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【摘要】 比较放射免疫分析法（RIA）和化学发光免疫分析法（CLIA）检测人抗甲状腺过氧化物酶抗体（抗TpoAb）和抗甲状腺球蛋白抗体（抗TgAb）水平,并探讨其临床应用价值。 方法 分别用RIA法和CLIA法测定30例正常人、45例慢性淋巴细胞性甲状腺炎（HT）和80例毒性弥漫性甲状腺肿（GD）患者的血清抗TpoAb和抗TgAb水平。 结果 HT组和GD组患者分别以RIA法和CLIA法抗TpoAb和抗TgAb值及阳性率均显著高于对照组（P<0.01）；两种结果的相关性分析显示:对于HT组患者，抗TpoAb的r＝0.426（P<0.01），抗TgAb的r＝0.843（P<0.01）；对于GD组患者，抗TpoAb的r＝0.577（P<0.01），抗TgAb的r＝0.649（P<0.01）。 结论 两种方法检测结果的相关性好；对于GD的诊断CLIA法较RIA法优；抗TpoAb和抗TgAb的测定可以鉴别HT和GD, 抗TpoAb比抗TgAb更具参考价值。
【关键词】 放射免疫分析法 化学发光免疫分析法 抗甲状腺过氧化物酶抗体 抗甲状腺球蛋白抗体
Comparison of results of detection of human anti-TpoAb and anti-TgAb by RIA and CLIA.
XUE Sheng-neng, LEI Juan, YANG Gui-fang, et al.
(The Second Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510120, Guangdong, P.R. China)
Abstract：Objective To compare the results of detection of human anti-thyroid peroxidase antibody (anti-TpoAb) and anti-thyroglobulin antibody (anti-TgAb) by radioimmunoassay (RIA) and chemiluminescence immunoassay (CLIA). Methods There 30 healthy persons, 45 Hashimoto thyroiditis (HT) cases and 80 Graves disease (GD) cases were tested for anti-TpoAb and anti-TgAb by RIA and CLIA. The results were statistically analyzed. Results The levels and positive rates of the anti-TpoAb and anti-TgAb were significantly higher in people with HT and GD as compared with that of health people (P<0.01).The levels of anti-TpoAb and anti-TgAb were higher in people with HT as compared with that of GD patients (P<0.01). In 80 GD cases, the positive rates of the two antibodies detected by CLIA were higher than that detected by RIA (P<0.01). Correlation of the two methods: for HT cases, anti-TpoAb r=0.426(P<0.01), anti-TgAb r=0.843(P<0.01). For GD cases, anti-TpoAb r=0.577(P<0.01), anti-TgAb r=0.649(P<0.01). Conclusion There was a significant correlation between the two methods. For GD patients, CLIA was better than RIA. The detection of anti-TpoAb and anti-TgAb could be used to fifferentiate HT from GD, and the detection of anti-TpoAb is of great significant value than detection of anti-TgAb.
Key words：Radio immunoassay; Chemiluminescence immunoassay; Anti-Thyroid peroxidase antibody; Anti-Thyroglobulin antibody
抗甲状腺过氧化物酶抗体（Anti-thyroid Peroxidase Antibody，抗TpoAb）和抗甲状腺球蛋白抗体（Anti-thyroglobulin Antibody，抗TgAb）是甲状腺两种标志性自身抗体，这两种抗体的检测对于甲状腺疾病的诊断和鉴别有着重要的意义［1］。抗TpoAb和抗TgAb的检测传统上多采用放射免疫分析法（Radio Immunoassay，RIA），但它有放射性污染、标记物半衰期短（59d）、对操作者具有放射性损伤等缺点。随着标记免疫技术的迅速发展，各种新的检测方法层出不穷，例如ELISA方法、时间分辨免疫分析法、免疫荧光法、化学发光法等。其中全自动化学发光免疫分析法（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA），具有敏感性高、特异性强、检测范围广、速度快等优点，越来越受到人们的关注。本文对此两种方法的检测结果进行比较，旨在为实验室和临床应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验对象 ①对照组：健康体检者30例，其中男9例, 女21例，年龄12～68岁,平均(33.1±5.7)岁,所有受试者均无甲状腺疾病和其他自身免疫性疾病史，查体无甲状腺肿大及结节,甲状腺各项功能检查均正常；②慢性淋巴细胞性甲状腺炎（Hashimoto Thyroiditis，HT）组：45例经组织病理学诊断为HT尚未使用药物治疗的患者，其中男12例，女33例，年龄13～62岁，平均(32.2±5.6)岁；③毒性弥漫性甲状腺肿（Graves Disease，GD）组：80例经组织病理学诊断为GD尚未使用药物治疗的患者，其中男28例，女52例，年龄18～71岁，平均(35±6.3)岁。
