P16、 cyclinD1 和CDK4 在膀胱移行细胞癌中表达的临床意义

【摘要】  目的 探讨细胞周期调控系统相关因子在膀胱移行细胞癌中表达的临床意义。方法 应用免疫组化染色方法检测P16、 cyclinD1 和CDK4在92例膀胱癌中的表达，运用χ2检验统计分析。结果 ① 在膀胱癌组织中P16表达下调； cyclinD1和CDK4表达上调。②92例膀胱癌中，P16保留表达率随分级、分期的增加而下降，在复发肿瘤中下降；③92例膀胱癌中，cyclinD1 和CDK4保留表达率随分级、分期的增加而增加，在复发肿瘤中增加。结论 P16、 cyclinD1 和CDK4的表达和膀胱移行细胞癌的生物学行为密切相关，在膀胱癌的发生发展中有重要意义。

【关键词】  膀胱移行细胞癌 细胞周期蛋白 细胞周期蛋白依赖激酶 细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子

   The role of expression of P16，cyclinD1 and CDK4 in transient cell cancer of bladder

    LI  Qingyuan  LIU Shaoqing  CHI Yuyou

    Department of Urological ,Affiliated Hospital of Binzhou Medical University,Binzhou  256603

    【Abstract】  Objective  To probe into the relation between the expressions of  P16，cyclinD1 and CDK4 in the transient cell cancer of bladder and biological behavior of the bladder cancer.methods  All of specimen of 92 cases of transient cell cancer of bladder and 13 cases normal tissue were formalized, capsulated with  paraffin , sliced up with interval of 4 μm, analysised with method of HE and immunohistochemistry，examined with χ2. Results  ①Expression of P16 decreases in bladder cancer . Expression of cyclinD1 and CDK4 increases in bladder cancer .②In the 92 case of bladder cancer, expression of P16 decreases with grade and stage of tumor,expression of P16 decreases in recurring cases.③In the 92 case of bladder cancer, expression of cyclinD1 and CDK4 increases with grade and stage of tumor, expression of cyclinD1 and CDK4 increases in recurring cases.Conclusion  The rate of reserve expression of P16，cyclinD1 and CDK4 in the transient cell cancer of bladder is related with biological behavior of the bladder cancer.

    【Key words 】  transient cell cancer of bladder，P16，cyclinD1，CDK4

    为进一步探讨其在膀胱移行细胞癌中表达的改变，本文采用免疫组化的方法系统的研究了P16 、cyclinD1 和CDK4 在膀胱移行细胞癌中的表达的临床意义。

    1  资料与方法

    1．1  临床资料  选择本院2000年—2006年手术切除并经病理证实的膀胱移行细胞癌石蜡标本92例。男62例，女30例；年龄37～78岁，平均53岁。初发53例，复发39例；肿瘤直径≥2cm者63例，＜2 cm者29例;单发43例，多发49例。病理分级按WHO标准，I级22例，II级43例，III级27例。临床分期按UICCTNM标准，Ta 10例，T1 13例，T2 32例，T3 22 例，T4 15例。13例对照标本取至前列腺增生症患者开放手术标本。

    1．2  方法  所有的标本都经过10%福尔马林液固定、石蜡包埋、4 μm连续切片，分别进行HE染色，P16 、cyclinD1 和CDK4单克隆抗体的免疫组化染色。按说明书操作。

    1．3  结果判断  P16和CDK4主要分布于膀胱移行上皮和肿瘤细胞的胞浆中，部分位于胞核；cyclinD1则主要分布于胞核，少数位于胞浆。细胞核染成棕黄色或棕褐色，胞浆染成浅黄色或棕黄色为阳性细胞。每张染色切片先用低倍镜（10×10）选择10个有代表性的视野，再换用高倍镜（10×40）计数每一视野中阳性细胞数占所有细胞数的比例，＜10%为缺失表达，＞10%为保留表达。标本皆由两名医师分别独立完成，符合率为97.8%。

