海南省2004年流行性感冒的病原学监测

    摘要：目的  探讨海南省流行性感冒病例发生的病原学依据和流感毒株的型别分布、时间分布等特征，为流感的防治以及与SARS、禽流感的鉴别诊断提供科学的实验室依据。  方法  采用MDCK细胞进行流感病毒的分离培养，血凝试验阳性标本采用血凝抑制试验进行流感病毒型别鉴定。  结果  海南省2004年共采集流感样病例咽拭子标本477份，流感病毒分离阳性率为13．21％(63／477)。1～6月的病例标本中仅分离到H3型流感毒株，7～12月病例标本则分离到H3型和B型流感毒株。7～9月病例标本分离到19株H3型和21株B型流感毒株，病毒分离阳性率最高，为20．30％。  结论  海南省2004年流感流行以H3型和B型流感病毒为主要病原，1～6月主要为H3型，7～12月则H3型和B型均有流行，7～9月的标本采集数和病毒分离阳性率均高于其它时间段，提示夏季是海南省的流感多发季节。今后需提高流感样病例标本采集的及时率、病毒分离阳性率和及时报告率，为海南省的急性呼吸道传染病的防治提供科学依据。

    关键词：流行性感冒；严重急性呼吸综合征(SARS)；病原学；病毒型别

    中图分类号：R5116    文献标识码：A    文章编号：1009-9727（2005）02-261-02

Pathogenic surveillance of influenza in Hainan Province in 2004  MA Yan PAN Jia-xing, LIN Chun-yan, et al (Hainan Provincial Center for Disease Control and Prevention, Haikou 570203, Hainan, P R China)

    Abstract:Objective  In order to study the pathogenic basis of influenza cases and the characteristics of contribution of virus strains and isolation time to provide scientific basis from laboratory for control and prevention of Influenza and differentiation diagnosis with SARS and avian Influenza  Methods  Isolated Influenza virus with MDCK cell line The positive isolates of hemagglutination test were identified type of Influenza virus with hemagglutination inhibition test  Results  477 swab samples of Influenza-like illness were collected in Hainan in 2004 The isolation rate of Influenza virus was 1321% ( 63/477 ) The type H3 of Influenza was isolated from January to June The type H3 and B were isolated from July to December 19 strains of type H3 and 21 strains of type B were isolated from samples of influenza-like illness who onset in July to September The isolation rate was the highest one ,2030%  Conclusion  The Influenza virus of type H3 and B were main pathogen for Influenza prevalence in Hainan province in 2004 In January to June the H3 type Influenza virus was the main pathogen and in July to December the H3 type and B type were prevalent simultaneously The sample Number collected from Influenza-like illness and isolation rate of Influenza virus in July to September were all the higher than that in other period It showed that summer was the high risk season of Influenza in Hainan In future, The in-time rate of sample collecting, positive rate of virus isolation and in-time reporting rate would be improved to provide scientific basis for control and prevention of acute respiratory infectious diseases

    Key words:Influenza； Severe Acute Respiratory Syndrome(SARS)； Pathogenology； Virus type

    流行性感冒病毒(Influenza virus,以下简称流感病毒)因其包膜上的血凝素和神经氨酸酶极易发生变异，形成新的亚型从而造成流感的流行；加之在临床症状和一般实验室检查中，流感与严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome，简称SARS，也称“传染性非典型肺炎”)和人禽流感(Avian Influenza，AI)很难区分，因而流感的病原学监测具有重要的公共卫生意义。作为我国唯一的亚热带岛屿省份，海南省一年四季都有流感病例发生，但由于缺乏系统的监测，尚无海南省流感病例病原学监测的系统资料。

    海南省自2004年1月开始加入中国流行性感冒监测网络，开展流行性感冒(Influenza，以下简称流感)的流行病学和病原学监测工作。本文将对海南省2004年流感常规监测和流感疑似病例暴发监测的病原学资料进行分析。

    1  材料和方法

    11  标本来源  海南省2004年流感常规监测点采集的流感样病例(Influenza-like Illness，ILI)咽拭子标本445份和疑似流感样病例暴发点采集的咽拭子标本32份。

    12  流感病毒的分离和鉴定  按照GBl5994-1995《流行性感冒诊断标准及处理原则》和卫生部颁发的《2004年全国流感监测方案》［1］进行。标本接种狗肾传代细胞(MDCK细胞)进行流感病毒培养，血凝试验阳性标本采用血凝抑制试验进行病毒型别鉴定，标准诊断血清为：A／上海／7／1999(H1N1)，A／福建／411／2002(H3N2)，B／上海／361／2002。细胞和标准诊断血清由中国疾病预防控制中心国家流感实验室提供。

