点击显示 收起
摘要:目的 探讨乳腺癌患者P 53 蛋白及抗体表达情况。 方法 采用免疫PCR方法检测血清抗P 53 蛋白抗体，酶免疫组化方法检测组织P 53 蛋白表达。 结果 乳腺癌患者血清抗P 53 蛋白抗体阳性率为39.5%，而非癌患者和正常人血清抗P 53 蛋白抗体均为阴性（P<0.01）。P 53 蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗P 53 蛋白抗体阳性率为64.2%，明显高于P 53 蛋白阴性表达组，血清P 53 抗体测定与P 53 蛋白表达密切相关（P<0.01）。 结论 检测血清抗P 53 蛋白抗体是检测组织P 53 蛋白理想的替代工具，可作为乳腺癌血清学诊断新标志，用于乳腺癌的普查和早期诊断。
关键词:乳腺癌;P 53 蛋白;抗P 53 蛋白抗体;免疫PCR
Comparison of expression of serum P 53 protein and antibody in breast cancer patients by immo-PCR.
FAN Huo-liang.
（Laboratory Department of Huizhou Municipal Central Hospital，516001，Guangdong，P.R.China）
Abstract:Objective To present a new serological method for diagnosis of breast cancer. Methods Seral anti-P 53 antibody was detected with immuno-PCR.The expression of P 53 in tissue was detected with enzyme imunohisto-chemistry technique. Re-sults The positive rate of anti-P 53 ntibody in serum of breast cancer patients was39.5%and anti-P 53 antibody was not detected in normal persons and those without breast cancer.The positive rate of anti-P 53 antibodywas significantly higher in breast cancer pa-tients than in those without breast cancer and normal ones（P<0.01）.The positive rate of anti-P 53 antibody in those expressing P 53 antibody was64.2%，higher than that negative expression of P 53 protein（P<0.01）. Conclusion The detection of serum anti-P 53 antibody is a ideal alternative tool for detection of P 53 expression in tissue.Anti-P 53 anti body is a new marker for diagnosing breast cancer and can be used in early diagnosis of breast cancer.
Key words:Breast cancer;P 53 protein;Anti-P 53 antibody;Immuno-PCR
P 53 是人类肿瘤中突变频率最高的抑癌基因，几乎发生在所有肿瘤，与肿瘤产生、肿瘤生长调控和肿瘤细胞凋亡等关系密切，检测P 53 基因/蛋白对诊断肿瘤、评价患者预后和提高患者术后生存期具有重要价值 ［1］ 。P 53 基因突变编码突变型P53蛋白并在细胞内积聚，与细胞内的热休克蛋白HSP70结合，结果导致异常的P 53 蛋白过度表达，释放入血诱发机体自身免疫应答产生抗P 53 蛋白抗体。最近的研究发现，抗P 53 蛋白抗体可以反映早期P 53 基因突变和P 53 蛋白表达，用于肿瘤的诊断、肿瘤转移和复发检测及P 53 表达动态观察，因此，越来越引起了国内外研究者的关注。本文应用免疫PCR法检测血清抗P 53 蛋白抗体，并分析血清抗P 53 蛋白抗体在乳腺癌诊断中的临床意义，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 收集乳腺癌病理标本86份和乳腺良性增生病理标本22份（均经手术病理证实），并采集乳腺癌患者血清86份（均经手术病理证实）和非癌住院患者血清40份（乳腺良性增生患者22份，高血压8份，肝炎6份，糖尿病4份）;献血员血清120份由中心血站提供。年龄（40±25）岁，平均年龄42岁，3组年龄具有可比性。
