人胰岛素样生长因子1的真核细胞表达及其鉴定

人胰岛素样生长因子1的真核细胞表达及其鉴定

免疫学杂志 2001年第1期第17卷 基础免疫学

作者：徐志伟　娄亚欣　李莹　邓鸿业　邓玉兰

单位：北京大学医学部免疫学系，北京 100083

关键词：人胰岛素样生长因子1；基因重组；真核细胞表达；活性鉴定

　　摘　要：目的　构建人胰岛素样生长因子1（IGF-1）的真核细胞表达质粒。方法　用PCR方法从人的肝细胞cDNA文库中克隆出IGF-1cDNA，然后定向插入真核细胞表达载体pcDNA3中，并用脂质体方法转染COS7细胞。用ELISA法和人胚肺纤维母细胞以及NIH3T3纤维细胞增殖法分别测定转染细胞上清液中IGF-1的含量和生物活性。结果　重组的真核细胞表达质粒pcDNA3-IGF-1所含的IGF-1cDNA序列和插入方向均正确，其转染的COS7细胞分泌较高浓度的IGF-1，并且具有明显促进纤维细胞增殖的能力。结论　本实验所构建的重组真核细胞表达质粒pcDNA3-IGF-1能够高效表达有活性的IGF-1，对进一步研究IGF-1体内表达的生理和病理作用有一定意义。

　　分类号：R392.11　文献标识码：A

　　文章编号：1000-8861（2001）01-0001-04

Expression of human insulin-like growth factor 1 in eukaryotic cell and detection of its activity

XU Zhi-wei（Department of Immunology ，School of Medical Science， Peking University， Beijing 100083，China）

　　LOU Ya-xin（Department of Immunology ，School of Medical Science， Peking University， Beijing 100083，China）

　　LI Ying（Department of Immunology ，School of Medical Science， Peking University， Beijing 100083，China）

　　DENG Hong-ye（Department of Immunology ，School of Medical Science， Peking University， Beijing 100083，China）

　　DENG Yu-lan（Department of Immunology ，School of Medical Science， Peking University， Beijing 100083，China）

　　Abstract：Objective　To construct eukaryotic expression plasmid for human insulin-like growth factor 1(IGF-1) . Methods　 IGF-1　cDNA was cloned by PCR from the human liver cDNA library， and inserted into eukaryotic expression vector pcDNA3 with gene recombinant technique， forming recombinant pcDNA3-IGF-1 plasmid. The latter was transfected into COS7 cells with liposome-mediated method．Concentration and activity of IGF-1 in the supernatant were detected by ELISA and fibro-blast proliferation assays respectively. Results 　IGF-1cDNA sequence and its insertion direction in recombinant pcDNA3-IGF-1 plasmid were　are correct. The　COS7 cells transfected with the pcDNA3-IGF-1 plasmid secreted high concentration of IGF-1，which markedly induced the proliferation of human fibroblast and NIH3T3 cells. Conclusion　 The recombinant pcDNA3-IGF-1 plasmid can express active IGF-1 with high efficiency， which facilitates the study of its physical and pathological roles in vivo.

　　Keywords：insulin-like growth factor 1； gene recombination；eukaryotic cell expression；activity identification基金项目：高校博士点专项科研基金资助项目（教技发中心［1999］26号）

　　作者简介：徐志伟（1964－），男，山东临朐县人，副教授，博士，主要从事自身免疫病分子机理的研究。现在山东省潍坊市潍坊医学院免疫学教研室，261042。　Tel：（0536）8211542； E-mail：weifangmianyi＠yeah.net参考文献：

　　［1］Jansen M，Van Schaik FMA， Richer AT， et al. Sequence of cDNA encoding human insulin-like growth factor 1 precursor［J］. Nature， 1983，306(8)：609－611.

　　［2］李　莹，邓鸿业， 马大龙， 等.重组人截短型胰岛素样生长因子1在大肠杆菌中的高效表达［J］.中国免疫学杂志， 2000， 16(2)：57－60.

收稿日期：2000年6月27日

修稿日期：2000年10月8日

出版日期：2001年1月15日