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肿瘤患者外周血淋巴细胞rDNA转录活性检测的意义
中国免疫学杂志 2000年第10期第16卷 肿瘤免疫学
作者：李其云 牛凤霞 翟金平 赵焕芬
单位：李其云（河北省人民医院病理科，石家庄 050051）；牛凤霞（河北省人民医院病理科，石家庄 050051）；翟金平（河北省人民医院病理科，石家庄 050051）；赵焕芬（河北省人民医院病理科，石家庄 050051）
关键词: rDNA；转录活性；图像分析；银染蛋白
摘 要 目的：观察外周血淋巴细胞rDNA转录活性在人体疾病过程中的动态变化，探讨其对肿瘤诊断和治疗监测的意义。方法：用图像分析系统分析104例癌瘤、心肌梗死、心肌炎患者的外周血淋巴细胞AgNor银染强度(用以表示rDNA转录活性)。结果：癌瘤、心肌梗死、心肌炎患者rDNA转录活性明显降低。癌瘤患者手术后比手术前rDNA转录活性明显降低，rDNA转录活性与癌组织DNA＞5倍体值呈负相关。结论：淋巴细胞rDNA转录活性是人体免疫反应的灵敏标志，具有广泛的临床应用价值。可作为肿瘤诊断和治疗监测的参考指标，但缺乏特异性。
中国图书分类号 R730.3
Significance of rDNA transcription activity of peripheral blood lymphocyte of tumor patients
LI Qi-Yun，NIU Feng-Xia，ZHAI Jin-Ping
（Department of Pathology， Hebei Peoples Hospital, Shijiazhuang 050051）
Abstract Objective：To explore the dynamic change of rDNA transcription activity of peripheral blood lymphocyte (PBL) in the diseases and its clinical significance.Methods： rDNA transcription activity was detected by a cell image analysis of Agnor in 104 cases of patients. Results： rDNA transcription activity of PBL was decreased in patients with cancer (except breast cancer) and myocardial infarction, myocarditis, showing a statistically significant difference. rDNA transcription activity after operation was significantly decreased than it before operation .rDNA transcription activity of patients with cancers and tissues of cancer which DNA＞5c showed negative correlation. Conclusion： The analysis of rDNA transcription activity is a sensitive marker of immunoreaction in human body. Though it can serve as a reference of tumor diagnose and treatment, it has no enough specificity.
Key words rDNA Transcription activity Image ana Agnorlysis
核仁组成区相关嗜银蛋白(Ag-nucleolus organizer region，AgNor)的嗜银强度是反映细胞内脱氧核糖核酸蛋白体(rDNA)转录活性及蛋白合成水平的标志［1］。1980年以来国内外许多学者将其引入肿瘤研究领域，根据肿瘤细胞的AgNor嗜银强度来判断癌前病变，鉴别肿瘤良恶及恶性肿瘤分级［2,3］。1990年以来发现外周血T淋巴细胞rDNA转录活性可以灵敏地反映出体内癌变进展程度与机体免疫状况的相互关系［4］。本研究采用计算机图像分析系统分析人体多种癌症与非癌其它疾病时外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的动态变化。
1 材料与方法
1.1 rDNA检测
1.1.1 标本来源 健康人15例（本院职工自愿者），门诊及住院患者104例，其中癌瘤71例，非癌患者33例（见表1）。
1.1.2 培养及制片 每例抽外周血0.5 ml，培养于RPMI 1640培养液中，37℃72 h，用T淋巴细胞激活剂PHA促使淋巴细胞进入分裂期，用低渗液0.075 mol/L 氯化钾5 ml破坏细胞膜留下核，醋酸甲醇固定后，离心弃上清液，细胞沉淀涂片，作AgNor染色。
1.1.3 检测 用CMIAS真彩色图像分析系统（北京航空航天大学、空军总医院联合研制）检测。每张涂片测量10个细胞的核仁银染强度相对值，包括银染核仁面积/细胞核积分面积的比值(Size of Ag-nucleolus/nucleus, S)，银染核仁积分光密度/细胞核积分光密度的比值(IOD of Ag-nucleolus/nucleus, I)两组数值。
1.2 癌细胞DNA检测
1.2.1 标本来源 收集43例受检rDNA转录活性癌瘤患者的手术切除标本。
