益气活血法治疗缺血性中风实验研究概况

    缺血性中风发病率高、病死率高、致残率高，是严重危害人类生命和健康的常见病，约占中风病总数的60％～80％[1]。本文综述了近年来有关益气活血法治疗缺血性中风实验研究近况，益气活血法治疗缺血性中风具有独特的优势，其实验研究已取得了一定的进展，为益气活血法治疗缺血性中风奠定了一定的实验基础，现将近年来益气活血法治疗缺血性中风的实验研究进展，从思路与方法、神经缺损体征及大脑梗死体积、凝血纤溶系统、自由基、兴奋性氨基酸、细胞凋亡、神经可塑性七个方面展开综述。
    研究的思路与方法
    王键等  从脑缺血研究切入点的选择、气虚血瘀病机和治法的内涵及研究方法、病证结合动物模型优势和制作、治疗时间窗选择和动态研究意义出发，提出益气活血法防治脑缺血的实验研究，以缺血半暗带神经细胞凋亡为切入点，采用多因素制作病证结合的局灶性脑缺血动物模型，使宏观与微观相结合，治法、病证、方剂相联系，定量和定性研究相结合，动态与静态观察相联系，多角度阐明该法防治脑缺血作用机制及其病机实质，进而建立该模型较为客观化的评价体系和多时点、多途径、多层次、多靶点、多因素动态实验观察模式。李净等  从动物模型复制的理论依据及实施情况、动物的选择及对照情况、症状和体征的客观评价、微观指标的检测、中药反证研究五个方面论证了多因素复制气虚血瘀证脑缺血动物模型的思路，具有创新性，在造模方法上是科学的，所复制的模型在宏观体征和微观指标方面基本符合中医气虚血瘀证候特点和现代医学脑缺血病理变化规律，可用于中医药防治脑缺血的科研工作中，在此基础上进行的中药药理和药效研究也更具有中医药特色。
    对脑缺血再灌注损伤大鼠神经缺损体征
    及大脑梗死体积的影响
    当大鼠脑缺血再灌注时，受损脑组织内引起一系列复杂的病理生理过程，最终导致大鼠脑梗死，并体现在外在行为学上神经缺损体征。
    朱慧渊  通过实验研究发现，大脑中动脉阻断模型(MCAO)大鼠出现右下肢无力、伸直行走时向右侧转圈，严重时向对侧倾倒甚至不能行走，乃至出现意识障碍，提尾时表现为对侧前肢屈曲、内收，后肢伸直并向右侧旋转，益气活血药物黄芪加川芎能使大鼠的神经功能缺损体征减轻。任守忠等  通过脑梗饮对局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究发现，脑梗饮能通过益气养阴、活血通络等调控措施缩小脑梗死体积，并且能改善神经损伤症状，减轻脑缺血再灌注损伤。吴常青等  通过实验研究发现，补阳还五汤有效部位可显著改善大鼠脑缺血再灌注后神经功能症状，明显减少大鼠脑组织梗死体积。张运克等  通过实验研究发现，补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植可减少局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积，改善神经功能障碍。
    对脑缺血再灌注损伤大鼠凝血纤溶系统的影响
    脑缺血发病的重要机制之一，是脑缺血时血管内皮细胞受损、血小板被激活、凝血因子被激活、抗凝和纤溶系统功能失衡等因素导致的凝血一抗凝一纤溶系统指标的变化。目前已经得知有多种益气活血方药在抗血小板聚集、血栓形成中起作用。翟从永等  通过实验研究发现，益气活血方(脑络欣通)可以通过降低血浆vWF和TM含量，从而改善脑缺血再灌注后凝血、抗凝与纤溶系统的平衡，以抗脑缺血再灌注损伤。
    对脑缺血再灌注损伤大鼠自由基的影响
    自由基对脑组织的损伤主要发生在脑缺血再灌注期，自由基主要包括超氧阴离子(02-)，羟自由基(•OH)、一氧化氮自由基、烷自由基、烷氧基和烷过氧基、脂质过氧化物自由基等。其中氧自由基是诱发自由基连锁反应的启动环节，其性质极不稳定，可以不断生成新的活性氧。
    刘莎等  通过实验研究发现，补脾益气、补肾培元、活血祛瘀三治法代表方均可降低大鼠脑卒中指数，升高脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的含量，提高机体清除自由基的能力，并降低丙二醛(MDA)的含量，降低机体内脂质过氧化的程度。指出补肾培元、活血祛瘀法可通过抗氧自由基损伤来改善脑缺血再灌引起的损伤。谭文聪等  通过实验研究发现，补阳还五汤原方及其复方胶囊可使超氧化物歧化酶(sOD)活性升高，丙二醛(MDA)含量降低，从而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。邓世芳等       通过实验研究发现，芪棱汤能有效降低大鼠脑组织NO的表达，通过抑制NO的合成来保护神经细胞，并在进一步的实验中发现，益气活血方补阳还五汤在抑制cNOS过度表达，减轻cNOS的神经毒性作用，从而在发挥神经保护作用方面效果显著，而芪棱汤在抑制iNOS表达、减少NO的生成、发挥神经保护作用方面效果显著。
