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【摘要】 目的 探讨胃窦粘膜肿瘤坏死因子（TNF-α）含量与胃癌及幽门螺杆菌（Hp）感染的相互关系。 方法 应用放射免疫法（RIA）检查117例接受胃镜检查的患者胃窦粘膜TNF-α含量，并对所有病例进行幽门螺杆菌感染检查。 结果 117例受检者中，Hp感染者64例（54.7%），GCa患者胃窦粘膜TNF-α明显高于CG组、DU组及组织正常胃粘膜组（P<0.05），GCa和CG组中Hp感染者胃粘膜TNF-α高于非Hp感染者（P<0.05）。 结论 TNF-α在Hp感染过程中与胃癌的发生发展有关。
【关键词】 胃癌 肿瘤坏死因子-α 胃粘膜 幽门螺杆菌
Relationship between antral mucosal tumor necrosis factor-α concentration and gastric cancer and Helicobacter pylori.
LIANG Gu, CHEN Zhen-nong, HONG Rui-xiang, et al.
(Guangxi Health Management Cadre College, Nanning 530021, Guangxi, P. R. China)
Abstract：Objective To investigate the relationship between concentrations of antral mucosal tumor necrosis factor-α and Helicobacter Pylori infection and gastric cancer. Methods The gastric mucosal biopsies of 117 patients including 10 cases with normal gastric mucosa, 39 gastric cancer cases, 33 chronic gastritis and 35 duodenal bulbar ulcer were made. The levels of TNF-α in gastric biogsy homogenate supernatant fluid were determined by radioimmunoassay. At the same time,all the patients recruited were detected if Hp infection happened. Results There 64 of 117 patients were infected by Hp(54.7%). The mucosal level of TNF-α were significantly higher in gastric cancer patients than those with normal mucosa、DU and CG mucosa (P<0.05), TNF-α were higher in Hp positive patients than those negative patients. Conclusion There is a strong correlation between the level of mucosal TNF-αand Hp.Pylori infected gastric cancer, TNF-α may play a part in the pathogensis of gastric cancer in patients infected with Hp.Pylori.
Key words：Stomach neoplasm; Tumor necrosis factor-α; Gastric mucosa; Helicobacter Pylori
胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，在我国的发病率和死亡率居恶性肿瘤第二位，且发病隐袭，严重威胁人类的健康。尽管近年来对胃癌的研究取得明显进展，但对中晚期胃癌及术后复发患者仍缺乏有效的治疗手段。胃癌的形成是一个多基因参与、多步骤发生的复杂过程，遗传、环境、饮食习惯均对胃癌的形成起着不同程度的作用。自从发现幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori，Hp）以来，该菌与胃癌的关系已受到广泛关注。流行病学调查及实验研究表明［1］，Hp是胃癌重要的致病因子，但其致病机制、宿主免疫反应等许多深层问题尚未完全清楚。肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）是一种主要由单核/巨噬细胞产生的细胞因子，研究发现胃癌患者术前血中TNF-α水平升高，切除胃肿瘤后，TNF-α含量下降，认为TNF-α与胃癌发生、发展有关［2］。而Hp及菌体成分在体内外均可引起胃粘膜上皮细胞释放TNF-α［3～5］。为了进一步了解TNF-α在Hp感染胃癌患者中的致病作用，本实验用放免法检测Hp感染的胃癌与良性胃病患者胃粘膜TNF-α含量，以探讨TNF-α与胃癌及幽门螺杆菌感染之间的关系。
1 材料与方法
