活化巨噬细胞的细胞毒作用特性

活化巨噬细胞的细胞毒作用特性

中国免疫学杂志 2000年第12期第16卷 分子与细胞免疫学

作者：牛春波　谭岩　贾飞勇

单位：白求恩医科大学第一临床医院中心实验室，长春 130021

　　中国图书分类号　R392.11

　　机体抗肿瘤免疫主要是细胞免疫介导的，体内的抗肿瘤细胞毒效应细胞有：①CTL细胞；②NK细胞；③巨噬细胞。巨噬细胞通常以常在性巨噬细胞存在于机体各组织中，受到刺激后成为活化巨噬细胞，从而获得多种生物学功能，包括对肿瘤细胞的细胞毒功能。与CTL及NK细胞相比，巨噬细胞抗肿瘤作用机理的研究还远不够深入。主要组织相容性复合体是一组高度多态性的基因群，其编码的I及II类分子在抗肿瘤细胞毒作用中起着限制性识别和介导杀伤的重要作用，细胞毒效应细胞的MHC限制性成为肿瘤细胞过继治疗的不利因素。活化巨噬细胞与肿瘤细胞的直接接触是其发挥细胞毒作用的前提条件，细胞粘附分子在此过程中介导效靶细胞间识别、粘附和信号传递，从而参与细胞毒细胞的杀伤机理。因此研究巨噬细胞细胞毒功能的MHC限制性和相关粘附分子在巨噬细胞杀伤时所起的作用，对明确巨噬细胞的杀伤机理是极其重要的。

　　1　材料与方法

　　1.1　动物及试剂　雌性C57BL/6小鼠，8～10周龄，体重20±2 g，本校实验动物部提供 。EL4为C57BL/6小鼠淋巴瘤细胞，本室传代培养。LPS、IMDM培养基,Sigma公司。rmIFNγ德国 MPG研究所 Frand Emnrich教授赠送。各种McAb均购自法国国际免疫技术公司。³H-TdR，中国原子能核物理研究所。

　　1.2　鼠腹腔MΦ的提取　参见文献［1］。

　　1.3　细胞毒实验

　　1.3.1　MΦ活化　2 μg/ml LPS和2 500 U/ml IFNγ诱导24 h^［2］。

　　1.3.2　McAb对Mφ细胞毒活性阻断实验　吸弃上清无血清培养液洗3遍，加入不同浓度McAb，并加100 μl浓度1.0×10⁵个/ml的EL4细胞，效靶比20∶

　　1，设无抗体及抗小鼠IgG对照。继续培养24 h。³H-TdR摄入法测细胞毒活性。

　　1.4　统计学处理　结果经t检验，与对照相比，确定其显著性差异。

　　2　结果

　　2.1　Mφ细胞毒活性的MHC限制性　实验中观察到鼠腹腔Mφ在效靶比20∶1时，对EL4细胞有近20%的杀伤活性。再以不同浓度的LPS和IFNγ诱导Mφ，观察到LPS 2 μg/ml + IFNγ 2 500 U/ml诱导条件下，Mφ对EL4细胞的细胞毒活性达68.5%左右，以此作为本实验的对照，观察到抗MHC的I及II类分子抗体对活化的Mφ细胞毒活性无明显的影响。

　　2.2　抗粘附分子抗体对活化Mφ细胞毒活性的影响　用以上诱导方法活化Mφ，观察不同浓度的抗粘附分子抗体，对活化Mφ细胞毒活性的阻断作用。结果见图1。

图1　粘附分子抗体对MΦ细胞毒活性的阻断作用

　　Fig.1　Effects of anti-adhesion moleculescles McAb on the macrophages cytotoxicity MΦ activated LPS 2 μg/ml+IFNγ 2 500 μg/ml

　　Note:E:T:20:1

　　3　讨论

　　大量研究表明Mφ能作为免疫活性细胞过继治疗肿瘤。Mφ表面有MHC的I及II类分子表达，且不同功能状态时其表达量有所变化,在Mφ的抗原提呈功能中，受严格MHC的II类分子限制。本研究证实了Mφ与肿瘤靶细胞间的识别与结合是通过非MHC限制的方式进行的。初步证明了Mφ细胞毒作用的非MHC限制性。 以往研究表明，肿瘤细胞的抗原性较弱，且经常发生调变，使受严格MHC限制的CTL细胞不能有效识别并杀伤肿瘤细胞，这成为肿瘤逃避免疫监视的主要原因。而巨噬细胞对肿瘤的杀伤是非MHC限制的，只要巨噬细胞处于活化状态，则能杀伤多种来源的肿瘤细胞。因而把巨噬细胞有效激活，有可能成为机体内更有效的抗肿瘤杀伤细胞。在非MHC限制性细胞杀伤的效靶细胞结合中，粘附分子起着最主要的介导作用。常在性Mφ表面有ICAM-1和Mac-1分子表达，经IFNγ或TNFα刺激后，活化Mφ表面这两种分子表达明显增加，但一直未发现LAF-1表达^［3］。而EL4细胞表达Mac-1和LAF-1分子。本实验结果中，抗Mac-1与抗LAF-1单克隆抗体部分阻断了活化Mφ细胞毒作用，参与效靶细胞作用。其机制可能为两种抗体分别与Mφ和EL4细胞上的Mac-1分子和LAF-1分子结合，起了抗体封闭的作用。从而证明粘附机制在Mφ杀伤过程中起着重要作用。这提示有目的地改变效靶细胞表面粘附分子表达，有可能提高免疫效应细胞以至整个机体抗肿瘤能力。

　　作者简介：牛春波，女，29岁，临床免疫学硕士；贾飞勇，男，29岁，博士生，从事血液肿瘤治疗的研究；谭岩，男，43岁，博士生导师，从事细胞免疫学研究

参考文献

　　1，Natale V A, McCullough K C.Macrophage culture: influence of species-specific incubation temperature . J Immunol Methods，1998; 214(1-2): 165

　　2，Keller R, Keist R, Joller P.Macrophage response to microbial pathogens: modulation of the expressi-on of adhesion, CD14, and MHC class II molecules by viruses, bacteria, protozoa and fungi. Scand J Immunol，1995; 42(3): 337

　　3，Hoffer E, Baum Y, Tabak A.Adhesion molecules of blood polymorphonuclear leukocytes and alveolar macrophages in rats: modulation by exposure to ozone. Hum Exp Toxicol，1999;18(9):547

收稿2000-01-22

　　修回2000-08-13