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【摘要】 目的 研究抑癌基因p53和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）在子宫颈癌中的表达特点，并探讨其与病理分级的关系。方法 应用免疫组织化学ElivisionTM二步法检测35例宫颈癌及30例正常宫颈组织中p53及PCNA的表达情况，并结合病理分级进行分析。结果 ①P53蛋白在宫颈癌组织中的表达率为85.71% (30 /35)，明显高于在正常宫颈组织中的表达率6.67% ( 2 /30) ，P = 0.001；②P53蛋白阳性表达率与宫颈癌组织的病理学分级有关，P53在宫颈癌Ⅰ级中的阳性表达率57.14% （8 /14）明显低于Ⅱ级86.67% （13/15) 和Ⅲ级100.0% (6/6) ，P＜0.05；③宫颈癌组织PCNA阳性表达率Ⅰ级６４.２９％明显低于Ⅱ级９３.３３％和Ⅲ级100.0%,P＜0.05。结论 p53 基因突变在宫颈鳞癌发生中起重要作用，p53及PCNA检测对于研究宫颈癌的发生、发展和评估子宫颈癌恶性程度具有重要意义。
【关键词】 抑癌基因p53；PCNA；宫颈癌；免疫组织化学
Expression and clinical significance of p53 and PCNA in cervical carcinoma
BAO Chunmei
Department of Obstetrics and Gynecology，People's Hospital of Dongying, Dongying 257091
【Abstract】 Objective To study the expression of p53 and proliferating cell nuclear antigen ( PCNA) proteins in primary cervical carcinomas and its clinic significance.Methods The expression of p53 and PCNA proteins in 35 cases with cervical carcinomas and 30 cases of normal cervical tissues was detected by supersensitive ElivisionTM immunohistochemical method.Results ①p53 positive expression rate in cervical carcinomas 85.71% ( 30 /35) was significantly higher than that in normal cervixes 6.67% ( 2 /30)，P= 0.001.②p53 expression is correlated with the differentiation state and pathologic grades.The positive expression rate of p53 in the cervical carcinomas of grades Ⅰ 57.14% (8 /14) was significantly lower than that in the cervical carcinomas of grades Ⅱ 86.67% (13 /15) and grades Ⅲ 100.0% (6 /6)，P＜0.05.③The positive rate of PCNA in the cervical carcinoma of grade Ⅰ 64.29% was signifi cantly lower than that in the grade Ⅱ 93.33% and grade Ⅲ 100.0%,P＜0.05.Conclusion Our data indicate that the alteration of p53 is involved in cervical carcinoma.Over expression of both p53 and PCNA may play important roles in the tumour genesis, progression and malignant behavior in cervical carcinomas. The detection of p53 proteins and PCNA can be used to evaluate malignant degree and prognosis of the cervical carcinoma.
【Key words】 gene p53,PCNA, cervical carcinoma, immunohistochemistry
宫颈癌是严重危害妇女健康的常见恶性肿瘤之一，占女性生殖系统恶性肿瘤的首位。国内外大量研究显示，肿瘤的发生、发展及预后与肿瘤抑制基因p53和增生细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）活性密切相关［1，2］。目前有关p53基因及PCNA表达在子宫颈癌中的改变研究较少，我们通过对子宫颈癌组织和正常子宫颈组织中p53基因及PCNA表达进行检测，旨在探讨二者与宫颈癌的关系及临床病理意义。
1 资料与方法
1.1 标本来源 实验组收集2001年1月—2008年12月我院病理科存档的原发性宫颈癌石蜡包埋标本共35例，其中宫颈鳞癌30例，宫颈腺癌5例。年龄在28～72岁，平均年龄49.1岁，中位年龄50.2岁，病理组织学分级按WHO分级标准：Ⅰ级14例，Ⅱ级15例, Ⅲ级6例；所有患者术前均未经放射线及化学药物治疗。对照组选取30例正常宫颈组织，来源于同期存档的因子宫肌瘤手术切除的宫颈标本。实验所用组织均经过10%中性甲醛固定，石蜡包埋，常规HE切片，经病理学确诊后，连续4 μm切片备用。
