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【摘要】 目的 探讨不同睾酮水平老年男性胃癌患者外周血CEA-mRNA与CEA蛋白水平差异。方法 选择老年男性胃癌患者60例，根据睾酮水平分为睾酮低下组与睾酮正常组，分析两组胃癌患者发病部位、临床分期以及Brrmann分型差异，并检测所有患者外周血CEA-mRNA与CEA蛋白水平。结果 睾酮低下组与睾酮正常组老年男性胃癌患者发病部位，临床分期以及Brrmann分型差异不显著(P>0.05)。睾酮低下组患者相比睾酮正常组患者，外周血CEA-mRNA阳性率高(P<0.05)，CEA蛋白水平差异不显著(P>0.05)。结论 睾酮低下老年胃癌患者容易出现外周血微转移。
【关键词】 胃癌；雄激素；CEA-mRNA
Observation of the effect of serum androgen level on the expression of CEA-mRNA in senile male patients with gastric carcinoma.
L Hui-sheng.
Haifeng Pengpai Memorial Hospital, Haifeng 516400, Guangdong, P. R. China
Abstract：Objective To observe the effects of serum androgen level on the expression of CEA-mRNA in senile male patients with gastric carcinoma. Methods There 60 senile male patients with gastric carcinoma were divided into low level androgen group and normal level androgen group. The clinical features of all patients in two group, such as invasion position, clinical stages and Brrmann category , were all investigated. The serum level of CEA-mRNA and CEA were detected too. Results The clinical feature (such as invasion position distribution, clinical stages and Brrmann category) between the low level androgen group and the normal level androgen group were not significantly different (P>0.05). The positive rate of CEA-mRNA in patients of the low level androgen group were higher than that of the normal level androgen group (P<0.05). The positive rates of serum CEA in patients of the low level androgen group and the normal level androgen group were not significanly different (P>0.05). Conclusion The peripheral blood micrometastasis easily occur to the senile male gastric carcinoma patients with lower level of serum androgen.
Key words：Gastric carcinoma; Androgen; CEA-mRNA
胃癌等消化道肿瘤有合成性激素的能力，存在雄激素受体，是具有一定的性激素依赖性的实体瘤［1,2］。不少研究表明，部分胃癌中雄激素水平低下，而且与病理类型，肿瘤侵润深度，分化程度等有关［3］。但是，胃癌雄激素水平低下与血液转移关系却鲜有报道。为此，我们对60例男性胃癌病人进行睾酮和CEAmRNA水平测定，报道如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象
入选对象为2003年3月～2007年2月在我院肿瘤外科住院年龄大于60岁的60例胃癌患者，均为男性，年龄(66.2±5.7)岁，所有患者均经电子胃镜检查并经病理活检证实为胃腺癌。有远处转移，肝肾功能下降，严重内科疾病，激素治疗病史的患者列入排除标准。
1.2 病例分组
根据患者睾酮异常与否，分为睾酮低下组与睾酮正常组。其中睾酮低下组18例，睾酮正常组42例。
1.3 患者睾酮异常的判定
