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【摘要】 目的 了解2005～2006年深圳市健康人群脑膜炎奈瑟菌（Nm）的带菌状况，为制定有效的防制方案提供依据。方法 将健康人群分为0～、5～、10～、15～、25～、35～和45～岁以上7个年龄组，采集咽拭子，进行Nm培养分离和鉴定,用血清学诊断和PCR方法分群。结果 2005～2006年深圳市健康人群Nm带菌率为4.4%（55/1255），其中B群49株（89.1%），C群4株（7.3%），29E 2株（3.6%）。在两次流脑疫情中各分离到1株B群Nm。结论 2005～2006年深圳市健康人群主要携带B群Nm，未检出A群Nm，A群流脑传染源较少。
【关键词】 流行性脑脊髓膜炎；脑膜炎奈瑟菌；带菌调查
Survey of prevalence of Neisseria meningitidis in heathy population in Shenzhen City in 2005 and 2006.
JU Chang-yan, HUANG Wen-fan, YU Mu-hua, et al.
(Nanshan District Center for Disease Control and Prevention, Shenzhen 518054, Guangdong, P.R.China)
Abstract：Objective To understand the Neisseria meningitidis-carrying rate in healthy people of Shenzhen City. Methods Throat swabs were collected from healthy people of various age groups in Shenzhen and Neisseria meningitidis was isolated. Results Neisseria meningitidis were isolated from 55 swabs giving an overall carrying rate of 4.4%, in which 49(3.9%) isolatesbelonged to serogroup B,4(0.3%) isolates beonged to serogroup C, 2(0.2%) isolates belonged to serogroup29E. 2 more strains were isolated from one patient and one close contact. Conclusion Serogroup B is the main serogroup carried by healthy people and no serogroup A carrier is found，indicating that there is few source of serogroup A meningococcal infection.
Key words：Meningococcal disease；Neisseria meningitidis；Carrying rate ; Survey
脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis，Nm）是一种常见的呼吸道病原菌，可以在全球范围内传播，导致流行性脑脊髓膜炎（以下简称流脑）的发生。我国过去曾是流脑发病率较高的国家，上世纪80年代推广接种A群流脑疫苗以后，发病率大大下降［1］。但近几年流脑疫情有所波动，2002年以来，广西［2］、安徽［3］及广东［4］等地均发生了C群流脑的局部暴发，流脑的威胁依然存在。由于Nm是严格以人为宿主的细菌，且大多数发病的患者并没有与其它流脑病例的接触史。所以，无症状的带菌者被认为是主要传染源。深圳市人口流动性大，外来人口多，Nm一旦传播，很难控制。对深圳市健康人群进行Nm带菌调查，可以了解流脑传染源，确定易感人群，这对深圳市的流脑监测十分必要。
1 材料与方法
1.1 材料
2005年11月～2006年5月抽取深圳市健康人群咽拭子1 255份，包括7个年龄组，0～，5～，10～，15～，25～，35～和45岁以上组，以上受试者均未发现与流脑病人有接触。标准Nm菌株A（29019）、B（29021）、C（29025）群各1株，及脑膜炎奈瑟菌诊断血清，国家CDC提供。
1.2 方法
咽拭子的采样在早饭以前，或者至少饭后2h，用灭菌弯棉签蘸取受试者悬雍垂后鼻咽腔分泌物，立即将棉签在巧克力双抗（多粘菌素和万古霉素）平板上充分涂抹，并沿原始涂抹区分区划线，4h内送往实验室，37℃，5%CO2培养24h或48h，挑取可疑菌落接种卵黄双糖平板，阳性者进行镜检，及氧化酶、触酶试验,然后用诊断血清分群。对血清不能分群的Nm，采用PCR方法分群。引物见表1。煮沸法提取细菌的DNA，先用种特异性引物扩增Nm荚膜转移基因（ctrA），鉴定Nm，再用群特异性引物扩增orf-2，SiaD基因，鉴定A、B、C、W135、Y群。ctrA基因的扩增条件为预变性94℃ 3min，34个循环（94℃ 50S；59℃ 30S；72℃ 30S），后延伸72℃ 2min。orf-2和SiaD基因的扩增条件同上，将退火温度降低到57℃。
2 结果
2.1 血清学诊断
生理盐水不凝集，多价血清和单价血清在1～2min内凝集，为阳性；5min以上出现凝集，为非特异性凝集，为阴性；与多价和分群血清均发生凝集者即可定血清群；与多价血清凝集而与分群血清不凝或与分群血清有交叉凝集者，为未定群；形态、生化符合Nm，但与多价、分群血清均不凝集，为不凝菌。 血清学试验发现，一些菌株的凝集结果难以判断，在鉴定血清群是29E的Nm时，凝集效果很好。