    对脑缺血再灌注损伤大鼠炎症因子的影响
    脑缺血再灌注损伤必然伴随着局部过度炎性反应，是造成再灌注损伤主要原因之一，浸润的炎性细胞产生的大量炎性递质，在再灌注损伤中占有重要地位，炎性递质包括细胞因子、趋化因子和黏附分子等。
    胡建鹏等  通过实验发现，由黄芪、三七、川芎等组成的益气活血方能降低ICAM-1表达，并能较好的抑制炎症因子的上游因素NF-KB的活化，而发挥抗炎症反应作用。李净等   通过实验发现，益气活血方脑络欣通能够显著降低气虚血瘀脑缺血再灌注损伤大鼠ICAM-1表达，并指出益气活血法可能是通过减少ICAM-1表达而减轻由于炎症等引起的BBB的破坏。张林等  通过实验研究发现，不同剂量黄芪配伍组成的补阳还五汤，对局灶性脑缺血模型大鼠血清细胞因子IL-1，IL-6和IL-10均有作用，随着黄芪剂量的增大，能够明显减少各中药组大鼠血清IL-1和IL-6含量，并且明显增加IL-10含量，在黄芪剂量为180g时作用最佳。吴常青等”。通过实验研究发现，补阳还五汤有效部位可显著降低缺血再灌注大鼠血清中TNF-ot、IL-IB和IL-6水平，指出其有效部位可抑制相关炎性细胞因子的分泌和表达，抑制白细胞黏附，从而减轻脑缺血再灌注后的炎症反应，保护脑组织。
    对脑缺血再灌注损伤大鼠兴奋性氨基酸的影响
    兴奋性氨基酸(EAA)包括谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)等，是中枢神经系统的主要兴奋性神经递质，生理情况下在神经元之间信息传递中发挥重要作用，脑缺血时则对缺血脑细胞具有兴奋毒性，是脑缺血再灌注损伤的重要环节。神经系统内EAA主要是谷氨酸，EAA受体有3种亚型：N．甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)、o一氨基羟甲基恶唑丙酸受体(AMPA)、亲代谢受体。其中NMDA受体是受配基调节的离子通道，对Ca2’具有通透性，可被Mg2电压依赖性阻断，NMDA受体过度兴奋介导的迟发性神经细胞损伤可能起主要作用。
    邓世芳等  在芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注后兴奋性氨基酸的影响实验研究中发现，芪棱汤能明显抑制Glu、Asp向细胞间质释放，从而减轻脑缺血程度。王业梅   等通过实验研究发现，脑缺血再灌注大鼠脑组织中Glu的含量和NRl表达显著增高，指出Glu的兴奋性毒性作用参与了脑缺血的病理生理过程，益气活血方(脑络欣通)可通过调节兴奋性氨基酸Glu和抑制性氨基酸GABA含量的平衡及减少NRl表达，防止脑缺血再灌注损伤。邱吕军等  在实验研究中，应用脑微透析-高效液相色谱技术，观察了局灶性脑缺血引起的脑内兴奋性氨基酸的动态变化过程，发现补阳还五汤能够降低脑缺血再灌注大鼠脑脊液中Glu、Asp含量，通过抑制脑缺血再灌注后EAA的升高，从而减轻脑缺血再灌注损伤。张新春等  通过实验研究发现，益气活血中药(芎芪合剂)能够抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中兴奋性氨基酸Glu、Asp含量增高，通过调整兴奋性氨基酸的含量，减轻大鼠脑缺血再灌注后脑组织损伤。杨瑞龙等  通过实验研究发现，中风膏能够抑制兴奋性氨基酸Glu的释放，减轻脑组织中Ca2’超载及脑缺血后引发的神经细胞毒性作用，从而减轻脑组织的再灌注损伤。
    对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响
    脑缺血缺氧损伤引起细胞坏死和凋亡。缺血缺氧持续时间较长引起细胞坏死，持续时间较短的轻、中度缺血缺氧则多引起细胞凋亡，脑缺血半暗带的细胞损伤主要通过细胞凋亡途径进行，因此神经细胞凋亡是脑缺血再灌注损伤的重要环节。