1.3.1 睾酮检测
上午6：30～7：00抽取静脉血2ml，凝固后分离出血清（严重溶血标本不能测定），置于-20℃冰箱冻存备用。总睾酮检测采用全自动化学发光免疫仪ACS：180检测(拜耳公司产品)，批内变异系数(C)分别为4.8、6.5,批间CV分别为6.6、7.0。游离睾酮根据Vermeulen公式计算。标本的测定由同一检测者完成。
1.3.2 睾酮标准值确定
检测10例老年健康人游离睾酮，得到均值以及标准差。胃癌患者游离睾酮水平与健康对照差异超过1个标准差判定为异常。
1.4 实时荧光定量PCR检测CEA-mRNA
术前抽取患者外周静脉血，肝素抗凝，为防止表皮细胞掺入，取第2管血约5ml，淋巴细胞分离液分离有核细胞，再以Trizol抽提制备总RNA。采用上海久盛医疗用品有限公司的荧光定量PCR检测CEA mRNA试剂盒，参照说明书进行操作。CEA扩增的上游引物为5’-GCCTTGACAAAACGTTCCTGG-3’，下游引物为5’-GAACGGCGTGGATTCAATAGTG-3’。每实验设4个标准品，拷贝数分别为4×108、4×107、4×106和4×105，并设立阴性、阳性对照。用PE-7700荧光仪进行检测，根据标准曲线，得到各检测标本的浓度。参照试剂盒提供的阳性界值，CEA mRNA>1 000拷贝数/ml为阳性。
1.5 放射免疫法检测CEA蛋白
术前采集空腹静脉血2ml，即时分离血清，采用由中国原子能研究所提供的试剂盒，按说明书进行操作，以CEA蛋白>5g/L为阳性标准。
1.6 统计学处理
数据采用阳性率表示，用SPSS 11.1软件包进行统计学检验。统计方法采用卡方检验，以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者临床情况分析
睾酮正常组临床分期：I期0例，II期13例，III期29例，IV型0例。部位：胃底6例，胃窦部7例，贲门部9例，胃体部20例。Brrmann分型： I型7例，II型18例，III型13例，IV型4例。睾酮低下组临床分期：I期0例，II期6例，III期12例，IV型0例。部位：胃底2例，胃窦部3例，贲门部5例，胃体部8例。Brrmann分型：I型4例，II型7例，III型5例，IV型2例。两组患者年龄，病程，发病部位，临床分期以及Brrmann分型等临床特征差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。表1 睾酮正常组与睾酮低下组临床特征分析组别例数年龄（略）
2.2 两组患者CEA-mRNA与CEA蛋白阳性率情况
见表2。所有患者中，未发现睾酮水平高于正常对照者。睾酮正常组CEA-mRNA阳性4例，CEA蛋白阳性15例。睾酮低下组CEA-mRNA阳性6例，CEA蛋白阳性7例。睾酮正常组患者CEA-mRNA阳性率低于睾酮低下组，且两组患者CEA-mRNA差别有统计学意义(P<0.05)；而睾酮正常组患者CEA蛋白阳性率与睾酮低下组差别不显著(P>0.05)。表2 睾酮正常组与睾酮低下组CEA-mRNA与CEA蛋白阳性率比较（略）注:*与睾酮低下组比较，P<0.05。
3 讨论
胃癌等消化道肿瘤有合成性激素的能力，存在雄激素受体，表明胃癌可能是一种与激素相关疾病［1,2］。研究表明，部分胃癌中雄激素水平低下，而且与病理类型，肿瘤侵润深度，分化程度等有关［3］。但是，胃癌雄激素水平低下与外周血CEAmRNA-CEA蛋白系统关系却鲜有报道。
我们研究发现，雄激素水平低下胃癌患者与雄激素水平正常者临床特征差异不显著。而雄激素水平低下胃癌患者外周血CEA-mRNA阳性率高于雄激素水平正常者，而CEA蛋白差异则不显著。CEA是特异性较高的肿瘤相关抗原，在正常人造血细胞及外周血中无CEA-mRNA的表达。CEA-mRNA在细胞外环境中非常不稳定，如胃癌患者外周血中检测出CEA mRNA，说明外周血中有胃癌细胞存在［4］。表明雄激素水平低下胃癌患者更加容易产生微转移。
胃癌患者外周血CEA-mRNA阳性率与病变浸润深度，分化程度，分期等均有关［5,6］。雄激素水平低下与雄激素水平正常者胃癌患者年龄，病程，发病部位，临床分期，Brrmann分型差异不显著，而病理类型都是腺癌，所以激素水平差异是导致2组胃癌患者外周血CEA-mRNA阳性率差异最可能的原因，但具体机理尚待进一步研究。
外周血中CEA-mRNA表达还可能与白细胞等再生幼稚细胞以及非上皮细胞的低水平表达、患者存在表达CEA的其他亚临床恶性肿瘤的可能和实验污染相关［7，8］。由于人体白细胞等表达CEA-mRNA量极低，同时本研究患者排除了伴发其他肿瘤情况，可以认为上述情况对测定结果的影响较小。
血清睾酮含量随年龄、性别而异，且有昼夜变化［9,10］。所以，实验中我们进行睾酮测定时，固定统一采血时间。另外，我们还选择了AR的阳性率较高的男性患者进行研究，以期最大减少偏倚出现。
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作者单位：海丰县彭湃纪念医院肿瘤科,广东 海丰 516400.