1.2 方法 免疫PCR抗P 53 抗体测定参照曾常茜等实验方法进行 ［2］ ;免疫组织化学ABC法检测P 53 蛋白的表达，所用试剂为北京中山公司产品，P 53 （clonece7）1∶40稀释，用已知的阳性片作对照。P 53 蛋白染色为核着色，阳性细胞>10%为阳性。
1.3 试剂 鼠抗人P 53 单克隆抗体（DO7）、超敏SP（鼠）试剂盒、DAB显色试剂盒、苏木素复染试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。PE2400型PCR扩增仪为美国PE公司生产;DYYⅢ型电泳槽为北京六一仪器厂生产;紫外反射透射仪为上海复生生物工程公司生产;微量可调移液器为法国GILSON公司生产;酶标软板（40孔）为上海华美生物工程公司生产。
1.4 统计学处理 全部资料用χ 2 检验，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 血清抗P 53 蛋白抗体检测 86份乳腺癌患者样本中，血清抗P 53 蛋白抗体阳性34份，组织P 53 蛋白表达阳性53例，血清抗体阳性率为39.5%。P53蛋白表达阳性率为61.6%;40份非癌患者血清和120份正常人血清中抗P 53 蛋白抗体均为阴性（见表1）。乳腺癌与非癌患者的抗P 53 抗体和正常人血清中的抗P 53 蛋白抗体相比较差异有显著性（P<0.01），非癌患者和正常人血清抗P 53 蛋白抗体差异无显著性（P>0.05），所以认为乳腺癌血清中的抗P 53 蛋白抗体明显高于非癌患者和正常人。
2.2 53例突变型P 53 蛋白阳性表达患者血清抗P 53 蛋白抗体阳性34例，阳性率为64.2%;33例P 53 蛋白阴性患者血清抗P 53 蛋白抗体均为阴性（见表2）。结果经统计学处理（P<0.01），显示血清P 53 抗体与突变型P 53 蛋白表达密切相关。
表1 乳腺癌患者免疫PCR法抗P 53 抗体检测结果（略）
表2 乳腺癌患者P 53 蛋白表达者的抗P 53 蛋白抗体表现（略）
3 讨论
癌基因和抑癌基因的变化导致肿瘤的发生和发展，抑癌基因失活是常见的导致实体肿瘤发生的最重要的分子生物学基础。P 53 基因是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因，P 53 通常被称为基因组的“监护人”，由于近50%的肿瘤P 53 突变或丢失，它在人类癌症中是最常见的突变基因 ［2］ 。P 53 肿瘤抑制基因的重要性在于它能针对大范围的基因毒性和细胞的刺激阻止细胞循环和凋亡。作为转录因子，P 53 通过转录基因如p 21 ，Bax并阻止损伤DNA复制及基因改变的细胞分裂，作用很大 ［3］ 。P 53 是人类肿瘤中突变频率最高的抑癌基因，突变型P 53 基因由于其DNA碱基突变，导致异常的P 53 蛋白在细胞核内异常堆积，易被现行技术检测 ［4］ 。这种异常表达的P 53 蛋白除参与肿瘤恶性表型形成外，还可随肿瘤细胞的死亡崩解而释放入血，刺激机体免疫系统产生抗P 53 蛋白抗体。最近的研究表明 ［5］ ，抗P 53 蛋白抗体对肿瘤的诊断、肿瘤转移和复发预测具有重要价值。本研究结果表明，乳腺癌患者血清抗P 53 蛋白抗体阳性率为39.5%，而非癌患者和正常人血清抗P 53 蛋白抗体均为阴性，乳腺癌患者血清中抗P 53 蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人。突变型P 53 蛋白阳性表达乳腺癌患者抗P 53 蛋白抗体阳性率为64.2%，明显高于P 53 蛋白阴性组，因此，血清P 53 抗体测定与突变型P 53 蛋白表达密切相关。由于检测血清抗P 53 蛋白抗体克服了检测组织P 53 蛋白需要取材于手术肿瘤组织、创伤性大，且检测方法复杂、费时等弊端，是P 53 蛋白检测理想的替代工具。因此，抗P 53 蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断标志，用于乳腺癌的普查和早期诊断。
参考文献:
［1］曹立宇，欧玉荣，张洪福.大肠癌P 53 基因突变与血清抗体的相关性研究及意义［J］.肿瘤研究与临床，2001，13（5）:21.
［2］谢鑫友，姜红英，林洁，等.血清P 53 IgG抗体测定及其临床价值初步研究［J］.中华检验医学杂志，2000，23（5）:291.
［3］张燕，徐从高，陈黎，等.血清P 53 抗体水平与肺癌临床指标关系的研究［J］.实用癌症杂志，2000，15（5）:493.
［4］赵峰，周清华，王兰兰，等.肺癌患者手术前后血清P 53 抗体的动态变化及其临床意义［J］.中国肺癌杂志，2000，3（4）:253.
［5］CaoLiyu，OuYurong，Zhang Hong fu.The Relation and Significance of Mu-tation of P 53 Gene to Seral Antibody［J］.Study and Clinic ofTumor，2001，13（2）:90.