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【摘要】 目的：探测精神分裂症与细胞色素P4502D6基因多态性关系。方法：用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（PCR－RFLP）技术分析92例精神分裂症患者的CYP2D6基因多态性，并以92例正常人作为对照。结果：在精神分裂症组和正常对照组中，等位基因Ｃ、Ｔ及基因型C/T，C/C，Ｔ/Ｔ的差异没有显著性（P>0.05）。结论：本组样本中CYP2D6基因多态性与精神分裂症不相关联。提示CYP2D6C188T突变可能不是导致精神分裂症发病的主要因素。
【关键词】 精神分裂症；CYP2D6基因；多态性；病例对照研究
Association Study of Cytochrome P4502D6 gene Polymorphism and Schizophrenia of Chinese People
DENG Xiao-min, YAN Xiao-hua, WU Huai-an, et al
(Shenzhen Institute of Mental Health, Guangdong 518020, China)
【Abstract】 Objective：To explore the relationship between polymorphism of cytochrome P4502D6 (CYP2D6) gene and schizophrenia in Chinese. Methods:92 Chinese patients with schizophrenia and 92 normal Chinese control were involved in the study. The CYP2D6 gene polymorphism was determined with the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) technique.Results: The frequencies of CYP2D6C188T(C, T, C/T,C/C, T/T)gene/genotype were no significantly different (P>0.05) between patients with schizophrenia and normal Chinese control.Conclusions: Our results indicate that CYP2D6C188T polymorphism has no associated with schizophrenia of Chinese, CYP2D6C188T gene mutation were no main cause of schizophrenia.
【Key words】Cytochrome; P4502D6 gene; Polymorphism; Treatment-resistant schizophrenia; Case-control studies
细胞色素P4502D6(Cytochrome P4502，CYP2D6)是细胞色素类药物代谢具有重要作用的酶之一，参与多种药物的代谢，研究表明CYP2D6具遗传多态性［1］ 。为了探查精神分裂症（ schizophrenia， SP）发病原因和遗传机制，我们研究了92例精神分裂症患者的CYP2D6基因多态性分布，并以92例正常人作为对照。现将研究结果报道如下。
1 对象和方法
1.1 对象
精神分裂症患者92例为2000年1月至2003年12月住院精神分裂症患者，全部受试者均经过三级查房确诊精神分裂症，首次接受药物治疗，均符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-Ⅳ)精神分裂症诊断标准。
对照组：以年龄及性别和种族与患者组匹配为原则，在志愿的前提下，用DSM-Ⅳ轴Ⅰ障碍定式临床检查问卷(SCID-1)从本院职工筛选92例无精神疾患的正常人，其直系血亲中均无精神病史，相互无血缘关系。
精神分裂症患者92例(男性60例，女性32例)，均为汉族，平均（32±12）岁；正常对照组92例(男性60例,女性32例)，均为汉族，平均（31±13）岁。
1.2 方法
1.2.1 基因多态性分析
按照知情同意原则，经患者／患者家属同意后每个入组者抽取静脉血5ml(肝素抗凝)，用常规酚-氯仿法抽提基因组DNA，-70 ℃冰箱保存备用。
1.2.2 聚合酶链反应-限制性片断长度多态性分析
用PE9700型热循环仪进行DNA扩增,反应体积25μl,其中：kcl(1.25 mmol/ml)1 μl，Mgcl2(37.5 umol/ml)1 μl，Tris-Hcl(PH 9.0，0.25 mmol/ml)1 μl，Triton-1001 μl，DMSO 1.5 μl，dNTPs(5 μmol/ml)1μl，模板DNA150 ng。