    1．4  统计方法  统计其保留表达例数和缺失表达例数，采用SPSS11.0软件包进行χ2检验。

    2  结果

    13例正常膀胱黏膜和92例膀胱肿瘤组织P16、cyclinD1 和CDK4表达见表1。

    3  讨论

    细胞周期的紊乱及调控异常是细胞异常增殖和表1  P16，cyclinD1 和CDK4的表达和膀胱移行注：与正常膀胱黏膜相比，● χ2=5.815,P＜0.025，○χ2=4.286,P＜0.05，◎ χ2=8.643 ,P＜0.005；不同分级相比，▲ χ2=16.560  P＜0.005，△ χ2=20.550，P＜0.005，▽ χ2=22.469，P＜0.005；与Ta～T1相比， ◆ χ2=7.848,P＜0.01， ◇ χ2=7.068,P＜0.01，＃ χ2=7.670,P＜0.05；与初发相比，■ χ2=7.623,P＜0.01 ，□ χ2=4.843,P＜0.05，* χ2=8.919,P＜0.005。

    肿瘤发生的生物学基础。细胞周期系统调控细胞周期进程的机制涉及细胞周期蛋白、细胞周期蛋白依赖激酶家族CDKs以及CDKs抑制蛋白CKIs的活性表达和调控［1］。其中，Cyclin D1控制细胞增殖周期G1S期的转换，正常组织中表达较低或不表达，增殖较快的组织和肿瘤组织中表达较多或过表达，对肿瘤的形成有直接作用［2］。CDK4为细胞周期素依赖性蛋白激酶，对细胞周期调控点的调控中起重要作用，已有的研究证实，CDK4在某些肿瘤和细胞系中有明显的异常表达［3］。P16为CDK抑制因子，与cyclins D1CDK4复合体结合，参与诱导G1期细胞阻滞［4］。P16 和cyclinD1 竞争性结合CDK4，共同完成细胞周期的调节,P16 、cyclinD1 和CDK4在膀胱癌中表达的改变，有助于进一步了解膀胱肿瘤的分子生物学行为，能够对膀胱癌的临床诊断治疗及预后提供参考［5］。

    本研究通过对13例正常膀胱黏膜组织和92例膀胱移行细胞癌的P16 、cyclinD1 和CDK4的免疫组化结果研究发现，在正常膀胱黏膜组织中，cyclinD1 和CDK4微量表达（ 15.4 %、7.7 %），而P16蛋白呈现高水平表达（ 92.3%）。而在膀胱移行细胞癌组织中，P16的表达水平均普遍降低，并且和膀胱癌的分级分期呈明显负相关，P＜0.05 ，复发肿瘤表达较低，P＜0.05。cyclinD1 和CDK4的表达水平均普遍升高，并且和膀胱癌的分级分期呈明显正相关，P＜0.05 ，复发肿瘤表达较高，P＜0.05。

    cyclinD1 和CDK4的过度表达和P16蛋白的表达下降可能引起细胞异常增殖和分化失控，最终导致肿瘤的发生，其表达水平的变化，可能作为膀胱癌生物学行为的指标，为临床治疗和预后提供参考依据［7］。由于P16 、cyclinD1 和CDK4在G1检查点处起着重要作用，通过抑制cyclinD1 和CDK4的过度表达和促进P16蛋白的表达可使细胞增殖阻滞于G1期，有助于抑制细胞周期的增殖和分化，达到抑制肿瘤增生的作用［8］。因此，研究P16 、cyclinD1 和CDK4表达具有重要意义。

【参考文献】
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［4］　Raspollini MR, Nesi G, Baroni G,et al.p16(INK4a) expression in urinary bladder carcinoma［J］. Arch Ital Urol Androl，2006，78(3):97100.

［5］　Reznikoff CA, Belair CD, Yeager TR, Savelieva E,et al.A molecular genetic model of human bladder cancer pathogenesis［J］. Semin Oncol，1996，23(5):571584.

［6］　Wikman H, Kettunen E. Regulation of the G1/S phase of the cell cycle and alterations in the RB pathway in human lung cancer［J］. Expert Rev Anticancer Ther，2006，6(4):515530.

［7］ Khwaja F, Djakiew D. Inhibition of cellcycle effectors of proliferation in bladder tumor epithelial cells by the p75NTR tumor suppressor［J］. Mol Carcinog，2003，36(3):153160.

作者单位：滨州医学院附属医院泌尿外科 滨州市 256603