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1实验材料与方法 主要试剂和药品：链脲佐菌素(STZ，CA／JBIOCHEM，USA)；糖心康，为黑龙江中医药大学附属第一医院制剂室制作；Rat 2302．0基因芯片(AFFYMETRIX，USA)。动物造模及分组：Wistar；t鼠，雄性，体重200—230g，哈尔滨医科大学动物中心。除正常对照组外，余者以25m9·kgSIZ左下腹腔注射造模。造模成功后，再随机分为模型组和治疗组。各组均喂以高热量饲料。给药方法：治疗组以中药糖心康(7．99／kg)灌胃，正常组与模型组予等量生理盐水灌胃。标本采集：快速用180％、l2小时处理过的手术剪刀摘取心脏，立即用预冷的生理盐水冲洗，冲洗后在冰上操作，沿心室长轴切取心肌，置于液氮中冻存，以备提取RNA使用。心肌组织Scn-4bmRNA表达：采用荧光定量RT—PCR检测。结果判定：在实时荧光定量PCR技术中，为了定量和比较的方便，引入了荧光阈值(threshld)和cr(threshdd value)值的概念。荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上。cr值与起始模板的关系为每个模板的cr值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Cr值越小。大鼠心肌组织中Scn4bmRNACF值上调，说明Sen4bmRNA在心肌组织表达量减少。
统计学方法：利用软件Rotor—Gene6．0以及Excel7．0进行t检验处理。
2结果见表1。
表1 各组scn4b mRNA表达水平的比较
组别 n 剂量(9，ks) cr值
正常组 l0 一 20．9601±2．5829
模型组 l0 一 29．5133±4．4942**
糖心康组 l0 7．9 23．8467±5．720766
与正常组比较*P<0．05，**<0．01；与模型组比较△P<0．05．△△P<0．Ol
3讨论本研究以《金匮》治疗消渴病理法及相关论述为指导，确定了益气养阴活血为该病的主要治法。研制中药复方糖心康，由太子参、黄芪、麦冬、玉竹、枸杞、丹参、土鳖虫等药组成，诸药相合，补而不滞腻，通而不伤正，滋而不助湿，温而不伤阴，共奏益气养阴、通络化瘀之效。
A1137995：Sodium channel，voltage—gated，type IV，beta，电Nt3控钠离子通道蛋白亚基(Scn4b)。电压门控钠离子通道(简称钠通道)是存在于大多数可兴奋细胞膜上的膜内蛋白质。它主要在快速去极化时引起动作电位的传播，参与心肌动作电位平台期的形成和维持。现已知钠通道是一个大分子糖蛋白，其中碳水化合物部分占整个分子结构的30％左右。在许多组织发现，钠通道的基本单位还与其他小的蛋白紧密联系。其中大的形成孔道结构的蛋白称为a亚基(260kD)，小的称为亚基(30～36kD)。哺乳动物的亚基有lO种同源蛋白：Navl．1-Navl．9和Nax。a亚基由4个高度相似的同源结构域(1—IV)围成一个中心孔道，每个结构域有6个a螺旋跨膜片段(S1～S6)。其中s4片段被认为是钠通道的电压感受器，它高度保守，每隔2个氨基酸残基就有一个精氨酸或赖氨酸残基，该段氨基酸残基的点突变或化学修饰会影响电压门控钠离子通道的激活功能。s5和S6片段之间发夹样B折叠(P区)嵌入膜内构成孔道的衬里，与通道的离子选择性有关。钠通道结构域Ⅲ-Ⅳ之间的细胞内连接环充当钠通道失活的门控襻，它可电压依赖性地进入孔道内口。堵塞孔道，使钠通道失活。B亚基对a亚基在细胞膜上的定位及稳定性起着重要的作用，并参与调节a亚基的电压敏感性和失活过程。目前研究发现，p亚基有4种，即S(1diunl channel，voltage—gated，type IV，beta，电压门控钠离子通道蛋白84亚基(Scn4b)，研究发现，Scn4b由细胞外免疫球蛋白样结构域(lg—likefold)、跨膜段、胞质尾区组成，lg—like fold含有一个不成对的半胱氨酸与a亚基相互作用。与最为相似，有35％同源序列，广泛分布于大脑神经元、脊髓及一些感觉神经元细胞膜，与a亚基结合能够加速电压门控钠离子通道的激活和失活。
本实验结果证明，糖尿病心肌损伤状态下，心肌组织中CAIImRNA表达上调，使细胞内H+生成增多，通过N8+-H+交换使胞内№+增加，而Scn4b表达下调，使电压门控钠离子通道敏感性降低，胞内钠离子流出减少，而胞内№+浓度的提高可以降低N+-K+-ATP酶的活性，导致细胞能量匮乏，胞内H20和Na+含量增加，细胞发生水肿；另一方面，胞内Na+的增加可以逆转细胞膜上的Na+/Ca2+交换，使心肌细胞内钙离子浓度增加；同时，细胞能量匮乏使Ca2+-2ATP酶的活性降低，胞内Ca2+难以泵出，上述因素共同作用的结果是胞内Ca2+浓度的增高，使心肌收缩性减弱，反映在心脏功能上为需要消耗大量ATP的舒张期顺应下降。同时心肌细胞内的钙离子过负荷，可导致左室压和舒张末期压升高，加重糖尿病性心肌病大鼠心肌损伤。而糖心康可通过上调糖尿病大鼠心肌组织Scn4b的表达，保护心肌组织，延缓疾病进一步发展。