2.2 PCR鉴定Nm并分群
对于血清不能分群的Nm，首先扩增ctrA基因，确定是Nm，然后再扩增orf-2，siaD基因，分别确定A、B、C、Y、W135群Nm。电泳图见图1。
2.3 健康人群Nm的带菌率
从1 255份咽拭子样本中，分离到Nm 55株Nm（4.4%），其中B群49株（3.9%），C群4株（0.3%），29E群2株（0.2%）。带菌率最高的是15岁组，达8.6％，0～组和10～组未分离到Nm，见表2。表1 Nm鉴定和分群的引物［5,6］扩增（略）表2 不同年龄组脑膜炎奈瑟菌带菌率调查结果年龄组（略）
2.4 流脑疫情中Nm菌株的分离
2005年12月22日，深圳西丽奥林巴斯电子公司发现1例流脑病人，对其密切接触者12人采咽拭子，分离到1株可疑菌，PCR方法鉴定为B群Nm；2006年3月8日，深圳市南山医院上报1例流脑病人，对病人血液进行血培养，分离到1株可疑菌，PCR方法鉴定为B群Nm。
3 讨论
由于Nm表面抗原的缺失或抗原表达量不足，导致从携带者分离的菌株有50%无法用血清分群［7］，因此采用PCR方法进行分群，为Nm的分群提供了新途径。本调查分离到的大多数是B群Nm，与我国以往的调查结果一致，说明B群仍然是健康人群携带的主要血清群。原因可能是B群Nm的免疫原性差，机体不易产生有效的保护性抗体，导致很多潜在的B群Nm带菌者。目前尚无有效的B群流脑疫苗，一旦有B群Nm的流行，只能采取药物预防。此次调查未发现A群Nm，可能与我国1982年以来推广接种A群流脑多糖疫苗有关，研究显示，接种流脑疫苗，不仅可以减少发病和死亡，而且还可以减少66%的带菌状态［8］,提示深圳市A群Nm带菌率低，A群流脑传染源较少。此外，两株29E的带菌者是同一酒店的服务员，且两株菌的PFGE带型相似度为99.9％，推测个体传播的可能性比较大。此次调查未发现W135群和Y群Nm。
国外资料显示［8］，儿童的Nm带菌率一般＜2%，青少年和青年人的Nm带菌率是5～15%，居住密集的地方，如军队和学校，Nm带菌率可高达50%。近年来我国健康人群Nm带菌调查的结果显示，Nm带菌率的地区性差异较大。四川、辽宁、湖北等地的Nm带菌率较高，分别为9.79％、5.14％和4.33％，广东、福建、甘肃等地的Nm带菌率相对较低，分别为0.65％、0.89％和0.27％。本调查中Nm的总带菌率为4.4％，高于广东省的总体带菌率，主要原因是被采样人群主要是15～岁组，这一年龄组的带菌率相对较高。
Nm比较脆弱，常用的保存方法是将其保存在脱脂牛奶中，置-70℃，可保存1年以上，或者用脱脂牛奶做保护剂，将Nm制成冻干粉，在常温下保存能保存数年，但冻干的过程比较麻烦。本试验中将Nm保存在带玻珠的菌种管里，优点在于可以随时取用，不用反复传代，能保证试验中所使用的菌株都是同一代。
【参考文献】
［1］胡绪敬.流脑流行的监测与预防［J］.中国公共卫生,2004,20(5):638～640.
［2］龚健，李翠云，曾竣,等．一起由C群脑膜炎双球菌引起的流行性脑脊髓膜炎暴发［J］．广西医药,2002,8(5):276～278.
［3］Zhujun Shao, Wei Li, Jun Ren, et, al. Identification of a new Neisseria meningitidis serogroup C clone from Anhui province, China［J］. Lancet, 2006, 367:419～423.
［4］刘美真，杜志明，张莉萍,等.广东省2004年流脑检测结果分析［J］.华南预防医学,2005,31（4）:18～20.
［5］Muhamed-Kheir Taha, Jean-Michel Alonso, Mary Cafferkey, et, al. Interlaboratory comparison of PCR-based identification and genogrouping of Neisseria meningitidis［J］. Journal of Clinical Microbiology, 2005,43(1):144～149.
［6］Georgina Tzanakaki, Maria Tsosia, Vasiliki Vlachou, et, al. Evaluation of non-culture diagnosis of invasive meningococcal disease by polymerase chain reation(PCR)［J］. FEMS Immumology and Medical Microbiology, 2003,39:31～36.
［7］Claus,H.,Maiden, M. C., Maag, R, et al. Many carried meningococci lack the genes required for capsule synthesis and transport［J］. Microbiology, 2002,148:1813～1819.
［8］Martin C J Maiden, James M Stuart. Carriage of serogroup C meningococci 1Year after meningococcal conjugate polysaccharide vaccination［J］. Lancet, 2002,359:1829～1830.
作者单位：深圳市南山区疾病预防控制中心，广东 深圳 518054.