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【摘要】 目的 研究中华跌打丸对骨性关节炎的抗炎镇痛作用。 方法 造成大鼠、家兔骨关节炎，观察中华跌打丸对大鼠、家兔血清SOD活性、MDA水平及关节滑膜和软骨病理改变情况。以足跖皮下注射角叉菜胶造成大鼠踝关节肿胀炎症模型。观察中华跌打丸对角叉菜胶性关节炎的治疗作用。通过二甲苯诱发小鼠急性炎症模型，评价中华跌打丸的抗炎作用。用醋酸腹腔注射诱发小鼠扭体反应观察其疼痛反应次数，用热板法测定小鼠痛阈，观察中华跌打丸的镇痛作用。 结果 中华跌打丸对大鼠、家兔高、中剂量组的血清SOD活性增加、MDA水平下降，与模型对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，滑膜组织学积分和软骨组织学积分低于模型对照组，具有统计学意义(P<0.05)，表明中华跌打丸具有消除自由基、改善骨关节炎的炎症反应作用。并能减轻角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀度及二甲苯致小鼠耳肿胀度，与模型对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，具有抗炎作用。扭体反应次数比模型对照组少，差异均具有统计学意义(P<0.05)，热板痛阈增加值比模型对照组高，差异均具有统计学意义(P<0.05)，具有镇痛作用。 结论 中华跌打丸对骨性关节炎具有抗炎镇痛作用。
【关键词】 中华跌打丸 性关节炎 抗炎 镇痛
Studies on the anti-osteoarthritis and analgesia of Zhonghua Diedawan in rats and rabbits.
LI Mao, WEI Bao-wei, QIN Liang, et al.
(Institute of Traditional Chinese Medical and Pharmaceutical Sciences of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530022, Guangxi, P. R. China)
Abstract：Objective To observe the effect of Zhonghuadieda pills on osteoarthritis and its analgesia in rats and rabbits. Methods Pathological rats and rabbit models of osteoarthritis were used for evaluation of the effect of Zhonghua Diedawan on osteoarthritis; The levels of serum superoxide?dismutase (SOD), malondialdhehyde (MDA), Mankin’s grades in histological alteration of synovium and cartilage were determined. Results The levels of MDA was significantly decreased as compared to the controls (P<0.05)), Mankin’s grades in histological alteration of synovium and cartilage was observed,showing significant difference compared to the control (P<0.05). The level of SOD was significantly increased inthe high and medium dosage groups in rats or rabbits , compared with the controls, suggesting free radical scavenging and osteoarthritis improving activities. Carrageenan induced arthritis in ankle joint, xylene induced auricle swelling also improved significantly (P<0.05), compared with the controls. Significant decrease in writhing responses and increase in hot-plate threshold showed its analgesic activity was also observed. Conclusion The preparation of Zhonghuadieda pill has actions of anti-inflammation and analgesia, and is effective for treatment of osteoarthritis.