1.2.2 DNA含量测定 采用CMIAS真彩色图像分析系统，标本制成厚4 μm石蜡切片，Feulgen染色，测量细胞核DNA积分光密度值，以该片中的小淋巴细胞DNA平均积分光密度值作为正常2倍体（2C）的参考值，每例测100个以上癌细胞，50个以上小淋巴细胞，经测量后自动显示出癌细胞群中＞5倍体(＞5c)癌细胞的百分率。
1.3 统计学处理 分别采用t检验与相关分析。
2 结果
2.1 各组淋巴细胞核仁银染强度相对值 见表1。
表1 各组淋巴细胞核仁银染强度相对值
Tab.1 The silver-staining intensity of the nucleoli of lymphocyte in different groups
| Group | Patients
amount |
S | I |
| Cancer | |||
| Esophagus cancer1) | 32 | 4.67 | 5.68 |
| Large intestine cancer2) | 19 | 5.45 | 6.47 |
| Breast cancer3) | 15 | 5.82 | 7.00 |
| Lung cancer4) | 5 | 4.93 | 6.11 |
| Miocardial infarction1) | 20 | 4.63 | 5.62 |
| Myocarditis4) | 5 | 4.77 | 5.91 |
| Appendicitis3) | 8 | 8.56 | 8.88 |
| Normal person | 15 | 8.46 | 8.02 |
note:comparing with normal,1) t=4.708 P＜0.000 1; 2) t=2.503 8，P＜0.05; 3) t=1.391 4，P＞0.05；4) t=1.131 7 P＜0.01;2.2 癌细胞DNA倍体值与淋巴细胞rDNA转录活性的关系 43例癌瘤DNA倍体分析发现癌细胞群中＞5c百分率与相应病例S·I值呈负相关(r=-0.461， P=0.001 9)。
2.3 rDNA在体内的动态变化 17例癌瘤进行手术后1 d、1 w及2 w各取血自身对照观察，发现术后1天S·I值较术前明显降低(t=2.305，P＜0.05)，术后1 w与术后1 d比较S·I值有回升 (t=2.576 8 P＜0.05)，术后2 w较术后1 w差异无显著性(t=0.192 ，P＞0.05)。
3 讨论
研究证实癌瘤患者rDNA转录活性明显降低、除乳腺癌外与健康人比较均有统计学意义。而阑尾炎患者与健康人相近，与文献报道一致［4～6］。
研究提示不同部位的癌瘤其rDNA转录活性降低的程度亦不同。但因病例较少尚须进一步证实，并发现癌瘤DNA倍体值与rDNA转录活性呈负相关。癌瘤含DNA＞5c值越高其rDNA转录活性越低，相反所含DNA＞5c值越低其rDNA转录活性越高。说明rDNA转录活性对癌瘤的恶性程度有敏锐的反应。对此文献未见报道。
研究发现术后第1天因机体受到创伤而rDNA转录活性较术前明显降低，而术后1 w又有回升，差异均有统计学意义。但术后2 w回升缓慢与术后1周比差异无显著性、说明rDNA转录活性随人体情况而呈动态变化。因本组时间过短而未见回升超过术前水平。
文献报道，细胞核仁组成区相关嗜银蛋白为酸性非组蛋白,是调控rDNA转录活性物质，通过观察其银染强度可反映出细胞rDNA转录活性水平。癌瘤发生初期，引起机体相应的免疫应答，淋巴细胞rDNA转录活性增高，而随着癌瘤的进展及恶性程度的增加，肿瘤细胞产生某些免疫抑制物破坏免疫机制，使机体逐渐陷入免疫低下状态，淋巴细胞核仁银染强度降低，显示rDNA转录活性下降［7］。
本组严重心肌梗死和心肌炎患者rDNA转录活性亦明显降低，与健康人比差异有统计学意义。尤其是心肌梗死患者差异更加显著。国内外文献尚未见报道。
有人曾提出此项检查是检测恶性肿瘤的新途径，可用于恶性肿瘤的诊断及治疗监测。本研究认为淋巴细胞rDNA转录活性是人体免疫反应的灵敏标志，除癌症外其它严重疾患或遭受创伤时亦可明显降低。因此它具有广泛的临床应用价值，对肿瘤患者虽可作为研治恶性肿瘤的参考指标，但缺乏特异性，有待积累资料尤其是早期癌瘤，作进一步深入研究。
作者简介：李其云，男，64岁，病理学教授，硕士生导师，享受政府特殊津贴
参考文献
1，Underword J C,Giri D D.Nucleolar organize regions as diagnostic discriminants for malignancy.J Pathol,1988;155:95
2，Walker R A. The histopathological evaluation of nucleolar organizer region protein.Histopathology, 1988; 12:221
3，Crocker J Nar P.Nucleolar organizer regions in Lymphomas.J Pathol，1987；151:111
4，林其燧，陈立奇，吴，卫et al. 外周淋巴细胞脱氧核糖核酸核蛋白体转录活性分析.中华医学检验杂志，1996；19(4):220
5，马树东，李金瀚.肺癌患者外周血T淋巴细胞rDNA转录活性分析.第一军医大学学报,1995；15(3):256
6，陈嘉微，杜金荣，陈淑范 et al.rDNA转录活性分析——检测恶性肿瘤的新途径.哈尔滨医科大学学报，1996；30(3):307
7，Chen L G, Liu J Y，Zhang X L et al. Image analysis for measuring the rDNA transcriptional activity. Chinese J of Genetics,1990;17(1):69
［收稿1999-06-08，修回2000-03-16］