p27在胃癌中的表达及意义

　　【摘要】  目的  观察p27蛋白在胃癌中的表达，探讨p27蛋白表达与胃癌发生发展、临床病理特征之间的关系。方法  采用SP免疫组化方法检测p27蛋白在60例胃癌组织、17例异型增生和15例正常胃粘膜中的表达。结果  p27蛋白在正常胃粘膜、异型增生和胃癌中的阳性表达率分别为100%，５８82%，３８33%，表达差别均有显著性(Ｐ＜０05)；早期胃癌与异型增生组相比阳性率无明显差异性(Ｐ＞０05)；进展期胃癌p27蛋白表达显著低于早期胃癌(3182% vs 5625%，Ｐ＜０05)；且随着淋巴结转移、分化程度降低、浸润深度加深、器官转移等，p27蛋白表达阳性率逐渐降低(P＜005)。结论  p27蛋白表达在胃癌发生发展中进行性下调，其可作为判断胃癌病理生物学行为的客观指标。

　　【关键词】  胃肿瘤；p２７蛋白；免疫组织化学

　　Expression of PTEN enconding product in gastric carcinoma and its significance

　　GUO Guanghong  ＭＡ　Zhenbin  BIAN Ruimin  et al

　　Affiliated Hospital of Binzhou Medical College,Binzhou  256603

　　【Abstract】  Ｏbjective  To illustrate the significance of expression of p27 protein in carcinoma of the stomach and to evaluate its relationship with occurrence and clinicopathological features of the disease.Ｍethods  Ｆormalinfixed and paraffinembedded tissues from 60 cases of gastric carcinoma,17 cases of gastric dysplasia and 15 cases of normal gastric  mucosa were evaluated for the expression of p27 protein by SP immunohistochemistry.Results  The positive rates of p27 protein were 100%,5882%，and 3833% respectively in normal gastric mucosa,dysplasia,and gastric carcinoma,with the difference of p27 gene expression significant (Ｐ＜005)；however, the  p27 protein was less expressed in advanced gastric carcinoma than  in early one  (3182% vs 5625%，P＜005)．Ｔhe positive rates of p27 protein decreased with lymph node metastasis,poor differentiation,deep invasion,apparent metastasis,and clinical staging (Ｐ＜０05)．Ｃonclusion  Ｔhe expression of p27 protein is downregulated in the process of gastric carcinoma,and p27 may be an objective marker for pathological and biological behavior of gastric carcinoma.

　　【Ｋey words】  stomach neoplasms,p27 protein,immunohistochemistry

    目前认为肿瘤的发生是一个涉及多种基因突变的积累，包括癌基因、抑癌基因及维持基因组稳定的基因，通过一定的顺序和相互的协同作用，多因素多步骤的发展过程，是正常染色体多重损伤的复杂过程，其最终表现均为细胞周期调控机制紊乱，分化受阻，这也是当前肿瘤研究的热点之一。p27是细胞周期重要的负性调控因子，其缺失与肿瘤的发生发展有关［１２］。我们通过对胃癌组织中p27蛋白表达的检测，进一步探讨其与胃癌的关系。

　　１  临床资料

　　１．１  一般资料
 
　　收集2004年1月—2004年6月滨州医学院附属医院胃镜中心活检标本正常胃粘膜15例，重度不典型增生17例；同时收集同期普外科胃癌术后大体标本60例，其中男性40例，女性20例，中位年龄为54岁。临床病理分期：早期胃癌19例，进展期胃癌41例。分化程度：高中分化腺癌22例，低分化38例。转移情况：淋巴结转移22例，器官转移23例。浸润深度：肌层26例，达浆膜及浆膜外者34例。临床分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期6例，Ⅲ期22例，Ⅳ期14例。所选胃癌病人均行胃大部切除或全胃切除加淋巴结清扫术，术前均未行化放疗，并且排除胃癌家族史。

　　１．２  免疫组织化学 

　　将收集标本常规10%中性福尔马林缓冲液固定、石蜡包埋，4 μm连续切片。小鼠抗人p27单克隆抗体(即用型)，二步法染色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。用PBS代替一抗作阴性对照。

　　１．３  结果判断标准 

　　根据着色深浅程度及阳性细胞数量(%)，由两名经验丰富的病理科医师在400倍光镜下分别随机选择10个视野分析，并单独作出检验评估。对表达强度进行半定量评估分级，不着色为0分，浅黄色为1分，深黄色为2分，黄褐色为3分；无阳性细胞数为0分，阳性细胞≤25%为1分，26%～５０％为2分，51%～７５％为3分，＞７５％为4分。两种分数相加，0分为阴性“－”，1～２分为弱阳性“＋”，３～５分为中度阳性“”，6～７分为强阳性“”。

　　14  统计学处理 

　　用χ２检验和Fisher精确概率法比较各组间比率的差异，应有Spearman等级相关分析等级资料。

　　２  结果

　　２．１  p27蛋白在正常胃粘膜组织、异型增生和胃癌中的表达  p27蛋白在正常胃粘膜组织和异型增生中的阳性率分别为100%和5882%，均显著高于胃癌组织的阳性率3833%(Ｐ＜０05），且正常组织显著高于异型增生(Ｐ＜005；表1)。表1  p27在不同胃粘膜组织中的表达（略
）  

