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【摘要】 目的 了解阿苯达唑对犬钩蚴作用。 方法 将含有犬钩虫卵的标本充分置于固体培养基滤纸上，用竹签轻轻的均匀按压，使之与滤纸广泛、紧密接触，盖上平皿盖。放35℃培养（孵化）箱培养24h，将药物与培养物钩蚴混匀，并记录药物作用时间，用水洗沉淀法，镜下分别观察药物作用24h、48h的沉淀物中钩蚴的生长发育情况。 结果 药物作用24h、48h后，与对照组相比，阿苯达唑效果明显，其大小发育停止、轮廓模糊、内部结构不清消失。 结论 阿苯达唑对钩蚴有明显作用，妨碍虫体生长发育。
【关键词】 犬钩蚴；阿苯达唑；效果
钩虫是钩口线虫的统称，寄生人体钩虫主要为十二指肠钩口线虫和美洲板口线虫。犬钩口线虫（Ancylostoma caninum）偶尔寄生在人体［1］。钩虫病是重要的人兽共患病之一，阿苯达唑主要用于肠道蠕虫、组织内线虫感染，亦可用于囊虫病、包虫病、肝吸虫病和肺吸虫病［1］。药物体外作用钩蚴观察报道尚少, 本实验应用一种新的体外培养钩蚴方法,观察该药对钩蚴的体外杀伤效果。借以探讨药物对钩虫的作用机制。
1 材料与方法
1．1 固体培养基的制备［2］ 1号试剂3g，2号试剂10g，3号试剂5g，4号试剂20g，蒸馏水1 000ml置锥形瓶，加热熔解后，校正pH7.4～7.6,煮沸3～5min 103.43kPa、20min，高压蒸气灭菌后，冷至50℃左右，倾注直径为7cm圆形平板备用。
1．2 培养物接种 先将与培养基等圆的中性滤纸用镊子贴在培养基表面，然后取狗粪便8g用镊子将粪便捣碎置于培养基滤纸上，轻轻均匀按压，使之与滤纸广泛、紧密接触，盖上平板盖。
1．3 分组 共接种5个培养基，其中3个培养基为对照组，分别作为为培养24h、48h、72h正常钩蚴生长发育情况对照。1个培养基为药物作用24h后实验组（培养48h）。1个培养基为药物作用48h后实验组（培养72h）。
1．4 钩蚴培养 先将一条湿毛巾置于方盘中，将含有培养物的5个培养基放在湿毛巾上，然后再盖上一条湿毛巾，置于35℃培养（孵化）箱培养。
1．5 用药与培养 将阿苯达唑（10mg）与培养24h后粪便标本充分混匀，用上述同样方法继续培养。
1．6 用药后观察 分别将不同时间（培养24h、48h、72h）对照组、药物、不同作用时间实验组，即药物作用24h（培养48h）、48h（培养72h）的培养标本，采用水洗沉淀法，取沉渣于光学显微镜观察，并显微照像，观察钩蚴其生长发育、大小与结构的变化。
2 结果
2．1 培养前犬钩虫卵 形态典型，椭圆形，卵壳簿，无色透明，卵细胞与卵壳之间有空隙。
2．2 对照组培养24h后，用水洗沉淀法，镜下观察沉渣，可见杆状蚴虫体透明，结构清晰（图1）。对照组培养48h后，用水洗沉淀法，镜下观察沉渣，可见钩蚴，明显长大，虫体透明，结构清晰（图2），对照组培养72h后，体态弯曲自然，透明，结构清晰。
2．3 阿苯达唑作用24h后（培养48h），用水洗沉淀法，镜下观察沉渣，钩蚴末生长，大小停留在培养24h状态（图3），仅是对照组（图1）大小的1/2，且内部结构不清晰。阿苯达唑作用48h后（培养72h），钩蚴仍末见发育，大小（图4）仍然停留在培养24h状态（图1），虫体轮廓不清，内部结构模糊呈颗粒状，角质层折光性消失（图5）。
图1 对照培养24h ，体表透明，咽管内部结构清晰口孔明显，40×（略）
图2 对照 培养48h,虫体透明，轮廓明显，内部咽管结构清晰可见，口孔封闭，40×（略）
图3 阿苯达唑作用24h后（培养48h），10×（略）
3 讨论
实验结果显示钩蚴发育受阻，与詹希美［1］报导阿苯达唑妨碍虫体生长，王泽民［3］报导致使寄生虫无法生存和生育相一致。阿苯达唑对钩蚴体外作用尚末见报导，实验结果显示，对照组培养24h、48h、72h钩蚴发育情况，大小有明显的变化。阿苯达唑对钩蚴作用较强，药物作用24h、48h（培养48h、72h）其大小变化依然停留在24h对照组状态h。虫体大小发育阶段的变化情况，可视为药物作用敏感机制之一。
图4 阿苯达唑作用48h后（培养72h），虫体末见发育，大小依然停留在24h培养发育状态。10×（略）
图5 阿苯达唑作用48h（培养72h），虫体轮廓及咽管结构模糊不清，呈颗粒状，40 ×（略）
结果显示对照组虫体体态弯曲自然、轮廓明显、透明、内部结构清晰。阿苯达唑作用24h（培养48h）可见虫体轮廓模糊，内部结构不清晰，作用48h（培养72h）虫体僵直，内部结构消失，呈颗粒状。药物对虫体体态弯曲自然、轮廓明显、透明度、内部结构的影响情况亦是药物作用的另一机制。
阿苯达唑为广谱、高效、低度驱虫药，可导致虫体糖原的耗竭并抑制延胡索酸还原酶系统阻碍ATP的产生，致使寄生虫无法生存和生育［2］。这些是导致药物作用24h、48h（培养48h、72h）虫体大小发育依然停滞在24h对照组生育状态，及虫体轮廓模糊、僵直、内部结构消失的原因。
【参考文献】
［1］ 陈建平，十二指肠钩口线虫和美州板口线虫， 詹希美主编,人体寄生虫学［M］.第5版.北京：人民卫生出版社，2002,204，325～335.
［2］ 许正敏，李智山,孙莉，等. 犬钩蚴固体培养基滤纸培养法［J］. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2007，25：358.
［3］ 王泽民.当代结构药物全集［M］.第1版.北京：北京科学技术出版社，1993,541～543.
作者单位：襄樊职业技术学院医学院病原生物与免疫学基础教研室, 湖北 襄樊 441021; 华中科技大学同济医学院附属襄樊医院，湖北 襄樊 441021.