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摘要：目的 建立恙虫病焦痂涂片检查方法，并研究其在临床诊断中的应用。 方法 使用Macchiavello染色法检测临床105例标本，同时作外斐氏试验OXk抗体检测。 结果 检查105例临床标本，结果有89例（8476%）阳性。发热7d与14d以内焦痂涂片检查阳性结果差异无显著性（P>005）。发热7d内涂片检查阳性率明显高于OXk抗体滴度阳性率（P<001）；发热8～14d两法差异无显著性（P>005）。随发热天数的增加, 阳性率开始呈下降趋势，同时OXk抗体滴度阳性率确有所增高。 结论 本法结果明确、迅速、方便。检出阳性率高。焦痂涂片与外斐氏试验对照检查可以提高诊断阳性率。可以作出恙虫病立克次氏体的初步（组别）报告。
关键词：恙虫病；焦痂；涂片检查
中图分类号：R5132 文献标识码：B 文章编号：1009-9727（2005）02-312-02
Establishment and application of eschar smear method for detection of tsutsugamushi disease. ZHAO Xiao-hua1, XU Hua-kun2. (Ningnan County People's Hospital, Ningnan 615400, Sichuan, P. R. China)
Abstract: Objective To establish eschar smear method for detection of tsutsugamushi disease and study its application in clinical diagnosis of the disease. Methods Macchiavello was performed on 105 clinical specimens and detected for Oxk antibody by Weil-Felix. Results Eightynine patients (84.76%) out of the 105 donations was smear positive. No significant differences were observed in patients having a feverish duration of 7 and 17 days (P>0.05). The smear positive rate in patients having a feverish duration of within 7 days was higher than that of Oxh antibody positive level. There were no significant differences between the two methods (P>0.05). The positive rate was decreased along with the increase of feverish days ,while the positive rate of OXk antibody titer was increased. Conclusion This methods is rapid , accurate and simple and it is also as sensitive as Weil-Felix for diagnosis of the tsutwsugamushi disease.
Key words: Tsutsugamushi disease; Eschar; Smear
恙虫病病人焦痂内容物直接涂片检查恙虫病立克次氏体，能快速为临床诊断提供病原学依据。一般可以采用Gimenez、Macchiavello、Giemsa等多种染色方法。我们将Macchiavello染色法首次引用到焦痂涂片检查，建立了恙虫病焦痂涂片检查方法。并对105例临床标本进行了检测，同时与血清外斐氏试验OXk抗体滴度阳性率相对照。研究了在临床诊断中的应用价值。现将情况报告如下。
1 材料与方法
11 病例选择 本组105例，男64例，女41例，年龄5～67岁，平均314岁。本地恙虫病疫源地的住院病人，病程长短不定。所有病例均具有典型的临床症状和体征，并有焦痂。75%洒精消毒焦痂表面皮肤，用尖镊取弃痂皮，使用清洁玻片直接印片或涂片。如果内容物较少时可对周围组织加压挤出内容物再涂片。同时，采集病人血清作外斐氏试验OXk抗体滴度检测。
12 恙虫病焦痂涂片Macchiavello染色法
121 染色液的配制 Ⅰ染液（025%碱性品红液）：取05g碱性品红溶于100ml纯净水中，使用前与等量PH76的磷酸盐缓冲液（PBS）混合，滤纸过滤即可；Ⅱ染液(05%次甲基蓝液)：取05g次甲基蓝溶于100ml纯净水中；Ⅲ染液(025%枸橼酸)：取05g枸橼酸溶于200ml纯净水中。
122 染色方法 涂片自然干燥后通过火焰数次固定。加Ⅰ染液染色4～5min，水洗。迅速用新配的Ⅲ染液冲洗分色，至粉红色时再用水迅速彻底冲洗干净。分色时间不可太长，视涂片厚薄而定，一般数秒钟即可。再以Ⅱ染液复染10s，水洗，干后镜检。
123 结果确定 恙虫病焦痂涂片通过Macchiavello染色，恙虫病立克次氏体较普通细菌小，常成双球形或球形，两极深染，聚集成堆出现，分布于细胞内或散在于细胞外，染成蓝色者。模糊半定量判断为每检查25个视野未发现立克次氏体,为阴性；平均每视野1～10个为“+”,10～100个为“++”,100～1000个为“+++”,1000个以上为“++++”。
13 OXk抗体滴度测定 外斐氏试验OXk菌液购自卫生部兰州生物制品研究所。检测方法依据说明书，有效期内使用。单份血清OXk抗体滴度≥1∶160，判断为阳性。
14 数据处理 涂片结果使用模糊半定量判断；年龄计算均数；率的比较用卡方检验。
2 结果
21 焦痂涂片Macchiavello染色法测定结果 检查105例临床标本，阴性结果16例，有89例获得阳性结果。“＋”阳性例数7例，“＋＋”阳性例数15例，“＋＋＋”阳性例数48例，“＋＋＋＋”阳性例数19例，总阳性率达8476%。
22 焦痂涂片与OXk抗体滴度阳性率比较 发热7d内, 涂片检查阳性率明显高于OXk抗体滴度阳性率（P<001）；8～14d两种方法检查阳性率差异无显著性（P>005）。随发热天数的增加, 焦痂涂片阳性率开始呈下降趋势，同时OXk抗体滴度阳性率确有所增高（表1）。
表1 105例恙虫病焦痂涂片与OXk抗体滴度阳性率 (略)
3 讨论
一般认为Macchiavello染色不适于恙虫病立克次氏体［5］。我们将该染色引用到焦痂涂片染色，情况基本良好。视野可见物清晰。恙虫病立克次氏体染成蓝色。变形倾向不很明显。其形态有双球形较圆，双球杆状较长，双球形较细小等几种情况。大量成堆出现时很易与杂菌类似物区别。可以作出恙虫病立克次氏体的初步(组别)报告［5］。涂（印）片中恙虫病立克次氏体常成堆出现于某一不固定区域，无明显堆积在靠近细胞核旁的胞浆中的特殊形态［5］。可能由于涂（印）片所致或焦痂内容物标本本身无此种特殊形态（上皮细胞较少而纤维蛋白等物质较多）。所以采集标本仍可通过涂沫方式获得而不影响结果。
病人在发热7d内与8～14d涂片检查阳性结果无统计学差异（P>005）。一般只要病人还未使用药物，被恙螨叮咬处未出现黑色痂壳前涂片，易获得较高的阳性结果。阴性结果，除由于较长病程及治疗药物的影响外与涂片技术有关。一般茎口都可深达真皮层，不易挤出内容物而影响涂（印）片效果。发热8～14d焦痂涂片与OXk抗体滴度阳性率差异无显著性（P>005）。随发热天数的增加, 焦痂涂片阳性率开始呈下降趋势，同时OXk抗体滴度阳性率确有所增高。一般认为恙虫病有焦痂溃疡的比例较高，而外斐氏反应阳性率［1～3］较低。通过我们对105例恙虫病的分析认为，只要对恙虫病病人认真体检还是很容易发现焦痂溃疡, 发热14d以上OXk抗体滴度≥1：160的阳性率［4］可达到80%～100%。因此，焦痂涂片与外斐氏试验对照检查可以提高诊断阳性率。
参考文献：
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作者单位：1宁南县人民医院，四川 宁南 615400； 2会东县疾病控制中心，四川 会东 615200.