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【摘要】 目的 研究中药改良营养琼脂培养苛养菌的效果。 方法 分别用单味和配伍的党参、杞子、红枣、赤小豆等中药加入营养琼脂培养苛养菌，并与血平板进行比较。 结果 多种苛养菌在中药改良的各种培养基上都有不同程度生长,以红枣和赤小豆配伍改良的营养琼脂上菌落生长和可观察性效果最佳。与血平板比较，经配对t检验，差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论 在缺乏血液培养基的乡镇卫生院，可用红枣赤小豆平板代替血平板用于常见苛养菌的培养。
【关键词】 中药 改良 营养琼脂 苛养菌
医院化验室通常都是用血平板进行常规细菌培养。但乡镇卫生院缺乏动物饲养室，不能用动物血制备血平板。购买现成一次性血平板，检验成本高，且保质期短。故许多乡镇卫生院无法开展细菌的常规培养和药敏试验。为此，本课题组开展了用中药改良普通培养基，代替血平板培养苛养菌的研究。经用10多种中药试验，筛选出几种可促进多种苛养菌生长的中药琼脂平板。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 培养基
1.1.1 普通琼脂平板 用营养琼脂（杭州天和微生物试剂有限公司生产）按常规方法制成。
1.1.2 血琼脂平板 用家兔血以7％比例加入营养琼脂中，按常规方法制成。
1.1.3 中药琼脂平板 取市售中药党参、杞子、红枣、赤小豆。党参选粗大无蛀虫的；杞子选粒大、味甜不酸的宁夏杞子；红枣选果肉厚、味甜可口的大枣，去核，掰成小粒；赤小豆成粒，不必打碎以免液体混浊。为使制成的平板透明无颗粒，避免与菌落混淆，红枣和赤小豆用双层纱布宽松包裹，各按100g/L浓度分别用蒸馏水在冰箱中浸泡数小时或过夜后，按常规方法高压蒸汽灭菌备用。
党参、杞子、红枣板、赤小豆4种单味中药平板：取100ml熔化的灭菌营养琼脂，趁热加入10ml中药液混匀候凉至50～55℃左右倒制成单味中药改良平板。
红枣与赤小豆、红枣与党参、红枣与杞子、党参与杞子、红枣党参与杞子5种配方中药平板：同上方法,前者是取红枣和赤小豆液各10ml加入100ml营养琼脂中，后四者都是取所含药液各加5ml于100ml营养琼脂中,混匀制成配方中药平板。
1.2 菌种 选用常规需要含血培养基才能生长的苛养菌。甲型链球菌、乙型链球菌、白喉棒状杆菌（三种均是武汉生物制品厂提供的转种菌株）；肺炎链球菌（来自本市红会医院提供的菌株）。
1.3 方法
1.3.1 定性与初步定量测定 采用自身比较设计。取上述菌株的血平板24h培养物，制成0.5麦氏管浓度后进行1:1 500稀释（经系列稀释菌液预试后选定此最佳稀释度）。各用定量接种环取2μl涂布于血平板和各种中药平板上，每种平板各种4个。35℃培养24h观察结果,并粗略作细菌落计数。
1.3.2 两种平板培养效果的定量比较测定 对每类平板培养结果进行菌落计数，在40倍显微镜下用测微器测量并计算每个平板上平均菌落直径和生长指数（每个平板上细菌生长指数＝菌落数×菌落平均直径）［1］。最后计算每类平板上每种细菌的平均菌落数、平均生长指数（4个平板上生长指数的平均值）。
2 结果
每种苛养菌在各种平板上都有不同程度生长。中药改良平板类，以红枣和赤小豆配方的平板（以下简称枣豆平板）的菌落数量、大小和肉眼可见度等综合性状最佳,其平板呈较淡暗红色，各种苛养菌的菌落较易观察，菌落大小和菌落数量与血平板的接近。
选取血平板和枣豆平板按以上“1.3.2”项方法作定量测定结果,用配对t检验比较血平板和枣豆平板各菌生长指数,见表1。因其他中药平板的菌落略小、略少或背景太透亮不易观察，故不予计数和测量。