Key words：Zhonghua Diedawan; Osteoarthritis; Anti-inflammation; Analgesia
中华跌打丸由金不换、鹅不食草、牛膝、乌药、制川乌、刘寄奴、过江龙、两面针、鸡血藤、岗梅、独活、樟脑等32味中药组成。具有消肿止痛，舒筋活络，止血生肌，活血祛瘀等功能。用于挫伤筋骨，新旧瘀患，创伤出血，风湿瘀痛。为探讨其作用机制，本文对中华跌打丸的抗炎镇痛作用进行实验研究。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 中华跌打丸 规格为6g/丸，临床成人用量：一次1丸，一日2次（相当药材4.8g，批号：060503）。广西梧州制药(集团)股份有限公司提供。本试验剂量以g（丸重）/kg体重表示。临用时用蒸馏水将药丸配成所需浓度。
1.1.2 动物 清洁级(Ⅱ级)昆明种健康小鼠150只，体重22～25 g ；清洁级Wistar种健康大鼠110只，体重200～220g。新西兰大白兔60只，体重2.0～2.5kg。由广西壮族自治区实验动物中心提供。合格证号：SCXK桂2003-0003。动物房温度：22～28℃。相对湿度55％～75％。
1.1.3 试剂与仪器 血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛(MDA)水平测定试剂由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供，批号：20060323。角叉菜胶，批号：45F—0427，Sigma公司产品。盐酸氨基葡萄糖胶囊，0.24g/粒，批号：20060302，由山西中远威药业有限公司生产。阿司匹林，50mg/片，批号：050818，由湖南亚大制药有限公司生产。盐酸吗啡注射液，10mg/支，批号：030518，由沈阳第一制药厂生产。A-6半自动生化分析仪，北京松上技术有限公司。
1.2 方法
1.2.1 家兔骨关节炎（抗炎）试验 健康新西兰大白兔60只，随机分出10只为正常对照组后，将50只以戊巴比妥钠25mg/kg腹腔注射麻醉，用石膏固定右膝关节，使保持拉直状态造成骨关节炎病理模型，造模后，随机分成5组，每组10只。中华跌打丸设1.24g/kg、0.62g/kg 、0.31g/kg 3个剂量组，分别相当于临床成人用量的6.2倍、3.1倍、1.55倍，同时设模型对照组和盐酸氨基葡萄糖胶囊(0.084g/kg.)组。以经口灌胃方式给予中华跌打丸溶液2.0ml/kg体重。正常对照组和模型对照组给予等量的蒸馏水，造模后第二天开始灌胃给药，每天一次，连续给药9wk后，测定关节活动度，并取血清测定SOD活性、MDA水平；同时分离左、右膝关节，甲醛固定，脱钙、包埋、切片、染色，按Mankin滑膜组织学分级标准分别评价关节滑膜和软骨病理改变情况。
1.2.2 大鼠骨关节炎（抗炎）试验 清洁级Wistar种健康大鼠60只，按照“家兔骨关节炎试验”项目的方法造型，分组。中华跌打丸设2.48g/kg、1.24g/kg、0.62g/kg 3个剂量组，分别相当于临床成人用量的12.4倍、6.2倍、3.1倍，同时设模型对照组和盐酸氨基葡萄糖胶囊(0.168g/kg)组。以经口灌胃方式给予中华跌打丸溶液1.0ml/100g体重。正常对照组和模型对照组给予等量的蒸馏水。给药时间、检测项目和评价标准同1.2.1。
1.2.3 角叉菜胶所致大鼠关节肿胀（抗炎）试验 清洁级Wistar种健康大鼠50只，随机分成5组，每组10只。中华跌打丸设2.48g/kg、1.24g/kg、0.62g/kg 3个剂量组，分别相当于临床成人用量的12.4倍、6.2倍、3.1倍，同时设阿司匹林(0.25g/kg.)组和模型对照组。用卡尺测量各组大鼠右足跖厚度（mm）,作为致炎前足跖厚度值。然后给各组大鼠右足跖皮下注射1%角叉菜胶致炎，0.1ml/足。造成大鼠踝关节肿胀炎症模型。各组大鼠以经口灌胃方式给药1次，给予药物溶液为1.0ml/100g体重。模型对照组给予等量的蒸馏水。致炎后1、2、3h分别测量各组大鼠右足跖厚度。以致炎后足跖厚度与致炎前足跖厚度的差值作为肿胀度值。
1.2.4 二甲苯所致小鼠耳肿胀（抗炎）试验 清洁级(Ⅱ级)昆明种健康小鼠50只，随机分成5组，每组10只。中华跌打丸设4.96g/kg、2.48g/kg、1.24g/kg 3个剂量组，分别相当于临床成人用量的24.8倍、12.4倍、6.2倍，同时设模型对照组和阿司匹林(0.25g/kg)组。各组小鼠以经口灌胃方式给药1次，给予药物溶液为20ml/kg体重。模型对照组给予等量的蒸馏水。给药后1h，每只鼠右耳两面涂二甲苯50μl，15min后将小鼠处死，剪下左右两耳，用8mm打孔器对准耳郭外缘分别打下一圆形耳片，分别称重，以右耳重量减去左耳重量的差作为耳肿胀度。
1.2.5 小鼠醋酸扭体法（镇痛试验） 清洁级(Ⅱ级)昆明种健康小鼠50只，动物分组、剂量设计和给药量同1.2.4。给药后1h，经腹腔注射0.9%冰醋酸溶液10ml/kg，观察小鼠注射后15min 内因疼痛而引起的扭体次数。