1.1 研究对象 收集因上腹不适到广西医科大学一附院作胃镜检查并排除了慢性肝脏疾病和自身免疫性疾病的受检者117例。男性67例，女性50例，年龄18～72岁，平均年龄(42±12)岁所有受检者于检查前2周内未服非甾体类抗炎药、铋剂、抗生素、H2受体阻滞剂。经胃活检组织快速尿素酶试验及改良Warthin-starry银染法证实Hp阳性64例，其中单纯性慢性胃炎17例，胃癌20例，十二指肠溃疡27例。Hp阴性53例，胃癌19例，单纯性慢性胃炎16例，十二指肠溃疡8例，胃粘膜组织正常者10例。
1.2 组织病理学和Hp细菌学检查 所有受检者均于胃镜直视下距幽门5cm范围内大小弯和前后壁共钳取组织4块，一块作尿素酶试验，二块放入10%福尔马林溶液固定后送病理学检查和改良Warthin-starry银染色检查Hp，另一块经处理后测定TNF-α。胃癌患者先取胃癌组织送病理学检查，再在癌旁胃窦部取粘膜3块，一块作尿素酶试验，一块找Hp，一块经处理后测TNF-α。Hp感染的诊断标准为尿素酶及组织切片Warthin-starry染色镜检，两次检查均阳性为Hp感染，均阴性为非Hp感染。
1.3 TNF-α的测定方法 试剂盒由北京东亚免疫技术研究所制备，测定范围0.3～24.3ng/ml，灵敏度最小检出值<0.3ng/ml。SN-682型放射免疫r计数器由上海核福光电仪器有限公司生产。操作按药盒使用说明书进行。结果由自动r计数器直接给出样品TNF-α的含量，并根据标本湿重换成Pg/mg数。经胃镜直视下钳胃粘膜组织一块，立即用pH7.4的PBS缓冲液洗涤后，滤纸吸干水分，分析天平精确称重，放入含0.5ml 0.01MPBS的研磨成匀浆，在4℃低温下以3 000转/min的速度离心30min，取上清液置液氮中（-170°）保存待测。采用放射免疫分析（RIA）法测定。
1.4 统计方法 全部数据应用PEM3.0版本医学统计软件进行处理，统计学方法有方差齐性检验，t检验，t′检验。结果用x±s表示，P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 胃粘膜TNF-α含量与胃癌的关系 表1显示胃癌患者胃粘膜TNF-α含量显著高于正常对照组及CG组（P均<0.05），但与DU组比较无明显差异（P>0.05）。
表1 不同疾病组TNF-α含量（略）
注：Δ与慢性胃炎组、正常对照组比较,P<0.01；*与胃癌组比较,P<0.05。
2.2 胃粘膜TNF-α含量与Hp感染的关系 表2所示慢性胃炎组Hp阳性患者胃粘膜TNF-α含量明显高于Hp阴性者（P<0.05），胃癌组、十二指肠溃疡组Hp阳性患者与Hp阴性者间比较胃粘膜TNF-α含量无明显差别（P>0.05）。
表2 胃粘膜TNF-α含量与Hp感染的关系（略）
注：*分别与Hp阴性组间比较,P<0.05;＃与Hp阳性CG组比较,P<0.01;▲与Hp阳性GCa组比较,P<0.05。
3 讨论
肿瘤坏死因子（TNF-α）是由Carswell等于1975年首次提出,因能引起人或动物的肿瘤组织出血、坏死而得名，也被称为是迄今为止抗癌作用最强的细胞因子之一。因此有人把它用于治疗胃癌，虽然在体外细胞培养［6］及临床应用［7］均显示TNF能抑制胃癌细胞增殖，使瘤体缩小，但副作用较大，疗效并不满意。随着对TNF研究的不断深入，人们发现胃癌患者体内的TNF-α并没有抑制或杀灭肿瘤的效应，反而在促进肿瘤发生、转移中起重要作用。田建华等［2］报道，胃癌患者血清TNF-α水平明显高于胃良性疾病患者和正常人（P<0.01），Ⅲ、Ⅳ期胃癌高于Ⅰ、Ⅱ（P<0.01），手术切除肿瘤后TNF-α显著下降，手术后复发或转移者血清TNF-α含量又升高，如患者血清TNF-α与可溶性白介素2受体（STL-2）持续升高，预兆生存期短。认为血清TNF-α可作为胃癌诊断，病情估计和判断预后的指标。而晚期胃癌患者出现恶液质是由于TNF-α能在转录水平上抑制蛋白质的合成，促进骨骼肌，糖原和脂肪分解［8］，最终导致衰竭状态［9］。关于胃癌患者胃粘膜TNF-α检测的报道很少。本实验用RIA法检测117例胃癌患者胃粘膜TNF-α浓度，结果显示胃癌组TNF-α含量明显高于胃粘膜正常组、慢性胃炎组（P<0.01）以及DU组（P<0.05），提示TNF-α与胃癌有密切关系。同时我们对117例受检者进行Hp检查，结果Hp阳性率为54.7%（64/117），CG、DU、GCa各疾病组Hp阳性患者胃粘膜TNF-α含量均高于Hp阴性者，其中CG与GCa组的TNF-α含量在Hp阳性与Hp阴性间差异具有显著性（P<0.05）,说明胃粘膜TNF-α含量与Hp阳性胃癌、胃炎相关，TNF-α在Hp阳性胃癌、胃炎的致病过程有一定参与作用。Hp感染胃癌患者胃窦粘膜TNF-α升高主要由于：（1）Hp及菌体成分通过依赖或不依赖脂多糖的途径激活单核/巨噬细胞产生TNF-α［8］；（2）单核/巨噬细胞直接识别肿瘤细胞，从而释放TNF-α［9］。
