人参银杏复方制剂对缺氧复氧后大鼠HDB 部位ChAT表达的影响

    【摘要】 目的 研究预防性应用人参银杏复方制剂对缺氧24h复氧0、24、72h时段大鼠HDB部位ChAT表达的影响。方法 应用低压氧舱仿海拔8000m高空缺氧模型，采用免疫组织化学并结合图像分析等技术。结果 缺氧24h复氧0h组大鼠HDB部位ChAT相对含量较常氧对照组减少，复氧24h后减少更加明显，复氧72h后ChAT相对含量略有回升。预防性应用人参银杏复方制剂后ChAT相对含量在复氧0、24h时和复氧72h时均较缺氧复氧实验组相应时段增加。结论 预防性应用人参银杏复方制剂可阻止缺氧复氧后大鼠HDB部位ChAT含量的减少，对缺氧复氧后大学习记忆障碍起到改善作用。

    关键词 人参银杏复方制剂 缺氧复氧 斜角带核水平部 胆碱乙酰化酶 大鼠

    【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106（2004）13-1224-03

    The effect of renshen ginkgo extract compound on the expression

 of chAT in HDB of rat following hypoxia&reoxygenation

Zhang Zhijun，Zhou Mingming，Ni Hengjian，et al.

 Department of Neurobiology，Nantong Medical College，Nantong226001.

    【Abstract】 Objective To study the effect of ginseng ginkgo extract compound on the express of ChAT in HDB after hypoxia for24h followed by reoxygenation for0h，24h，72h.Methods The hypoxia models at a8000miter high level were established in hypobaric oxygen chamber，Using immunohistochemistry and image analysis technique.Results After hypoxia for24h followed by reoxygenation for0h and24h，the comparative quantity of ChAT in HDB was decreased.These changes were more obvious followed by reoxygenation for24h.The comparative quantity of ChAT increased alittle followed by reoxygenation for72h.In renshen ginkgo extract compound group，the comparative quantiˉty of ChAT in HDB in0h，24h and72h reoxygenation groups increased highly than that in the hypoxia and hence reˉoxygenation group in the corresponding period group.Conclusion Renshen ginkgo extract compound can hold back the decrease of ChAT in HDB，which may play a significant role in learning and memory impairment after hypoxia/reˉoxygenation.

    Key words ginsheng ginkgo compound hypoxia and hence reoxygenation HDB ChAT rat

     缺氧是老年病人常见的征象之一，也是平原世居者移迁西部高原地区所面临的困难之一，同时也是登山运动员和爱好者所需克服的困难之一。缺氧可导致人体出现一系列生理功能变化和缺氧反应症状。最早出现的生理变化是呼吸、循环和脑功能的改变，而最早出现的缺氧反应是神经症状，如头痛、头昏、恶心、呕吐、嗜睡或睡眠不良等，这些症状的出现可以认为是脑功能改变的结果 ［1］ 。中枢胆碱能神经纤维广泛分布于运动、感觉系统、脑干网状结构、边缘系统及大脑皮质，有促进学习记忆、激活脑电、维持觉醒、参与精神意志活动等重要生理功能。许多研究发现缺氧缺血后海马CA1区胆碱乙酰化酶（ChAT）含量活性明显降低，并且与缺氧缺血后学习记忆障碍有关 ［2，3］ 。本研究通过模仿高原缺氧模型，观察预防性应用人参银杏复方制剂对缺氧24h复氧0、24、72h时段大鼠HDB部位ChAT表达的影响，初步探讨人参银杏复方制剂对缺氧复氧后大鼠学习记忆障碍起到改善作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 药物

    1.1.1 药物来源 “人参银杏复方制剂”（人参银杏的合煎剂，浓度0.2g生药/ml）由上海交通大学海洋水下工程科学研究院提供。

    1.1.2 给药方法 缺氧前3天开始行腹腔注射，每天1次，用量:5ml·kg -1 ·d -1 ，最后一次在缺氧前半小时行腹腔注射。

    1.2 实验动物的分组 SD大鼠200～220g/只，雌雄不拘，南通医学院实验动物中心提供。分为:常氧对照组，缺氧复氧实验组，人参银杏复方制剂给药组，给药组及实验组又分为复氧0、24、72h组，每组5只SD大鼠。常氧对照组和缺氧复氧实验组动物腹腔注射相同剂量的生理盐水，注射方法同给药组。

    1.3 缺氧复氧损伤实验模型的制备 将SD大鼠放入低压氧舱，关闭舱门，调整舱内压力，5～6min将舱内压力渐减至相当于海拔8000m高度的空气压力（270mmHg、氧分压为56mmHg）。维持此压力24h，从而造成全脑缺氧模型，缺氧24h后将压力渐升至正常大气压，需1～2min。随即通正常空气便造成复氧损伤模型，复氧24、72h组大鼠分别存活24、72h，复氧0h组大鼠缺氧后立即麻醉灌注取脑。

    1.4 组织学方法 各组动物用复合麻醉药（2ml/kg腹腔注射）麻醉，经左心室向升主动脉灌注生理盐水150ml，继之用4%的多聚甲醛（0.1mol/L PB配制，pH7.4）450ml灌注固定，灌毕立即取脑，置于上述固定液中后固定4～6h，再移入30%蔗糖溶液（0.1mol/L PB配制，pH7.4）中，待组织块沉底后，取大鼠隔区斜角带核水平部作冰冻冠状切片，片厚30μm，隔五取一，进行免疫组化时，严格控制实验条件使不同组别之间实验条件保持一致。ChAT免疫组织化学染色:一抗为鼠抗ChAT血清（1∶1000，Chemicon），放入4℃冰箱中孵育72h;二抗为Biotin结合的羊抗鼠IgG血清（1∶200，Sigˉma），4℃冰箱中孵育过夜;三抗为ABC复合物液（1∶200，Vector），4℃冰箱中孵育过夜;最后用DAB呈色。显微镜观察细胞变化，图像分析仪计数斜角带核水平部ChAT免疫反应阳性细胞光密度值并将其转化为相对含量。