点击显示 收起
蜂毒多肽BVI-2对T细胞及THP-1细胞功能的影响
中国免疫学杂志 2000年第11期第16卷 分子与细胞免疫学
作者：朱伟 王本祥 朱迅
单位：朱伟 朱迅(白求恩医科大学免疫教研室，长春130021)；王本祥(长春中医学院附属医院新药研究开发中心，长春130021)
关键词: 蜂毒多肽；淋转；IL-1；TNFα
摘 要 目的：探讨蜂毒多肽BVI中有效的抗炎成份及其作用机制。方法：观察蜂毒多肽对小鼠脾淋巴细胞转化、IL-1合成及THP-1细胞 合成TNFα的影响。结果：蜂毒多肽BV、BVI、BVI-2可抑制ConA(2.5 μg/ml)诱导的小鼠 脾淋巴细胞转化、IL-1合成及PMA(100 ng/ml)诱导的THP-1细胞合成TNFα。结论：利用高效液相分离得到的蜂毒多肽BVI-2具有一定的抗炎作用。
中国图书分类号 R392.12
Effect of polypeptide in bee venom(BVI-2) on T cell an d THP-1 cell
ZHU Wei,WANG Ben-Xiang,ZHU Xun.
(Research Centre of New Drug, Changchun College of Traditional Chinese Medicine;Department of Immunology,Norm an Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130021)
Abstract Objective:To select anti-inflammation polypepti de from bee venom and study its mechanism.Methods:To inves tigate the effects of bee venom on splenocyte proliferation、IL-1 production in mice and TNFα production in THP-1 cells.Results:Polypep t ides from bee venom(BV、BVI、BVI-2)inhibited ConA(2.5 μg/ml)induced splenocyte proliferation、IL-1 production in mice and PMA (100 ng/ml) induced TNFα produc tion in THP-1 cells.Conclusion:BVI-2 isolated by HPLC is a main component of anti-inflammation of bee venom.
Key words Bee venom polypeptides Splenocyte proliferati on IL-1 TNFα
蜂毒是指工蜂用其螫针刺向敌害时，从螫针内排出的毒汁，主要由肽类、酶类及胺类物质组 成。我国民间利用蜂毒疗法治疗风湿、类风湿性关节炎等疾病已有悠久的历史，并取得 了较好的治疗效果，但对其具体作用机制研究较少。本室前期工作表明：BV、BVI可抑制小 鼠脾淋巴细胞转化、IL-1及TNFα的生成。在此基础上，本文进一步筛选BVI中 的活性成份，并观察了BV、BVI、BVI-2对T细胞及THP-1细胞功能的影响，以探讨蜂毒疗效 的作用成份及作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物 昆明种小鼠，雄性，20 g，由白求恩医科大学动物部提供。
1.2 细胞 THP-1细胞、L929细胞本室保存。
1.3 主要试剂 原蜂毒经离心、超滤、过Sephadexs G50柱，得到BV。BV 经 肝素Sepharose CL-6B亲和柱，得到BVI。BVI经高效液相C6柱，得到BVI-1、BVI-2、BVI -3。TNFα标准品由池岛乔教授惠赠。IMDM购于美国GIBCO公司。ConA、PMA、放线菌素D购于美国Sigma公司。新生小牛血清为大连生物试剂厂产品。3H-TdR购于北京原子能研究所 。
1.4 制备诱导上清
1.4.1 无菌取小鼠脾脏，制成单细胞悬液，分别与ConA 2.5 μg/ml及C onA 2.5 μg/ml和待测样品共同培养26 h，收取上清，检测IL-1生物学活性。
1.4.2 将生长状态良好的THP-1细胞3.2×105 ml-1与PMA 100 ng/ml及PMA 100 ng/ml和待测样品共同培养24 h，收取上清，检测TNFα生物学活性。
1.5 淋巴细胞功能转化实验 按常规方法操作。
1.6 IL-1活性检测 采用胸腺细胞增殖法［1］。
1.7 TNFα活性检测 采用结晶紫染色法［2］。