1.2 实验方法 采用ElivisionTM二步法，具体步骤按说明书进行。单克隆PCNA抗体购于北京中山公司，p53抗体福州迈新生物技术开发公司， DAB显色，苏木精复染；以TBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定 ①P53蛋白阳性定位主要在细胞核，也可定位在细胞质，胞核出现棕黄色为染色阳性细胞。按1996年全国免疫组化技术与诊断标准化专题研讨会意见，以阳性细胞数＜25%为阴性(- )、25% ～50%为弱阳性( + ) 、50% ～70%为阳性( ++ ) 、＞70%为强阳性（+++）。具体依染色细胞数及强弱分类，阴性( - )：阳性细胞数＜25% ，染色较淡；阳性( + ～ +++ ) ：阳性细胞数＞25%或＞50% ，染色较强、清晰。②PCNA阳性定位于细胞核，胞核出现棕黄色为阳性细胞。
1.4 统计学处理 采用DPS数据处理系统（8.01版本），单向有序资料采用秩和检验，率的比较用χ2检验。
2 结果
2.1 P53蛋白在宫颈癌组织的表达率分别为85.71% (30 /35)，明显高于在正常宫颈组织中的表达率6.67% ( 2/30)，两者比较，差异有统计学意义，χ2 = 11.814，P = 0.001。
2.2 P53蛋白表达与宫颈癌分级的关系 随着宫颈癌病理学分级的升高P53蛋白阳性表达率增高，Hc=5.4731，P=0.0193,差异有统计学意义(表1) 。
表1 P53蛋白表达与宫颈癌分级的关系分级n阳性阴性阳性率（%）Ⅰ级148657.14Ⅱ级1513286.67Ⅲ级660100.00
2.3 PCNA表达与宫颈癌分级的关系 PCNA阳性率随宫颈癌级别升高而增高，Hc=5.7087,P=0.0221,差异有统计学意义(表2) 。
表2 PCNA表达与宫颈癌分级的关系分级n阳性阴性阳性率（%）]Ⅰ级149564.29Ⅱ级1514193.33Ⅲ级660100.00
3 讨论
目前认为，细胞癌变在基因水平上的变化，一方面是癌基因的激活，另一方面是抑癌基因的失活。p53分为野生型和突变型，野生型p53是抑癌基因，对于维持细胞基因组的完整性、DNA损伤的修复及细胞周围的正常运行均起重要作用，对细胞的增殖起负性调控作用，它的蛋白表达产物很不稳定，不能被免疫组化检测到。突变型p53是癌基因，它的蛋白表达产物能被免疫组化检测到。我们研究的p53都是突变型。有文献报道［3］，在细胞生长过程中，突变型和野生型p53的比例是调节细胞生长和细胞增殖的重要因素，如果当突变型p53大于野生型p53 10 倍时，细胞可能发生转化，导致癌变。在本研究中，p53在正常组和癌症组中的表达是有差异的(χ2= 11.814，P＜0.001) ，p53 与病理分级有正相关关系，表现为随着p53表达的增强，病理分级也逐步增高，说明了野生型p53 的减弱表达、突变型p53 的过表达在宫颈癌的发生发展中起到了重要作用。
PCNA是存在于细胞核中能影响细胞增殖的一种蛋白质，为细胞增生及DNA合成所必需，是反映细胞增殖活性的重要标志之一［4］。细胞增殖能力愈强，细胞周期紊乱愈重。细胞增殖失控和异常增殖将导致肿瘤发生。肿瘤细胞的增殖情况与肿瘤组织的分化状态、侵袭能力以及预后密切相关。有研究报道，PCNA不仅可反映肿瘤细胞的增生能力，而且还与肿瘤细胞的浸润和转移有关［5～7］。我们的研究结果显示，子宫颈癌组织PCNA阳性指数显著高于正常对照组(P＜0.05) ，而且随病理分级的增高而显著升高(P＜0.05) 。这提示PCNA的表达可以反映细胞所处的周期时相及细胞的分化程度。肿瘤分化程度越低，增殖活性越强，PCNA指数越高，肿瘤的浸润能力和转移能力越强，临床预后越差。因此，PCNA的表达水平可比较客观地反映宫颈癌细胞的恶性程度及其所处的生长状态，可作为临床医生判断宫颈癌恶性程度的一个分子生物学指标。
综上所述，宫颈癌的发生受多基因调控，其中p53基因及其表达产物P53蛋白高表达共同存在于宫颈癌中，p53基因高表达缺失以及PCNA的表达上调参与了宫颈癌的演进过程。对宫颈病变做p53表达及PCNA指数检测，作为了解病变生物学信息的窗口，对于子宫颈良恶性病变的诊断、子宫颈癌病理分级及临床预后的判断都具有重要的临床意义。
【参考文献】
［1］ 刘凌，程惠敏. 宫颈鳞癌放疗前后病理组织学、细胞凋亡、增殖细胞核抗原及p53的变化［J］. 徐州医学院学报, 2008,28(3): 148150.
［2］ 卞继峰，于修平，董杰德，等. 乳头瘤病毒16 型E6, P53, RB, PCNA 在宫颈癌中的表达状态及相关性［J］.中华实验和临床病毒学杂志，1997，11（3 ）：271273.
［3］ Yang YC ,Chang CL , Kast WM. Effects of P53 on the immune system : implication for cancer immunotherapy［J］.Leukemia ,2001,51(3):197201.
［4］ 黄杰雄，黄致治. 细胞增殖核抗原的研究进展［J］.国外医学生理病理学与临床分册,1994,14（1）:911.
［5］ 曹永成，耿明，郑金锋，等.P16、P15及PCNA在子宫颈癌中的表达及临床病理意义［J］.中国优生与遗传杂志，2008，16（4）：2122.
［6］ 王波,杨志宏,殷新光,等.P53蛋白、PCNA在胃癌中表达及其生物学行为关系的研究［J］.实用肿瘤学杂志, 2003, 17 (4)：274.
［7］ 刘颖，林新生，刘慧.细胞凋亡和P53 、PCNA 表达在宫颈癌的研究［J］.临床肿瘤学杂志，2004，9（5）：461463.
（收稿日期：20090323）
作者单位：东营市人民医院妇产科 东营市 257091