1.2.6 小鼠热板法（镇痛试验） 清洁级(Ⅱ级)昆明种健康小鼠50只，随机分成5组，每组10只。中华跌打丸设4.96g/kg、2.48g/kg、1.24g/kg 3个剂量组，分别相当于临床成人用量的24.8倍、12.4倍、6.2倍，同时设模型对照组和盐酸吗啡(10mg/kg.)组。分别将各组小鼠放到热板(55℃±0.5℃)上，用秒表记录小鼠从放在热板上到用嘴舔其后足的时间为痛阈（秒），以此痛阈作为给药前痛阈值。并剔除痛阈小于10s或者大于20s的小鼠不用。以经口灌胃方式给药1次，给予药物溶液为20ml/kg体重。模型对照组给予等量的蒸馏水。给药后1、1.5、2 h分别按上述方法测定痛阈。以给药后痛阈减去给药前痛阈得到的差值作为痛阈增加值。
1.3 统计学分析 采用SPSS11.0软件进行统计学处理。实验数据采用χ±s表示，进行t检验。
2 结果
2.1 中华跌打丸对家兔、大鼠骨关节炎的影响 中华跌打丸高、中剂量组的血SOD活性增加、MDA水平下降，与模型对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，滑膜组织学积分和软骨组织学积分也低于模型对照组，具有统计学意义(P<0.05)，表明中华跌打丸具有消除自由基、改善骨关节炎的炎症反应作用。见表1、表2。
表1 中华跌打丸对家兔关节活动、血清SOD、MDA水平和滑膜、软骨组织学的影响（略）
注：与模型对照组比较 P<0.05， P<0.01下同
2.2 中华跌打丸对大鼠足跖肿胀度的影响 中华跌打丸高、中剂量组的足跖肿胀度值与模型对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，表明中华跌打丸具有抗炎作用，见表3。
2.3 中华跌打丸对小鼠耳肿胀度和扭体反应的影响 中华跌打丸高、中剂量组的耳肿胀度与模型对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，表明中华跌打丸具有抗炎作用。扭体反应次数比模型对照组少，差异均具有统计学意义(P<0.05)，表明中华跌打丸具有镇痛作用。见表4。
表2 中华跌打丸对大鼠血清SOD、MDA水平和滑膜、软骨组织学的影响（略）
表3 中华跌打丸对大鼠足跖肿胀度的影响（略）
表4 中华跌打丸对小鼠耳肿胀、扭体反应的影响（略）
表5 中华跌打丸对小鼠痛阈的影响（略）
2.4 中华跌打对小鼠痛阈的影响 中华跌打丸高、中剂量组的痛阈增加值比模型对照组高，差异均具有统计学意义(P<0.05)，表明中华跌打丸具有镇痛作用，见表5。
3 讨论
骨性关节炎的主要病理改变是关节软骨的退变和继发的骨质增生［1］。本病属中医“痹证”“骨症”范畴，多见于中老年人，其主要发病机制是肝肾亏损，气血虚弱，正气亏虚，卫外不固，风寒湿邪乘虚而入，闭阻经络，阻滞关节，气血运行不畅，不通则痛，则发生骨与关节的退变［2］。在正常情况下，机体内有一定数量的自由基，机体内的SOD，GSH-px等酶可以有效的清除多余的自由基，使体内的氧化与还原反应保持着平衡状态［3～4］。骨关节炎患者体内氧自由基含量增高，关节内过量的氧自由基抑制软骨细胞增殖引起软骨细胞死亡，抑制软骨基质蛋白多糖和胶原的合成，加速软骨基质的降解，导致软骨细胞损伤。MDA是脂质过氧化的产物，SOD是超氧阴离子的清除剂，测定MDA和SOD的含量可间接的反映体内氧自由基的高低［5］。高华等报道［6］中华跌打丸可以通过减少膜脂质过氧化产物，提高机体清除氧自由基能力。本实验中华跌打丸对大鼠、家兔高、中剂量组的血清SOD活性增加、MDA水平下降，与模型对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，滑膜组织学积分和软骨组织学积分低于模型对照组，具有统计学意义(P<0.05)，表明中华跌打丸具有消除自由基、改善骨性关节炎的炎症反应作用。并能减轻角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀度及二甲苯致小鼠耳肿胀度，与模型对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，有利于渗出液的吸收和肿胀的消退，具有抗炎作用。扭体反应次数比模型对照组少，差异具有统计学意义(P<0.05)；热板痛阈增加值比模型对照组高，差异具有统计学意义(P<0.05)，具有镇痛作用。本实验研究表明中华跌打丸具有消除自由基、改善骨性关节炎的炎症及抗炎镇痛作用。
【参考文献】
［1］ 任永信，邓友章. 雌性素对大鼠骨性关节炎影响的实验研究［J］. 中国修复重建外科杂志, 2003, 17 (3): 212～214.
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［5］ 江中潮，何洪阳，刘罡，等.骨生注射液对实验性骨性关节炎家兔血浆SOD和MDA的影响［J］. 中国骨伤,2004, 17（10）: 593～595.
［6］ 高华，于婷，蔡彤.中华跌打丸抗氧化实验［J］.中国药事,2006,20(8):466～468.
作者单位：广西壮族自治区中医药研究院，广西 南宁 530022.