幽门螺杆菌（H.Pylori）是慢性活动性胃炎的主要病因，也是人类胃癌的I类致癌原。张筱茵［4］等研究显示Hp所含的尿素酶可刺激胃粘膜上皮细胞释放IL-6和TNF-α，Hp感染病人的癌组织上皮中IL-8和TNF-α升高，CD8T细胞中IL-8、IL-6和TNF-α的表达升高，提示高水平的IL-6、IL-8和TNF-α可能参与Hp阳性胃癌的形成。H-ras基因与胃癌关系密切，早期胃癌中发现H-ras点突变，且其产物P21的表达增加，RasP21具有调节细胞生长和分化的功能［1］。Suganuma M等［3,10］认为HP感染过程中H-ras、TNF-α、NF-κB具有协同致癌作用。他们将幽门螺杆菌的膜蛋白（Hp-MP1），一种诱导TNF-α产生的蛋白（TNF-alpha-inducing protein,Tipa）,转染到Bhas 42（含有活化原癌基因v-H-ras的BALB/3T3 ）细胞内，然后将所产生的克隆细胞株植入裸鼠皮下，以及体外进行细胞培养。结果20d后Bhas 42细胞可在鼠体内见到血管起源的肿瘤细胞株克隆生长，体外培养软琼脂上也见到肿瘤细胞株集落生成，同时检测到TNF-α基因的大量表达和NF-κB的激活；而在缺乏转染v-h-ras基因的BALB/3T3细胞测不出TNF-α基因表达，也没见到肿瘤细胞生长。Tipa是H. Pylori的一种新NF-κB激活蛋白，如果Hp感染发生在Ras被激活或过度表达的胃上皮细胞，则Tipa发挥促癌作用；如果Hp感染出现在没有Ras激活的胃上皮细胞，Tipa就不会大量激活NF-κB，也没有大量TNF-α产生，结果仅表现为胃炎或胃溃疡，不发生胃癌［11］。只有在TNF-α基因大量表达的情况下才有肿瘤细胞恶性克隆生长，缺乏TNF-α基因则无肿瘤生长，可见TNF-α是一种关键的内源性致癌物。
大量微血管生成是肿瘤发展的基础和决定性因素，黄明哲等［11］发现胃癌患者血清血管内皮生长因子和肿瘤坏死因子（TNF-α）均显著升高，两者呈正相关，认为TNF-α是重要的血管新生调节因子，可促进肿瘤血管形成，使肿瘤组织吸收更多的营养物质，促进肿瘤细胞生长。高泽立等［12］发现产细胞毒素的CagA+Hp之所以在胃癌的发生发展中起更重要的作用，是由于其引起胃粘膜TNF-α、IL-8显著高于CagA阴性组，引起炎症反应、上皮细胞凋亡均比CagA阴性菌株更明显。炎症细胞呼吸爆发释放氧自由基，可对DNA造成损伤，引起上皮细胞突变，DNA频繁复制亦增加复制配的机会，是Hp感染与胃癌之间的一个重要环节。TNF-α是一种具有多种功能的细胞因子，Hp感染过程与各种炎症细胞和血管内皮细胞、癌基因活化起复杂的调节和效应作用，而TNF-α参与致癌的可能机制尚有待进一步研究。
【参考文献】
［1］ 房殿春．幽门螺杆菌致胃粘膜癌变的分子机制［J］.解放军医学杂志，2003,28（11）：966～970.
［2］ 田建华，张肖楠，任锡玲，等.胃癌患者可溶性白细胞介素-2受体与肿瘤坏死因子-α水平的临床观察［J］.中华消化内镜杂志，1998,15（4）：224～227.
［3］ Suganuma M, Kurusu M, Suzuki K， et al. New tumor necrosis factor-alpha-inducing protein released from Helicobacter pylori for gastric cancer progression［J］. J Cancer Res. Clin Oncol,2005,131(5):305～313.
［4］ 张筱茵，陈永仪，刘冰，等．胃癌组织细胞因子表达的变化与幽门螺杆菌感染相关［J］.中华微生物学和免疫学杂志，2002,22（5）：535～536.
［5］ 高友兵,熊静,李海波，等．肿瘤坏死因子-α诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究［J］．河南肿瘤学杂志，.2002,15（6）： 417～418.
［6］ 秦庆亮，王志蕙，胡建功，等．肿瘤坏死因子瘤体注射治疗胃癌病理与临床分析［J］．中国肿瘤临床，1997,24：601～602.
［7］ 李从铸，李同度.癌症恶病质的发生及治疗的实验研究［J］.中国肿瘤临床， 1996,23：885～888.
［8］ Perez-Perez GI, shepherd VL, Morrow JD, et al. Activation of human THP-I cells and rat bone marrow-derived macrophages by Helicobacter Pylori Lipopolysaccharide［J］. Infection and Immunity, 1995,63(4):1183～1187.
［9］ Honda S,Fujioka T, Tokieda M, et al. Helicobacter Pylori infection and carcinoma in animal models［J］. J Gastroenteral Hepatol, 2000,15 suppl:55～59.
［10］ Suganuma M, Kuzuhara T, Yamaguchi K， et al. Carcinogenic role of tumor necrosis factor-alpha inducing protein of Helicobacter pylori in human stomach［J］. Journal of Biochemistry and Molecular Biology，2006，39(1):1～8.
［11］ 黄明哲，费哲为，张一楚．胃癌患者血管内皮生长因子和肿瘤坏死因子的水平及其意义［J］.上海医学，2006,29（5）：290～292.
［12］ 高泽立，江佛湖，陆静娟. 产细胞毒幽门螺杆菌与胃癌发生关系的研究［J］.中华消化内镜杂志，2004,21（6）：395～396.
作者单位：广西卫生管理干部学院,广西 南宁 530021; 广西医科大学一附院消化科, 广西 南宁 530021.