CYP2D6A基因扩增［3］ ：引物1 (5' -GAT GAG CTG CTA ACT GA-3' )，引物2（5' -CCG AGA GCA TAC TCG GGA C-3' ），热循环程序为94 ℃预变性5 min，(94 ℃ 30S；60 ℃ 30 S；72 ℃ 60 S)×35，72 ℃10 min。PCR产物为268 bp的片段。用限制性内切酶HpaⅡ(37 ℃)酶切过夜，12%聚丙烯酰胺凝胶电泳，EB染色1h后分析结果，野生型产生188 bp和82 bp片段，突变型则产生168 bp，82 bp和20 bp片段。
CYP2D6B基因扩增［4］ ：引物1 (5' -GCC TTC GCCAAC CAC TCC G-3' )，引物2(5' -AAA TCC TGC TCT TCC GAG GC-3' )，热循环程序为95 ℃预变性5 min(95 ℃ 30S；61 ℃ 30 S；72 ℃ 90 S)×35，72 ℃ 10 min。PCR产物为292 bp的片段。用限制性内切酶BstNⅠ(37 ℃)酶切过夜，12%聚丙烯酰胺凝胶电泳，EB染色1 h后分析结果，野生型为181 bp和111 bp片段，突变型不能被酶切，为292 bp片段。
CYP2D6ch（CYP2D6j）基因扩增［3］ ：引物1 (5' -CAT TTG GTA GTG AGG CAG GT-3' )，引物2(5' -CTC CAG GAC CTC CTCCCT C-3' )，热循环程序为95 ℃预变性5 min(95 ℃ 30S；59.5 ℃ 30 S；72 ℃ 50 S)×35，72 ℃10 min。PCR产物为220 bp的片段，用限制性内切酶HphⅠ(37 ℃)酶切过夜，12%聚丙烯酰胺凝胶电泳，EB染色1 h后分析结果，野生型不能被酶切，为220 bp片段，突变型可被酶切为119 bp和101 bp片段。
1.2.3 采用HWE软件进行Hardy-Weinberg平衡定律平衡检测.用x2检验精神分裂症患者组和对照组进行CYP2D6A,B,ch基因/基因型频率的差异及两组的年龄差异。
2 结果
2.1 Hardy-Weinberg平衡定律平衡检测
精神分裂症患者组和正常对照组基因/基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律，两组间年龄的差异无显著性(P>0.05)。
2.2 CYP2D6A突变型(2637位碱基A缺失),CYP2D6B突变型(G1934A)多态性检测
精神分裂症患者组和正常对照组中均未发现CYP2D6A(2637位碱基A缺失)和CYP2D6B(G1934A)多态性,即均未发现突变型。
2.3 CYP2D6ch(C188T)多态性检测及显著性比较结果见表1
从表1可见，精神分裂症患者组和正常对照组之间，等位基因C、T的差异无显著性(P>0.05)，基因型C/T、C/C、T/T的差异均无显著性(P>0.05)。表1 精神分裂症患者组和正常对照组CYP2D6ch(C188T)多态性比较(略)
3 讨论
CYP450广泛分布于人体肝肾胃肠道等组织，不仅存在于内质网，在线粒体和核膜上均有分布。现已了解：哺乳动物有17个CYP450基因家族，36个基因亚族，主要为CYP1-4大家族，其中CYP2D6基因是研究热点之一［5］ 。CYP2D6基因定位于22号染色体长臂(22g13.1)，是由CYP2D6、7、8共同构成，其中CYP2D7和CYP2D8是假基因，只有CYP2D6可在肝及其他组织表达［6］ 。
由于CYP2D6是人体一种重要的代谢酶，且该酶缺陷与某些疾病的易感性有着密切关系［7］ ，故本研究选择CYP2D6A(第5外显子2637位碱基A缺失造成酶活性缺陷)，CYP2D6B(第3和4外显子之间第1934位碱基G突变为A造成酶活性缺陷)，CYP2D6ch(第一外显子188位碱基C突变为G造成酶活性缺陷)的多态性与精神分裂症进行关联分析，探测精神分裂症发病原因和遗传机制。
CYP2D6与精神分裂症连锁/关联的研究报道鲜见，本研究结果可为该方面研究提供一份有较大参考价值的资料。陈枢青等(1998)报道CYP2D6缺陷型等位基因呈常染色体隐性遗传，付燕等(2006)报道慢性精神分裂症患者迟发运动障碍与CYP2D6ch多态性相关联［8，9］ ，这些资料增添了中国人群中CYP2D6与疾病相关的佐证。
本研究结果显示，在所分析的对象中未发现CYP2D6A，CYP2D6B多态性，即未发现CYP2DA，CYP2D6B的突变型，此与其他研究者的报道相同［3，4］ ，而CYP2D6ch基因/基因型频率在精神分裂症组和正常对照组之间的差异均无显著性意义(详见表1)，该结果表明：CYP2D6ch多态性与精神分裂症不相关联，提示CYP2D6ch基因突变可能在精神分裂症发病中无明显的遗传学效应，有理由推断CYP2D6ch基因突变可能未增加精神分裂症发生的易感性。
【参考文献】
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作者单位：广东省深圳市精神卫生研究所，广东 深圳 518020