簇（a）上的抗体结合位点也不尽相同，因此在免疫应答中所产生的抗体除具有能与共同决定簇（a）相结合的位点外还可产生由各自抗原结构差异所形成的特殊结合位点。
从本文实验数据看出，用Y-HBsAb试剂在测定质控标准品及基因重组疫苗免后标本的结果均优于P-HBsAb试剂。证实了Y-HBsAb试剂能更准确反映基因重组疫苗免疫后的保护性抗体水平。
Y-HBsAg在生产步骤上较P-HBsAg简单，极易扩大产量，此外，Y-HBsAg中不含有人血清中的其它蛋白成分，因此用Y-HBsAg制备抗-HBs诊断试剂，不仅可以解决原材料的来源，而且可以有效地提高试剂的敏感性和特异性。
参考文献
1，Del CanhoR, Grosheide PM , Mazel JA．Ten-year neonatal hepatitis B vaccination program, the Netherlands, 1982-1992:protective efficacy and long-term immunogenicity. Vaccine, 1997, 15(15):1624-1630.
2，李执如，李河民，李德富，等．应用单克隆抗体分析乙肝病毒表面抗原共同抗原决定簇上的位点及其密度．中华微生物学和免疫学杂志，1988，8（6）：375-378．