表1 苛养菌在血平板和枣豆平板上生长指数比较（略）
从表1可见各菌在枣豆平板上的生长指数与血平板相比，都是P＞0.05，差异无显著性意义。表明枣豆平板可代替血平板培养这些苛养菌。
取枣豆平板上各种菌落进行革兰染色并做相应的生化反应，结果与原菌特性一致。
3 讨论
3.1 红枣和赤小豆的作用 红枣营养十分丰富，含大量糖类如葡萄糖、果糖、蔗糖、环磷腺苷、环磷鸟苷，还有蛋白质、多种氨基酸、维生素C、核黄素、胡萝卜素、烟酸、铁、钙、磷等矿物质以及包括硒在内的26种微量元素等［2］。赤小豆也含有大量营养物质，如蛋白质、脂肪、多糖、多种无机盐和微量元素如钾、钙、镁、铁、铜、锰、锌及多种维生素如硫胺素、核黄素、烟酸等［3］。二者丰富的营养物质和生长因子可促进细菌生长。并且赤小豆配制的平板呈较淡的暗红色，形成的背景反差，利于观察菌落。
3.2 用中药改良普通培养基代替血平板的优点 一是降低检验成本。营养琼脂250g/瓶，每瓶75元，可制备约650个平板。红枣、赤小豆都是廉价中药，2～3元药材费用即可制备1000个平板，每个中药平板费用不足1元。而一次性血平板每个5元左右。按每天的平板使用量长久累计，即可减少大笔开支。更成问题的是，一次性血平板有效期短（3个月），购买多了用不完即失效或污染，无形中增加了检验成本。购买少了不够用，影响日常检验工作。尤其在乡镇卫生院，需要进行细菌培养的标本数量难以较准确的估计，不如自己配制平板灵活、方便、节省。二是减少制备血平板添加血液时的麻烦和容易污染的机会。自己动手制备血平板时，需待营养琼脂冷却至合适温度才能加血，这样既麻烦，又容易污染。中药改良培养基，可事先加中药或灭菌后马上趁热加中药，不易污染。三是用无血培养基培养细菌在做一些细菌鉴定生化反应如氧化酶试验、触酶试验等时，避免了误取血液成份造成的假阳性。四是用这些中药可代替血清添加于一些生化反应培养基上。如链激酶试验、血清菊糖试验等，都需要血清，用这些中药代替血清，也能取得同样结果，减少开支。五是对产生色素的菌落，更容易观察。血平板的背景，不太容易观察某些色素。如铜绿假单胞菌的绿色，在血平板上呈暗绿色，有时不容易与产生陈旧溶血性的细菌如变形杆菌、枯草杆菌区别。而在中药改良的普通平板上，即使微弱的色素，也容易察觉。六是添加中药于培养基可促进细菌生长这一研究结果，将给细胞培养方法的改良、食用微生物产品（如酸奶、益生菌制剂）和用药微生物类药物（如乳酶生）的生产、提高产量等方面提供新的思路。
3.3 中药改良平板代替血平板的不足 中药改良平板培养苛养菌的不足之处是不能观察各种溶血性状。尤其甲型链球菌，菌落针尖般大小，在血平板上主要靠其草绿色溶血环辨认，而在各中药无血平板上，都不能观察其溶血特征。但根据菌落大小、性状和涂片镜检结果，也可以做出正确判断。此外，红枣和赤小豆的产地、质量，以及营养琼脂的质量，也会影响实验结果。故每批培养基应用标准菌株做好质控。
红枣赤小豆平板用于培养常见苛养菌，利大于弊。尤为适用于需要减少诊疗费用的乡镇卫生院。这对于目前新型农村合作医疗制度正在广泛实施，如何降低诊治费用，让利于老百姓，解决看病贵、看病难的问题具有重要意义。
【参考文献】
［1］ 修清玉,方正,赖国祥,等.改良流感嗜血杆菌培养基的实验研究与评价［J］. 中华医学检验杂志,1998,21(3):161.
［2］ 方文贤,刘萍,王巍,等. 实用临床抗衰老中药［M］. 辽宁:辽宁科技出版社,2004,7.
［3］ 王锦鸿,陈仁寿. 临床实用中药辞典［M］. 北京:金盾出版社,2003,44:370.
作者单位：玉林市卫生学校检验教研室，广西 玉林 537000