    刘海娟等  通过实验研究发现，补阳还五汤可通过减少脑缺血再灌注大鼠海马区神经细胞凋亡数量，抑制脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡，从而改善脑缺血后的神经功能损伤。曲友直等  通过实验研究发现，川芎嗪联合黄芪可显著抑制脑缺血再灌注后Fos蛋白高表达，明显减少神经细胞凋亡。赖真等  通过实验研究，发现黄芪加红花可显著减少凋亡细胞数、降低caspase-3表达，指出其可能通过抑制caspase．3的表达从而减少神经细胞的凋亡，达到脑保护的作用。余琴华等  通过实验研究发现，芪棱汤可减轻线粒体水肿，减少内部嵴断裂和基质颗粒的脱落，维持线粒体的基本形态，降低缺血半暗带区凋亡指数，减少cytC和caspase9的表达，从而降低细胞凋亡率，发挥神经保护作用。王宗仁等  通过实验研究发现，益气活血方药(芪丹通脉片)能增强抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达，抑制促凋亡基因Fas-L蛋白的表达，指出益气活血方药(芪丹通脉片)能够抗局灶性脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡。胡建鹏等   通过实验发现益气活血方脑络欣通能显著降低模型大鼠缺血半暗带神经细胞凋亡数，通过抑制海马CAl区Fas、FasL蛋白和FasmRNA表达，而发挥对缺血半暗带细胞凋亡的抑制作用。
    对脑缺血再灌注损伤大鼠神经可塑性的影响
    缺血性中风后神经功能在损伤后3d至2周，神经元因肿胀及线粒体损害而数量减少，突触密度迅速降低，神经信息传递的数量、范围和协调能力严重下降。神经功能缺损的自行改善与残存脑组织的可塑性有关。神经营养因子、神经抑制因子、神经递质和受体、神经特异性蛋白和神经干细胞等因素在此过程中起着重要作用。
    江爱娟等   通过实验发现，益气活血方(脑络欣通)在不同时间点使皮质缺血半暗带神经特异性蛋白GAP-43表达明显增强，指出其能有效促进缺血性卒中恢复期模型大鼠神经轴突再生，诱导神经功能恢复；并在进一步研究中发现，益气活血方脑络欣可以通过促进半暗区神经营养因子bFGF和BDNF表达，抗脑缺血后神经细胞损伤或促进神经细胞再生，诱导神经功能恢复。张运克等  。通过实验研究发现，补阳还五汤联合MSCs移植治疗能够显著增加bF．GF的表达水平，减轻脑缺血再灌注损伤。王键等  通过脑络欣通对局灶脑缺血再灌注大鼠神经干细胞及相关调节因子影响的实验研究发现，益气活血方脑络欣通显著促进Nestin蛋白、BDNF、EGF的表达，进而促进缺血后大鼠脑内NSCs的增殖分化。胡建鹏等   通过实验探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带Notch-1和Jaggedl蛋白表达的影响，发现2种复方均能通过降低缺血半暗带Notch-1、Jaggedl蛋白表达，抑制Notch信号转导通路。江爱娟等  通过实验发现，脑络欣通能够使气盛而脉络通利，恢复脑之气血供养，显著增加Nestin、NSE表达的阳性细胞数以及GFAP表达平均吸收光密度，进而促进NSC增殖与分化。孟庆萍等  通过实验研究发现，益气活血方脑络欣通能通过促进缺血侧额顶叶皮质Hes-1和Hes-5表达，增强Notch信号转导通路Hes-1和Hes-5效应分子活性功能，促进局灶性脑缺血后NSCs的增殖分化。周荣峰等  通过实验研究发现，芪棱汤可促进nestin、5一BrdU、GFAP蛋白表达，从而对缺血再灌注所导致的脑损伤起到保护作用，指出芪棱汤具有促进内源性神经干细胞增殖分化的作用。
    展  望
    益气活血法作为缺血性中风的重要治法，既符合中医气虚血瘀病机理论，又与现代医学氧自由基损伤、钙超载、兴奋性氨基酸毒性、细胞凋亡、神经可塑性等理论相吻合并且取得了一定的临床疗效。与此同时，关于益气活血法治疗缺血性中风的机制与疗效的实验研究一直在进行，并且取得了一定的成果。本文对近年来益气活血法治疗缺血性中风的实验研究的思路与方法、神经行为及大脑梗死体积、凝血纤溶系统、自由基、兴奋性氨基酸、细胞凋亡、神经可塑性七个方面。我们认为，在今后的实验研究中需要充分利用现代实验有效的检测手段，加强对益气活血法指导下的细胞凋亡和神经可塑性机制的研究，寻找最佳给药途径研究。益气活血法在缺血性中风的治疗中具有独特的优势，随着实验研究的不断深入，将会为临床更好的治疗缺血性中风奠定基础。