中国海南岛黎族小卫星MSY2基因座的遗传多态性

    【摘要】 目的 探讨中国海南岛黎族不同支系3个群体的小卫星Y染色体MSY2基因座的遗传多态性及群体差异。方法 应用特异引物PCR法扩增Y染色体小卫星DNA片段，再经琼脂糖凝胶电泳检测方法，对海南岛本地黎、杞黎和 亻 孝 黎三个支系的293例男性个体的MSY2基因座进行了初步分析。结果 MSY2各等位基因在黎族三个支系中显示了不同的频率，其中本地黎与杞黎之间差异无显著性，但在本地黎与 亻 孝 黎、杞黎与 亻 孝 黎之间差异都存在显著性。结论 MSY2位点可以作为一个有用的遗传标记为中国不同群体的遗传多样性研究提供可靠的数据。 亻 孝 黎群体可能有复杂的父系起源。

    关键词 小卫星 黎族 Y染色体 多态性

    【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106（2004）13-1217-02

Genetic polymorphisms of MSY2locus on li ethnic in

Haina Island，China Li Dongna，Ou Caiying，Chen Lu

Department of Biology，Hainan Medical College，Haikou571101.

    【Abstract】 Objective To study the genetic polymorphism and population diversity of MSY2locus on three Li ethnic subgroups living in Haina Island，China.Me thods MSY2locus was detected by PCR amplification and agarose gelelectrophoresis，in293unrelated males of three Li ethnic subgroup populations in Hainan Island of China was studˉied by PCR amplification and agarose gel electrophoresis.The three Li ethinc subgroup populations are Bendi-Li，Qi-Li and Ha-Li.Results The results showed that the MSY2ˇ3and the MSY2ˇ4were found at different frequenˉcyin three Li subgroups from Haina Island.There are significant differences between allele frequencies in Benti-Li group and Ha-Li group（P<0.01），Qi-Li group and Ha-Li group（P<0.05）.Conclusion These results can be explained by the complex origins of Ha-Li group.As a useful polymorphic marker in Chinese populations，MSY2can provide reliable evidence in evolution study.

Key words minisatellite ethnic Li Y chromosome polymorphisms

    人类Y染色体除拟常染色体区外，大部分不发生重组，并以单倍型形式由父传子，非重组区的DNA序列保存了发生在父辈的所有突变记录，这些突变正是形成Y染色体非重组部分DNA多态的根源。为此人们可以通过对人类群体中Y染色体非重组部分DNA多态的比较研究，追溯过去发生的男性迁移，重构父系进化史，探讨人类起源问题 ［1，2］ 。近年来，Y染色体DNA多态位点除微卫星STR和单核苷酸多态性SNPs外，小卫星（minisatellites）基因座也逐渐地被发现和报道 ［3，4］ 。小卫星MSY2是已知的小卫星之中重复单位最长、且多样性最低的。它的重复单位长度为100bp左右，MSY2中的每个重复单位都包含一个回文结构CCˉTAGG，可形成发卡结构。在人类，MSY2只存在两种等位基因，分别由4个重复单位和3个重复单位构成，既MSY24和MSY23，其频率分布具有人种差异和地理区域差异。MSY2具有中等程度的变异，被认为是介于Y-SNP和MSY1、Y-STR之间的Y-DNA标记，是人类进化研究中具有独特优势的Y染色体基因座，而且是研究中国人群的信  息度较高的位点 ［4］ 。为探索海南黎族不同支系中的Y染色体小卫星MSY2的多态分布状况，我们利用特异引物PCR法对中国海南省黎族的三个支系共293例进行了筛查。

    1 材料与方法

    1.1 样品 根据“知情同意”原则，293份血液样本分别采自海南省乐东黎族自治县千家镇，海南省五指山市毛阳镇和海南省白沙黎族自治县南开乡，无血缘关系，家系以3代以上为同一黎族支系的 亻 孝 黎、杞黎和本地黎健康男性个体，EDTA抗凝，用酚/氯仿法提取DNA。