　　２．２  p27蛋白表达与胃癌临床病理因素的关系  见表2，表3。p２７蛋白表达水平与性别、年龄、肿瘤大小、部位无相关性(Ｐ＞005)；进展期胃癌PTEN蛋白阳性率为3182%，显著低于早期胃癌的阳性率5625%(P＜０05)，其中异型增生与早期胃癌相比差异无显著性(Ｐ＞０05)；p２７在高中分化和低分化癌组织的表达阳性率分别为5455%和2894%，差异有显著性(P＜005)；在浸润深度达肌层组阳性率为5385%，显著高于浸润达浆膜及浆膜外组的2647%(P＜０05)。淋巴结转移：N0 12例(5455%)，N1 6例(3750%)，N2 4例(2667%)，N3 1例(1429%)。N1、Ｎ２、Ｎ３间阳性率无显著差异性(Fisher精确概率法P＞０05)，但N0阳性率显著高于N1~N3(Ｐ＜005)，且p27与淋巴结转移等级相关系数r’s＝－02785，P＜005。在伴有器官转移的23例胃癌中，p27蛋白阳性率为2174%(5／２３），显著低于无器官转移者(4865%，18／３７，Ｐ＜０05)。PTNM分期：Ⅰ期5例(6250%)，Ⅱ期8例(5000%)，Ⅲ期7例(3182%)，Ⅳ期3例(2143%)，其中Ⅰ期与Ⅱ期间阳性率亦无显著差异性(Fisher精确概率法P＞005），Ⅰ／Ⅱ期显著高于Ⅲ／Ⅳ期(Ｐ＜０05)。Ⅲ期与Ⅳ期间阳性率也无显著性差异（Fisher精确概率法P＞005），但阳性率Ⅰ/Ⅱ期显著高于Ⅲ/Ⅳ期（P＜005），p27与PTNM等级相关系数r’s＝－02900，P＜０05。表2  胃癌中p27蛋白表达与胃癌临床病理因素的关系临床病理参数（略）表3  胃癌中p27蛋白表达与PTNM分期（略）

　　３  讨论

　　p２７蛋白是一种新发现的分子量为2７kD的耐热性细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂(cyclin dependent kinase inhibitor,CDKI)，通过体内外试验证实，p27主要是通过其C末端抑制CDK4Thr172和CDK2Thr160的磷酸化过程，从而抑制cyclinＣＤＫ４／ＣＤＫ２前活性状态复合物的激活发挥对cyclinＣＤＫ的抑制作用［３］。p27对CDK的抑制作用有两方面，一方面p27能抑制已结合到cyclin并被激活的CDK活性；另一方面p27也可以抑制CDK的激活过程，最终抑制细胞周期G１→Ｓ的转变，故目前认为p27是一个抑制因子。p27蛋白作为一种非特异性CDKI，以化学计量的方式抑制不同的cyclinＣＤＫ复合物，且抑制细胞增殖的关键是其在细胞内的游离量而非总量［４］。虽然p27蛋白在细胞内也能抑制cyclinDＣＤＫ４复合物活性，但主要抑制cyclinEＣＤＫ２，只有当p27蛋白的水平超过与cyclinDＣＤＫ４复合物结合的水平时才表现出对cyclinEＣＤＫ２的抑制活性，使细胞不能通过G１期。且这种功能依赖于其蛋白表达水平，而非基因突变。研究表明，p27的改变是胃癌发生发展的一个重要分子事件［１，２］。本试验显示胃癌组织、异型增生中p27蛋白表达相对于正常胃粘膜上皮组织呈明显下降(Ｐ＜０05)，而早期胃癌与异型增生相比，差异无显著性(P＞０05)。综合试验结果及文献报道，可以认为p27蛋白是胃癌的负相关因子，在胃粘膜癌变过程中发生作用，其表达下降可能是胃癌形成的早期分子事件。

　　本试验表明，p27蛋白表达的下调与胃癌的性别、年龄、肿瘤部位无相关关系(P＞005)，而与临床病理分期、浸润深度、淋巴结转移、器官转移、分化程度及临床分期有显著的相关性(P＜005)，且PTEN表达与淋巴结转移和PTNM分期呈等级负相关。这与国外的研究相一致［５~７］。作为肿瘤分化程度、粘附、浸润、转移的负性因子，胃癌中p27蛋白的表达可作为胃癌进展和恶性程度的指标。

　　参  考  文  献

　　１．　Sgambato A,Migaldi M,Leocata P,et al.Loss of p27 Kip1 expression is a strong independent prognostic factor of reduced survival in N0 gastric carcinomas［Ｊ］．Ｃancer,2000,89(11):2247

　　２．　Feakins RM,Mulcahy HE,Quaglia A,et al.p27(Kip1) loss does not predict survival in patients with advanced gastric carcinoma［Ｊ］．Ｃancer,2000,89(8):1684

　　３．　Kwon TK,Nagel JE,Buchholz MA.et al.Characterization of the murine cyclindependent kinase inhibitor gene p27 Kip1［Ｊ］．Ｇene,1996,180(12)：113

　　4．　Ｒeynisdottir I,Massague J.The subcellular locations of p15  (Ink4b) and p27(Kip1) coordinate their inhibitory interactions with CDK4 and CDK2［Ｊ］．Ｇenes Dev,1997,11(4):492

　　５．　Ｍori M,Mimori K,Shiraishi T,et al.p27 expression and gastric carcinoma［Ｊ］．Ｎat Med,1997,3(6):593

　　６．　Ｙasui W,Naka K,Suzuki T,et al.Expression of p27,cyclin E and E2F１　in primary and metastatic tumors of gastric carcinoma［Ｊ］．Ｏncol Rep,1999,6(5):983

　　７．　Ｓakakura C,Hagiwara A,Nakanishi M,et al.Differential gene expression profiles of gastric cancer cells established from primary tumour and malignant ascites［Ｊ］．Ｂr J Cancer,2002,87(10):1153

　　1 滨州医学院附属医院妇产科  滨州市  256603；2 滨州医学院附属医院消化内科；
3 滨州医学院附属医院药剂科

　　（收稿日期：20050120）