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【关键词】 复方氨基酸注射液；动态比浊法；细菌内毒素；干扰试验；鲎试剂
【中图分类号】 R576
１ 材料与方法
１．１ 材料与试剂
细菌内毒素检查用水(BET水)(批号030510，规格10 ｍｌ／支，厦门鲎试剂厂)；鲎试剂(动态浊度法鲎试仪专用，批号030725，规格015 ｍｌ／支，厦门鲎试剂厂)；细菌内毒素工作品(批号030610，规格10EU／支，厦门鲎试剂厂)；复方氨基酸注射(3AA)批号200304012，200304121，200305093，200305161，200306222，规格250ｍｌ／瓶，湖北峰江)；BET３２型细菌内毒素测定仪(天津大学无线电厂)；ZH２自动漩涡混合器(天津药典标准仪器厂)；实验所用玻璃器皿经铬酸洗液处理后，再经250℃干烤1h以上，除去外源性内毒素。
１．２ 方法与结果
１．２．１ 实验条件：检测温度为37℃；检测波长为660 ｎｍ；最长检测时间为8400 ｓ；
１．２．２ 细菌内毒素限值(L)的确定［１］：按公式Ｌ＝Ｋ／Ｍ，Ｋ为静脉注射给药的细菌内毒素阈剂量＝５０ ＥＵ·ｍｌ－１，Ｍ为病人每千克体重每小时最大给药剂量。本文采用家兔热原剂量M＝１０ ｍｌ·ｋｇ－１·ｈ－１，则复方氨基酸注射液(3AA)细菌内毒素限值(L)为05 ＥU·ｍｌ－１。
１．２．３ 标准曲线制备及可靠性：取细菌内毒素工作品1支加BET水10 ｍｌ，用封口膜封口，置漩涡混合器上混合15 ｍｉｎ，进行10倍稀释，然后2倍稀释，且各步置漩涡混合器上混合30 ｓ，使其最终内毒素浓度为10、０５、０２５、０１２５、００６２５、００３１２、００１５６ＥＵ·ｍｌ－１稀释系列，各取015 ｍｌ分别加到预先加有015 ｍｌ鲎试剂的反应管内，混合均匀，插入浊度仪进行检测，每一浓度平行3管，同时用BET水做2管阴性对照(NC)，结果见表1。
表1 标准曲线的可靠性(略)
１．２．４ 供试品溶液配制及干扰试验：①供试品最大有效稀释倍数(MVD)计算：按公式ＭＶＤ＝Ｌ×Ｃ／λ，Ｌ为复方氨基酸注射液(3AA)的内毒素限值05 EU·ｍｌ－１，λ为标准曲线最低浓度00156 EU·ｍｌ－１，Ｃ为供试液浓度，当L以EU·ｍｌ－１得样品试验时最大有效稀释倍数(MVD)为32倍。②干扰预试验：将3批复方氨基酸注射液(3AA)用BET水稀释为2、4、6、8倍溶液，每个浓度分别取015 ｍｌ加015 ｍｌ鲎试剂作为样品检查(Eｔ）：同时另取5管，进行同样倍数稀释，并在各浓度溶液中强化0125 ＥＵ·ｍｌ－１的内毒素作为样品阳性对照液(Es)，分别取上述各液015 ｍl加入预先加有015 ｍl鲎试剂的反应管内进行检测，每个浓度重复3管，并设阴性对照，分别测定各浓度样品液及阳性样品的内毒素含量Et和Es，按下式计算回收率(R)。R(Es－Ｅt)／０１２５×１００％，结果见表2。
表2 供试品干扰预实验（略）
注：批号200304012的回归方程为１ｇＴ＝３０６６４９－０３６０６１
ｌｇＣ，ｒ＝－０９８９５
批号200304121的回归方程为１ｇＴ＝３０６６75－０３5911
ｌｇＣ，ｒ＝－０９９37
批号200305093的回归方程为１ｇＴ＝３０６６２４－０３６１２１
ｌｇＣ，ｒ＝－０９９１０
根据中国药典2000年版规定，如果内毒素的回收率在50％～２００％之间时，则供试品在该试验条件下不存在干扰规定。表2结果表明，3批供试品在各倍稀释时均无干扰作用，4倍时回收率较好，可作为定量检测的浓度。
１．２．４．３ 供试品干扰试验与家兔法检查：取5批复方氨基酸注射液用BET水稀释4倍，并制备样品阳性对照，每个浓度重复3管，并做阴性对照，放入检测仪检测，同时进行家兔法检查，结果阴性对照阴性，其他数据结果见表3。
表3 干扰试验样品批号（略）
2 讨论
实验结果表明：各倍稀释液对鲎试剂不存在干扰作用，4倍可以得到很好的回收率，且动态浊度法进行细菌内毒素定量检测，使用计算机全过程监控，样品反映情况能在显示屏上直观地反映出来，与传统的家兔法相比，避免了动物个体差异及人为判断误差所造成的假阳性或假阴性结果，具有灵敏、简便、结果准确等优点，其检测结果与家兔热原检查结果一致。因此，用动态浊度法检测复方氨基酸注射液(3AA)中细菌内毒素含量是可行的。
参 考 文 献
１． 夏振民．药品细菌内毒素检查的限值［Ｊ］．药物分析杂志．１９９５，１５（３）：５４
２． 中国药典．二部［Ｓ］．２０００附录 204
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（收稿日期：2005０２０１）