    1.2 MSY2的PCR扩增与检测 （1）引物序列MSY25′-CTG GCTTTG GGG ACG TAG TA-3′，MSY25′-CTG CGC TTT ATG AGC ATA CG-3′。（2）PCR扩增与检测方法PCR扩增按Bao等人 ［4］的方法进行。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。12.5μl反应体系含:基因组DNA5～50ng，一对引物各1μM，DNTP各0.2mM，MgCl 2 1.5mM，1×Bioline buffer，Taq DNA聚合酶0.5U。反应条件:94℃变性3min，然后33周期循环:94℃变性35s，64℃退火35s72℃延伸40s，最后72℃延伸3min。PCR扩增结束后，2%琼脂糖凝胶（离子强度1×TBE）电泳，100V恒电泳30min，用凝胶自动分析和成像系统电泳检测扩增结果。

    2 结果

    2.1 小卫星基因座MSY2（DYS440）多态分析结果 中国海南岛本地黎、杞黎和 亻 孝 黎三个人群中Y染色体特异的小卫星基因座MSY2等位基因频率分布见表1，通过两两比较发现，MSY2的基因频率分布在本地黎与杞黎之间差异无显著性（χ 2 =2.836，P>0.05），本地黎与亻 孝 黎之间差异有非常显著性（χ  =14.887，P<0.01），杞黎与 亻 孝 黎之间存在明显差异（χ 2=5.610，P<0.05），MSY2PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果见图1，显示了本研究在黎族三个人群中观察到的MSY23和MSY24两种基因型。图1 小卫星MSY2的PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果

    3 讨论

    黎族是一个历史悠久，源远流长的民族，是海南岛最早的居民 ［5］ 。史料记载显示，黎族与我国南方操汉藏语系壮侗语族诸语言的民族有密切的关系，是我国古代南方的越族发展而来的，与“百越”的一个分支—骆越有密切的族属关系。根据方言、生活习惯、文化特征以及人种学上的差异，又分为: 亻 孝 黎、杞黎、本地黎、美孚黎和加茂黎5个亚群 ［6］ 。对于这五个支系的起源与亲缘关系的研究一直是考古学家、人类学家们关注的热点，但一直没有定论。我们通过对海南岛本地黎、杞黎、 亻 孝 黎三个群体的293个男性个体的筛查结果显示，在黎族群体中MSY24等位基因是最常见的等位基因， 亻 孝 黎群体的MSY23的出现频率为19.6%，杞黎群体MSY23的出现频率为7.2%，本地黎群体MSY23的出现频率仅为1.1%。MSY2的多态分布在本地黎与杞黎之间无统计学差异（P>0.05），但在本地黎与 亻 孝 黎之间差异存在着非常显著性（P<0.01），杞黎与 亻 孝 黎之间差异也存在显著性（P<0.05）。显然，杞黎与本地黎之间存在较近的亲缘关系，这与Saitou和杜若甫等人 ［7，8］ 通过对本地黎、杞黎人群的红细胞血型、血清蛋白、酶和白 细胞抗原等经典遗传学指标的检测分析认为，本地黎与杞黎人群的血缘关系很近的结论是一致的。值得注意的是，同属汉藏语系壮侗语族黎语支的 亻 孝 黎群体与其他两个支系在此位点却表现出较大的差异性。这种差异可能来自 亻 孝 黎群体首批登陆海南岛的远古祖先，也可能有另一种原因，那就是 亻 孝 黎群体与其他不同的人群有基因交流。这种可能性显然是不能排除的。据记载， 亻孝 黎是海南岛黎族五个支系中人数最多的一个支系，“ 亻 孝 ”是黎语中的音译，原为海南岛中心地区的黎族对外围地区黎族的称呼。在海南岛， 亻 孝 黎的居住地区也多在黎族地区的边缘地带，与汉人接邻或杂居于汉人之中。由于与汉人接触较多，关系密切，风俗习惯上受汉人影响也较深，为此，也被称为“熟黎” ［9］ 。据史书清·《涯州志》记载，在海南岛以黎族汉化为主流的黎汉民族双向同化的现象，自宋以来一直延续到明清两代达到高峰。尤其在黎汉杂居的区域，部分汉人迁入黎族部落与黎人共同生活，逐渐黎化。汉族基因有相一部分流入黎族之中。为此，我们可以推测， 亻 孝 黎群体与其他两个支系的显著性差异可能是由于与汉族群体基因交流的结果。这一推测已通过我们对6个Y-STR基因座的检测与分析得到进一步的证实（有关内容另文发表）。