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【摘要】 目的 探讨人乳头瘤病毒（Human papillomavirus, HPV）E6、E7和p53蛋白在非小细胞肺癌（Non-small-cell lung cancer,NSCLC）中的表达及相关性。 方法 应用免疫组化方法（IHC）分别检测60例NSCLC组织中HPV E6、E7原癌蛋白和p53蛋白的表达情况。 结果 NSCLC中HPV E6、E7原癌蛋白的检出率为41.7%；p53的阳性率为61.7 %；HPV E6、E7阳性表达与高中分化程度的NSCLC及吸烟相关，且HPVE6、E7阳性表达组中p53蛋白阳性表达率(70.3%)显著高于阴性组(48.6%)(P<0.05)。 结论 HPV感染可能导致p53基因突变，可能是NSCLC发生的另一重要病因学因素。
【关键词】 HPV；p53蛋白；非小细胞肺癌；免疫组化
自Syrjanen［1］首次提出人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus ,HPV)感染可能与肺癌发生有关后, 许多研究表明HPV感染与肺癌密切相关。有研究认为HPV感染后可能通过其导致p53基因发生突变而致癌［2,3］。本研究旨在探讨HPV的感染、p53突变与非小细胞肺癌的临床相关性。
1 材料和方法
1.1 材料 66例材料均取自协和医院2006年5月～2007年5月手术切除新鲜肺组织标本，取材后分别经中性福尔马林固定，石蜡包埋后用做病理诊断及免疫组化染色。所有标本术前均未进行放化疗。其中NSCLC 60例,包括鳞癌33例及腺癌27例；高中分化、低分化分别是37、23例；淋巴结转移45例,吸烟者39例。肺良性病变标本6例。
1.2 免疫组化染色 HPV E6、E7原癌蛋白和p53鼠抗人单克隆抗体及通用型SP试剂盒购自北京中杉金桥公司,操作严格按试剂盒说明书进行操作。以既往阳性片作为阳性对照, 以磷酸盐缓冲液(PBS) 代替一抗作阴性对照,二氨基联苯胺(DAB) 显色。
1.3 阳性判断标准 结果判定: HPV E6、E7蛋白和p53蛋白阳性为有棕黄色细小颗粒分布在细胞核上。阳性细胞记数: 每张切片随机取4个视野,每个视野计数100个细胞, 按高倍镜下阳性细胞占肿瘤细胞的比例分为4级: 无阳性细胞为阴性, 阳性细胞<25%为(+); 25 %～50%为(++)；>50 %为（+++）。
1.4 统计学处理 采用SPSS统计软件进行χ2检验。
2 结果
2.1 NSCLC中HPV E6、E7蛋白的检测 60例NSCLC中HPV E6、E7蛋白的阳性表达率为41.7%(25/60) （见图1～2）。
2.2 NSCLC中p53蛋白的表达及其与HPV感染之间的关系 60例NSCLC中p53蛋白阳性表达率为61.7% (37/60)（见图3～4）。HPVE6、E7阳性表达组与阴性组间p53蛋白表达率分别为72.0%(18/25)、48.6%(17/35)，两组间存在显著性差异（χ2=3.11，P<0.05）。
图1 HPV E6、E7在肺鳞癌中的阳性表达（SP×200）（略）
图2 HPV E6、E7在肺腺癌中的阳性表达（SP×200）（略）
图3 P53在肺鳞癌中的阳性表达（SP×200）（略）
图4 P53在肺腺癌中的阳性表达（SP×200）（略）
2.3 NSCLC中HPV和p53的表达与临床病理参数的关系 高中分化程度的NSCLC中HPV E6、E7阳性表达率为59.5%，显著高于低分化程度中13.0%的表达率，存在显著性差异（χ2=3.98，P<0.05）； HPV E6、E7阳性表达率吸烟患者（53.8％）显著高于不吸烟患者（19.0％），两者间有显著差异（χ2=5.16，P<0.05），而与组织学类型、淋巴结转移等无关。p53蛋白肺鳞癌和腺癌表达率分别为84.8%和33.3%，两者间有显著差异（χ2=4.36，P<0.05）（见表1）。
表1 肺癌组织中HPV E6、E7和P53蛋白阳性表达与临床病理特征的关系（略）
Table 1 Correlation of the positive expression of HPV E6、E7 and P53 with clinical pathological characteristics between in NSCLC
3 讨论
本研究采用免疫组化法检测HPV E6、E7原癌蛋白, 其阳性表达率为41.7%。结果还显示HPV E6、E7阳性表达率和肺癌分化的程度以及吸烟有关，研究［4,5］认为吸烟能使正常上皮中具递呈抗原作用的细胞数量减少,从而促进HPV的感染和持续存在,而与分化程度有关可能是与宿主细胞的DNA复制环境有关。本实验还显示,p53蛋白阳性表达率为61.7%, 由于p53蛋白的异常表达与p53基因突变有着良好的相关性, 所以免疫组织化学法检测到p53蛋白表达即可认为突变型p53基因的存在，并被认为是p53基因突变的标志［6］。目前认为HPV致癌的机制主要是通过其早期的基因产物E6、E7原癌蛋白激活细胞周期调节因子p53和Rb蛋白,从而干扰了细胞周期调控。大多数研究者认为E6蛋白与p53结合后,通过依赖蛋白酶系统将后者水解,导致p53失活；也有研究者认为E6蛋白与P53的结合, 导致宿主细胞对受损DNA的复制和分裂失去了阻滞作用, 使得突变的基因得以复制和积累, 从而介导了p53基因的突变［2,7］。本研究显示HPVE6、E7阳性表达组中p53蛋白表达率显著高于阴性组, 与文献［7］报道相仿，提示HPV感染与p53基因突变在非小细胞肺癌的发生、发展中可能起着重要作用, HPV可能是通过其导致p53基因突变促进细胞的恶性转化,成为非小细胞肺癌多步骤进程中的起始环节。
【参考文献】
1］ Syrjanen KJ. Bronchial squamous cell carcinomas associated with epithelial changes identical to condylomatous lesions of the uterine cervix［J］. Lung, 1979, 158:131.
［2］ Hickman ES, Bates S, Vousden KH. Perturbation of the p53 response by human papillomavirus type 16 E7［J］. J Virol,1997，71(5):3710～3718.
［3］ Cooper B, Brimer N, Vande Pol SB. Human papillomavirus E6 regulates the cytoskeleton dynamics of keratinocytes through targeted degradation of p53［J］. J Virol,2007,81(22):12675～26759.
［4］ Burger MPM ,Hollema H ,Gouw ASH ,et al. Cigarette smoking and human papillomavirus in patients with reported cervical cytological abnormality［J］. Br Med J,1993,306(4):749～752.
［5］ Nielson CM, Harris RB, Dunne EF,et al. Risk factors for anogenital human papillomavirus infection in men［J］. J Infect Dis, 2007,196(8):1137～1145.
［6］ Benhattar J, Cerottinig JP, Saraga E, et al. p53 mutation as a possible predictor of reponse to chemotherapy in metastatic colorectal carcinoma［J］. Int J Cancer, 1996, 69(3):190～192.
［7］ Hebner C, Beglin M, Laimins LA. Human papillomavirus E6 proteins mediate resistance to interferon-induced growth arrest through inhibition of p53 acetylation［J］. J Virol, 2007, 81(23):12740～27407.
作者单位：海南省妇幼保健院病理科，海南 海口 570206; 华中科技大学同济医学院附属协和医院超声诊断科, 湖北 武汉 430022；海南医学院肿瘤研究所, 海南 海口 571101.