    13  海南省流感实验室分离和鉴定的流感毒株经中国疾病预防控制中心国家流感实验室复核，型别鉴定正确。

    2  结果

    21  海南省2004年常规监测病例标本与暴发病例标本流感病毒分离阳性率比较(见表1)。

    表1  海南省2004年常规监测病例标本与暴发病例标本流感病毒分离阳性率比较        (略)

    Table 1  Contrast of positive rate of influenza vires between routine surveillance and outbreak in 2004 in Hainan province

    22  H3型与B型流感病毒的时间分布  海南省2004年流感样病例咽拭子标本中仅分离到H3型与B型流感病毒，不同时间病毒分离阳性率有所差异，见表2。

    表2  63例流感病毒分离阳性病例的发病时间分布                                  (略)

    Table 2  Contribution of onset date of 63 influenza cases in 2004

    23  流感病毒在4℃冰箱放置不同时间后血凝效价下降情况  将经MDCK细胞增殖2代的7株不同血凝效价的流感毒株放置于4℃冰箱，分别于第5、7、10d测定其血凝效价，结果见图1。

    图1  流感毒株放置4℃不同天数血凝效价下降情况                                 (略)

    Fig 1  Reduction of Titers of lnfluenza Virus at 4℃ Refrigerator

    24  常规监测中流感病毒分离阳性病例的相关情况  41例H3型流感病毒分离阳性病例中，男性20例，女性21例；22例B型流感病毒分离阳性病例中，男性14例，女性8例。年龄分布：最小5月龄，最大79岁。5月龄～9岁13人，10～19岁21人，20～29岁 13人，30～39岁9人，40～49岁4人，＞50岁3人。

    3  讨论

    流感的病原学监测工作对于急性呼吸道传染病的防治有着重要的意义，尤其是在冬春季节，此项工作将为流感病例与SARS、人感染高致病性禽流感病例相鉴别提供可靠的实验室依据，从而更加科学有效地防控SARS和人禽流感。

    按照《全国流感监测方案》，我们在海南省海口市选择了两家综合性医院的发热门诊和儿内科作为常规监测点，自2004年1月采集发病早期的流感样病例的咽拭子标本，4℃冷藏，2d内送达省疾控中心保藏于-70℃冰箱，7d内标本接种MDCK细胞进行流感病毒分离培养。

    全年共采集常规监测标本445份，疑似流感暴发点标本32份，共分离到流感病毒63株，其中H3型41株，B型22株，没有分离到其它型别的流感病毒。从流感病例病原学监测资料表明，1～3月和4～6月的病例标本各分离到10株H3型流感毒株，病毒分离阳性率分别为7．81％、9．90％，而7～9月病例标本则分离到19株H3型和21株B型流感毒株，病毒分离阳性率为20．30％，10～12月病例标本的病毒分离阳性率仅为5．88％。7～9月的标本采集数和病毒分离阳性率均高于其它时间段，提示夏季为海南省的流感多发季节。

    63例流感病毒分离阳性的咽拭子标本中,50份为发病1～3d内采集,12份为发病当天采集,98．41％为发病3d内采集，仅1份为发病7d采集，说明标本采集时间对于病毒分离阳性率有很大影响。

    图1结果显示，7株不同血凝效价的流感毒株在4℃冰箱分别放置5d、7d和10d后，其血凝效价总体有明显下降，但最初分离时效价较高的毒株，其下降趋势相对缓慢。提示在今后的病原学监测中需及时对标本进行病毒分离和鉴定，既不能反复冻融，也不能在4℃冰箱放置过久。因为流感病毒的半数细胞感染量(TCID50)较之血凝效价下降得更快，故流感病例的咽拭子标本和病毒悬液应按国家要求尽量保存于-70℃冰箱。

    目前，海南省的流感病原学监测工作还存在以下问题：①今后需扩大监测点，同时提高暴发病例标本采集率，提高病毒分离的及时性和敏感性。②部分咽拭子标本接种MDCK细胞后3～7d出现明显的细胞病理改变(CPE)，但采用人“O”型红细胞作血凝试验无凝集现象，这些CPE很可能是由其它呼吸道病毒引起的细胞病变，但目前因缺乏特异的病毒鉴定血清而无法进行病毒鉴定；或者为与人“O”型红细胞不凝集，但与豚鼠或鸡红细胞发生凝集的流感毒株，未做进一步的鉴定，这方面的研究工作有待加强。

    参考文献：

    ［1］ 卫生部2004年全国流感监测方案［S］2003年10月，北京

作者单位：海南省疾病预防控制中心，海南 海口  570203

    作者简介：马焱(1967～)，女，医学硕士，主要从事病毒性疾病的实验室诊断和研究工作