肝癌特异性蛋白固相检测法的建立

　　肝癌特异性蛋白(HCSP)检测为原发性肝癌的诊断提供了简便易行的可靠方法，但试剂用量大，干扰因素多，结果难以判断。我们将试剂盒中的液相反应改为固相反应，建立了简便、快速、敏感、特异的HCSP固相检测法。现报告如下。

　　一、对象和方法

　　1.研究对象：肝癌组211例，其年龄16～76岁，男162例，女49例，肝外肿瘤组68例，非肝癌肝病组130例，均经B超、CT或肝活检等有关检查而确诊，健康献血员100名。

　　2.方法：按中国人民解放军兽医大学研制的肝癌特异快速诊断试剂盒说明，并加以改进，用固相反应板代替醋纤膜，每孔加待检血清20μl，同时作阴、阳性对照。每孔加已溶解的“A”试剂20 μl，充分振荡，迅速漂浮于60℃水浴箱内，15 min后取出，每孔再加已溶解的“B”试剂20 μl，漂浮于水浴箱内，作用3～5 min观察结果。被检孔呈紫红色、玫瑰红色、粉红色为阳性；呈黄色、乳白色、淡黄色为阴性。重度黄疸者呈黑绿色为阳性。

　　二、结果

　　用试剂盒和固相法对29例标本进行HCSP检测，结果100名献血员均阴性，122例肝癌均阳性，68例肝外肿瘤患者，其中1例试剂盒法结果可疑，难以判断，而固相法则阳性，其余67例均阴性。130例非肝癌性肝病患者，除试剂盒法中1例乙型肝炎结果可疑外，其余两法乙型肝炎、肝硬化和肝血管瘤的阳性率(%)分别为8.45(6/17)、27.27(12/44)和0(0/8)。

　　三、讨论

　　1.用试剂盒法和固相法对290例标本进行HCSP对比检测，经统计学处理，P＞0.05，表明两种方法差异无显著意义。因此，固相法完全可以取代试剂盒法，且具有操作简单，用60℃水浴箱可替代CE-2型肝癌恒温反应仪，试剂用量减少至试剂盒法的50倍左右，降低了成本，结果稳定，易于保存，重复性好等优点。

　　2.HCSP系指肝癌返组的胚胎型蛋白，主要为特异性血清γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)及其γ-GTⅡ同工酶。文献报道用火箭免疫电泳测定血清γ-GTⅡ，肝癌患者的阳性率为87.0%。我们固相法检测211例临床已确诊肝癌者的HCSP，结果208例阳性，其敏感性为98.57%，高于γ-GTⅡ检测的阳性率。130例非肝癌肝病患者中乙型肝炎、肝硬化、肝血管瘤中的阳性例数为18，其特异性为86.15%。46例甲胎蛋白(AFP)＜400μg/L肝癌患者和23例转移性肝癌患者HCSP均阳性。