1.8 统计学方法 采用t检验。
2 结果
2.1 BVI-1、BVI-2、BVI-3对小鼠脾淋巴细胞转化功能的影响 BVI经S ephadexs G10柱脱盐，高效液相C6柱分离，得到BVI-1、BVI-2、BVI-3。淋巴细胞功能转 化实验结果表明：BVI-2(25 ng/ml)既可抑制小鼠脾淋巴细胞转化，刺激指数可由8.98降 至6.04(P＜0.05)。BVI-1、BVI-3抑制作用效果不明显(图1)。
2.2 BV、BVI、BVI-2对小鼠脾淋巴细胞转化功能的影响 BV、BVI、BVI -2均可抑制ConA 2.5 μg/ml诱导的小鼠脾淋巴细胞转化，BV的抑制效果最好，当其浓 度为 1 μg/ml时可使刺激指数由7.88降至4.21，并呈一定的剂量依赖关系。BVI-2浓度为50 n g/ml时可使刺激指数降至5.41(图2)。
2.3 BV、BVI、BVI-2对小鼠脾淋巴细胞生成IL-1的影响 BV、BVI、BV I-2均可抑制ConA 2.5 μg/ml诱导的小鼠脾淋巴细胞生成IL-1，并呈一定的剂量依赖关 系 。BV(1 μg/ml)、BVI(200 ng/ml)、BVI-2(50 ng/ml)可使刺激指数由11.973分别降至3. 980、8.500、6.922(图3)。
2.4 BV、BVI、BVI-2对THP-1细胞生成TNFα的影响 BV、BVI、BVI-2 均可抑制PMA 100 ng/ml诱导的THP-1生成TNFα，并呈一定的剂量依赖关系 。BV(1 μg/ml)、BVI(200 ng/ml)、BVI-2(50 ng/ml)可使THP-1细胞生成TNFα的含量由3 .458分别降至2.110、1.550、1.010 ng/ml(图4)。
图1 BVI-1、BVI-2、BVI-3对小鼠淋巴细胞功能转化的影响
Fig.1 Effects of BVI-1、BVI-2、BVI-3 on ConA induced splenocytes pro liferation in mice
Note:*P＜0.05 compare with ConA 2.5 μg/ml
图2 BV、BVI、BVI-2对小鼠脾淋巴细胞转化功能的影响
Fig.2 Effects of BV、BVI、BVI-2 on ConA induced splenocytes proliferat ion in mice
Note:*P＜0.05，* *P＜0.01 compare with ConA 2.5 μg/m l
图3 BV、BVI、BVI-2对小鼠脾淋巴细胞合成IL-1的影响
Fig.3 Effects of BV、BVI、BVI-2 on ConA induced IL-1 production in mi ce
noote:*P＜0.05，* *P＜0.01 compare with ConA 2.5 μg/ ml
图4 BV、BVI、BVI-2对THP-1细胞合成TNFα的影响
Fig.4 Effects of BV、BVI、BVI-2 on PMA induced TNFα production in THP -1 cells
Note:*P＜0.05，* *P＜0.01 compare with PMA 100 ng/ml
3 讨论
类风湿性关节炎是以关节滑膜细胞的过度增生以及大量T细胞、巨噬细胞、浆细胞浸润为特 征 的慢性炎症性疾病。在疾病的发病初期，大量活化的自身反应性T细胞直接及通过活化 巨噬细胞间接产生大量的促炎细胞因子，如IL-1、TNFα等。IL-1、TNFα可通过促进炎性 细胞 因子、粘附因子、基质金属蛋白酶的表达，抑制细胞凋亡等途径促进疾病的发生、发展。我 室前期工作表明：BVI具有较好的抑制小鼠淋巴细胞转化、IL-1及TNFα生成的作用。在此 基础上，将BVI利用高效液相进一步分离得到3个组份，其中BVI-2具有较好的抑制小鼠脾 淋巴细胞转化功能的作用。比较BV、 BVI、BVI-2的活性研究发现：BVI-2虽可抑制小鼠脾 淋巴细胞转化、IL-1、TNFα的生成，但无明显的剂量依赖关系，这提示：BVI-2可能通过 其它物质间接影响细胞的功能。此外，BVI-2的抑制作用强度弱于BV，这提示：蜂毒中可能 仍存在其它我们没有分离得到的抗炎物质，也可能整个分离纯化操作过程使其活性部分丧失 。总之，实验结果初步发现蜂毒中存在抗炎组份BVI-2，关于临床应用价值值得进一步深入 研究。
作者简介：朱伟，女，29岁，免疫学博士；朱迅，男，42岁，博士生导师，主要研究分子免疫与肿瘤免疫
参考文献
1，杨贵贞主编.免疫生物工程纲要与技术.长春：吉林科学技术出版社，199 3：17
2，沈关心，周汝麟主编.现代免疫学实验技术.武汉：湖北科学技术出版社，1998：283- 284
［收稿2000-07-01］