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摘要:目的 探讨女性生殖道感染人乳头瘤病毒（HPV）与宫颈癌前病变的关系。 方法 收集688例宫颈糜烂患者宫颈外口、颈管的脱落细胞，采用AutoCyte PREP液基细胞学检查，诊断按TBS标准。HPV检测采用基因芯片技术。 结果 HPV阳性组（320例）液基细胞学检查呈正常细胞抹片160例（50%），HSIL24例（7.5%），LSIL88例（27.5%），ASCUS48例（15%）;HPV阴性组（368例）液基细胞学检查呈正常细胞抹片者316例（85.87%），HSIL0例，LSIL16例（4.35%），ASCUS36例（9.78%）。两组比较差异极显著。 结论 女性生殖道HPV感染者较易发生宫颈癌前病变，提示积极防治HPV感染对于预防宫颈癌发生有重要意义。
关键词:宫颈糜烂;人乳头瘤病毒;液基细胞学;宫颈癌
The relationship between HPV infection in female reproductive tract and the cervical precacerosis.CAI Hong.（Shen-zhen Municipal Service Center of Family Planning，Shenzhen518028，Guangdong，P.R.China）
Abstract:Objective To investigate the relation between HPV infection of female reproductive tract and cervical precancerosis. Methods The cast-off cells were collected from the exterior orifice of cervix and cervical tube of688patients of cervical erosion and examined by Thinprep liquor base cytological method.The diagnosis was in accordance with TBS standard and HPV was tested with gene-chip technique. Results In HPV positive group（320cases）there160cases of were normal by cytological test，24cases（7.5%）of HSIL，88cases（27.5%）of LSIL and48cases（15%）of ASCUS.In HPV negative group（368cases）there316cases（85.87%）were normal by cytological test，no HSIL，16cases（4.34%）of LSIL and36cases（9.75%）of ASCUS.There is significant difference between the two groups. Conclusion HPV infection of female reproductive tractwould lead to cervi-cal precancerosis suggesting that preventing cervical cancer is important in the control of HPV infection.
Key words:Cervical erosion;Human papilloma virus（HPV）;Liquid based cytology;Cervical cancer
宫颈糜烂是女性生殖道最常见的疾病，其病因与病毒、细菌、衣原体等感染有关。定期检查宫颈脱落细胞，对了解病情发展预防宫颈癌发生有重要意义。本文采用AutoCytePREP液基细胞学方法对688例宫颈糜烂者检查其脱落细胞，同时用基因芯片技术检测HPV，比较HPV阳性组和阴性组的细胞学改变，现将结果予以报告。
1 对象与方法
1.1 研究对象 选择2003年9月～2004年6月深圳市计划生育服务中心就诊的宫颈糜烂患者688例，年龄最小者20岁，最大者61岁。所有患者均常规作液基细胞形态学检查及应用基因芯片分型检测系统检查HPV。
1.2 液基细胞标本采集处理及分析方法 液基细胞标本采集处理:采用塑料刮板收集宫颈外口、颈管的脱落细胞，将所收集的细胞立即注入盛有AutoCyte PREP细胞保存液瓶中。保存液中的标本经AutoCyte PREP系统程序化处理，即将标本中的粘液、血液和炎症细胞、上皮细胞分离后转移到静电处理过的载玻片上制成薄层细胞涂片，由电脑程序控制染色，用树胶 封片。分析方法:采用TBS（The Bethesda System）分级诊断标准 ［1］ 。具体描述方式有正常细胞抹片、未确定意义的非典型鳞状细胞改变（ASCUS）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）。