1.2 方法
1.2.1 标本采集 所有受试者清晨空腹抽取静脉血3ml，离心分离血清，-20℃冰箱保存，集中统一测定，以避免批间误差。
1.2.2 检测方法 RIA法采用西安262厂XH-6020γ放射免疫计数器，由北京北方生物研究所提供抗TpoAb和抗TgAb试剂盒，严格按照说明书操作。结果计算采用B/T比值，正常参考值：抗TpoAb<30%，抗TgAb<20%;CLIA法采用美国DPC Immulite 1000 全自动免疫分析仪及其配套的抗TpoAb和抗TgAb试剂盒，操作由仪器自动完成。正常参考值：抗TpoAb<35IU/ml，抗TgAb<40IU/ml。
1.3 统计学处理 计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，多组间均数的比较采用单因素方差分析和两两比较（LSD-t）。各组间阳性率的比较和两种检验方法之间的关联性分析采用χ2检验。采用SPSS 11.5统计软件进行分析，P<0.05为差别有统计学意义。
2 结果
2.1 两种方法检测抗TpoAb和TgAb的结果 HT组和GD组患者抗TpoAb值及阳性率均显著高于对照组（P<0.01）；HT组患者抗TpoAb值及阳性率高于GD组（P<0.01）。GD组患者CLIA法测定的抗TpoAb阳性率高于RIA法（P<0.01）。HT组和GD组患者抗TgAb值及阳性率均显著高于对照组（P<0.01）；HT组患者抗TgAb值及阳性率高于GD组（P<0.01）。GD组患者CLIA法测定的抗TgAb阳性率高于RIA法（P<0.01）。见表1。
表1 RIA和CLIA检测抗TpoAb和抗TgAb的结果（略）
注：与对照组比较,*P<0.01；与HT组比较,#P<0.01；与RIA法比较,χ2＝18.05，△P<0.01。
2.2 两种检测方法的关联性分析 对于HT组患者，检测抗TpoAb的关联性r＝0.426，P<0.01；检测抗TgAb的关联性r＝0.843，P<0.01。对于GD组患者，检测抗TpoAb的关联性r＝0.577，P<0.01；检测抗TgAb的关联性r＝0.649，P<0.01。
3 讨论
近年来, 在具有临床诊断意义的甲状腺自身抗体中，抗TpoAb和抗TgAb浓度的测定不仅是诊断HT和GD重要的实验室依据［2］，而且对患者的治疗、随访和预后的判断也有极其重要的意义。两种抗体自发现以来，先后经历多种检测方法，其测定的敏感度和特异性不断提高。随着CLIA法的广泛应用，不少单位将检测抗TpoAb和抗TgAb的方法从RIA法改为CLIA法，本文对此两种方法的检测结果进行比较，发现对HT组患者，抗TpoAb的关联性r＝0.426，抗TgAb的关联性r＝0.843；对GD组患者，抗TpoAb的关联性r＝0.577，抗TgAb的关联性r＝0.649，提示这两种方法检测的相关性较好。
本研究通过对两种方法测定抗TpoAb 和抗TgAb结果的比较，发现用两种方法测定HT和GD患者的抗TpoAb和抗TgAb水平均明显高于对照组。用CLIA法测定HT和GD患者的抗TpoAb水平比正常人高100倍以上，而用RIA法测得的结果虽与正常人有差别，但差值远没有CLIA法明显。同样，用CLIA法测定HT和GD患者的抗TgAb水平比正常人高10倍以上，而用RIA法得到的结果虽然高，但同正常人比较的差别就没有CLIA法明显。而且用CLIA法测定HT和GD患者的抗TpoAb及抗TgAb的阳性率均比RIA法高，说明用CLIA法测定抗体对甲状腺自身免疫疾病的诊断较RIA法更敏感和更特异。这一结果与文献报道一致［3］。究其原因是因为CLIA法采用的是单克隆抗体竞争结合，而RIA法用的是多克隆抗体结合。单克隆抗体比多克隆抗体结合的特异性强得多，所以在检测抗体浓度不是十分高的患者时，RIA的检出率不如CLIA高。另外CLIA法测得的结果以数量值表示，检测范围宽，而RIA法得到的结果仅以百分比表示，所以CLIA法更有利于疾病诊断、病情判断和疗效观察。
本研究中不论是用RIA法还是CLIA法，HT组的抗TpoAb和抗TgAb检测值和阳性率都远大于GD组。在80例GD患者中，两种方法检测抗TpoAb的阳性率分别为50.0%和75.0%，两种方法检测抗TgAb的阳性率分别为38.8%和60.0%。而在HT患者中，两种方法检测抗TpoAb和抗TgAb的阳性率则高达88.9%和97.8%、82.2%和86.7%。在检测值方面，GD患者两种方法测定抗TpoAb的值分别为正常值的3倍和60倍，两种方法测定抗TgAb的值分别为正常值的2倍和30倍。而在HT患者中，两种方法测定抗TpoAb和抗TgAb的值分别为正常的6倍和300倍、4倍和50倍。这可能是因为HT是一种慢性甲状腺炎症，血中有大量的自身抗体释出，而GD虽然也是自身免疫性疾病，抗TpoAb和抗TgAb虽然可以出现在所有甲状腺自身免疫病中，但其水平远不如HT患者高。因此，临床上可以通过测定抗TpoAb和抗TgAb来鉴别HT和GD患者，即抗TpoAb和抗TgAb滴度高者一般为HT患者。另有文献报道，HT和GD患者血中抗TpoAb的阳性率比抗TgAb高［4,5］，这一结果与本文结果是一致的。所以在HT和GD的鉴别诊断中，抗TpoAb比抗TgAb更具参考价值。
【参考文献】
［1］ Kasagi K, Kousaka T, Higuchik, et al. Clinical significance of measurements of antithyroid antibodies in the diagnosis of Hashimoto’s thyroiditis: comparison with histological findings［J］. Thyroid, 1996,6(5): 435～450.
［2］ Tozzoli R, Villalata D, Bizzaro N, et al. Laboratory diagnosis of autoimmune thyroid disease［J］. Recenti Prog Med, 2001, 9(10):609～617.
［3］ Wallaschofski H, Muller D, Georgi P, et al. Induction of TSH-receptor antibodies in patients with toxic multinodular goinre by radioiodine treatment［J］. Horm Metab Res, 2002, 34(1): 36～39.
［4］ Smith BR. Thyroid autoantibodies［J］. Scand J Clin Lab Invest Suppl, 2001, 235:45～52.
作者单位：中山大学附属第二医院，广东 广州 510120.