1.3 HPV检测实验方法 采用基因芯片分型检测系统 ［2］ 。检测试剂盒（科研用）由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。每例均检测HPV23个亚型。具体分五个步骤:①样本DNA提取:将漂洗过棉拭子的生理盐水转移到1.5ml微量离心管中，1300rpm离心10min，弃去上清，保留管底的细胞块。然后加入50μl裂解液悬浮沉淀，100℃加热10min，13000rpm离心10min。保留上清待用。②PCR扩增:参照试剂盒使用要求，取PCR反应管于5000rpm离心2s后，分别加入已提取的待测样品DNA5μl，反应总体系为25μl。按以下条件进行扩增:50℃15min;95℃10min;94℃30s;50℃90s;72℃30s;35cycles;72℃5min。③杂交:取15ml塑料离心管，加入A液8ml及PCR产物20μl，置于沸水中加热10min后放入53℃杂交箱杂交1h。取一只50ml塑料管加入40mlB液于53℃杂交箱或温箱中进行预热。④洗膜:取出膜条，移至装有预热B液的50ml管中，于53℃轻摇洗涤15min。⑤显色:取出膜条，置于A液配制1:4000的POD溶液中，室温中轻摇浸泡30min，弃去POD溶液。用A液在室温中摇洗两次，每次5min。用C液在室温中洗膜1～2min，同时配制显色液。将膜条浸泡于显色液中避光显色5min左右即可见斑点显现，显色时间勿超过10min。
1.4 统计学分析 用χ 2 检验。
2 结果
2.1 宫颈糜烂患者HPV阳性组和阴性组液基细胞学检查结果 从表1中可看出HPV阳性组和阴性组液基细胞学检查结果显示发生癌前病变的机率HPV阳性组明显大于HPV阴性组（χ 2 =30.99，P<0.01）。HPV阴性组没有1例发现HSIL，病变为LSIL者阳性组也明显多于阴性组。
表1 宫颈糜烂者HPV阳性组和阴性组液基细胞学检查比较（略）
2.2 癌前病变与HPV分型的关系 320例HPV阳性者液基细胞形态学检查结果显示ASCUS者48例，其中36例HPV为高危型;LSIL88例及HSIL24例HPV均为高危型。可见癌前病变与HPV高危型感染有着密切联系。
3 讨论
3.1 HPV检测是早期发现宫颈癌及癌前病变的有效方法 大量的研究已经表明HPV感染是宫颈癌的主要病因。随着分子生物学枝术的发展，人们不仅可从宫颈病变组织中分离到HPV，而且对HPV DNA进行分型，目前已分出100余种HPV亚型，其中30余种与宫颈感染和病变有关。根据其致病力的大小分为高危型和低危型两种。低危型包括HPV6，11，42等12种，主要引起生殖道、肛周皮肤及阴道下部的外生性湿疣类病变，扁平湿疣类病变和低度子宫颈上皮内瘤样变（CINI）。高危型主要为HPV16，18，33，56，58等20多种，可导致CINⅡ，Ⅲ病变和宫颈癌发生 ［3］ 。本文报告宫颈糜烂患者HPV阳性和HPV阴性的两组病例，显示HPV阳性组发生ASCUS、LSIL及HSIL的机率明显高于HPV阴性组，表明HPV阳性者更易出现癌前病变。已经出现癌前病变的病例所检出HPV几乎都是高危型。因此在疫苗未能用于预防之前，HPV的筛查仍是目前人们早期发现宫颈癌和癌前病变的有效 手段。
3.2 宫颈糜烂患者已确定有癌前病变者应定期作脱落细胞形态学检查 宫颈癌的发生和发展是一个缓慢、渐进的过程。众多的研究业已证明宫颈癌发生之前有一系列的前驱病变，它的发生、发展是由量变到质变、渐变到突变，通常是由子宫颈不典型增生（轻→中→重）→原位癌→早期浸润癌→浸润癌的连续发展过程。这些前驱病变可存在多年，而且宫颈具有极其有利的解剖学基础，易于暴露，便于观察、触诊及取材，如能在前驱病变阶段被确诊，即可进行进一步的治疗和监测，且早期病变的治疗效果远比宫颈癌的治疗效果好得多。故有宫颈糜烂已确定有癌前病变者应定期作宫颈脱落细胞形态学检查，对防治宫颈癌的发生有重要意义。
参考文献:
［1］National cancer institute Workshop.The1998Bethesda system for reporting cervical/vaginal cytological diagnosis［J］.JAMA，1989，262（7）:931～934.
［2］蔡虹.深圳市育龄妇女HPV感染状况调查［J］.中国妇幼保健2004，19（9）:90～92.
［3］Dell G.Gaston K.Human papillomaviruses and their vole in cervical can-cer［J］.Cell Mol Life Sei，2001，58（12～13）:1923～1942.
作者单位:深圳市计划生育服务中心，广东深圳 518028.