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【摘要】 目的：探求适宜的钉螺饲养方法及日本血吸虫尾蚴释放的最佳条件，为血吸虫病防治科研课题的开展提供可行的实验方法。方法：将200只钉螺分为A、B、C、D四组，采用不同的光照、容器、饲料等条件饲养，比较观察不同条件下钉螺存活时间与释放尾蚴的次数及钉螺死亡率；设置15组不同的条件,观察释放尾蚴的时间与尾蚴数量。结果：用混合饲料饲养、光照射、活动空间大的C组，钉螺存活时间为45 d，释放尾蚴4次；用砚台饲养、无光照射B、A组及用奶粉饲料、光照射D组，钉螺存活时间分别为10 d、15 d、29 d；释放尾蚴次依次为1、2、3次；用自来水、塑料网罩组5 h无尾蚴释放；用脱氯水或凉开水、晴天、温度29~30 ℃组，30~180 min每组平均释放尾蚴1 783条；同样条件下，温度25~26 ℃组，60~180 min每组平均释放尾蚴1 733条；阴雨天组，90~180 min每组平均释放尾蚴716条。结论：温度为24~28 ℃，白日持续日光灯照射,去氯水保湿,活动空间较宽的环境中,用泥土混合饲料饲养钉螺，活动状态较好,生存时间相对较长，可多次释放尾蚴；在26~30 ℃温度, 晴天, 用脱氯水或凉开水，加钢丝网罩,尾蚴释放快、数量多。
【关键词】 饲养；钉螺；日本血吸虫尾蚴；观察
基金项目：湖北科技攻关计划资助项目（2006AA402C51） 。
钉螺是日本血吸虫的中间宿主，所释放的尾蚴可感染动物引起血吸虫病。血吸虫病严重危害人和动物健康，杀灭钉螺，预防尾蚴感染是血吸虫病防治的重要研究课题。而血吸虫病防治科研课题的开展，时常需要饲养钉螺与释放尾蚴，为探求适宜的钉螺饲养方法及尾蚴释放的最佳条件，特进行本实验研究。
1 材料
1.1 钉螺
由江苏省血吸虫病防治研究所提供阳性钉螺，试验当日释放日本血吸虫尾蚴。
1.2 钉螺饲料
1.2.1 混合饲料
将干燥的泥土和兔饲料（玉米35%、尾粉35%、豆粕30%、鱼粉8%、含钙磷的矿粉1.5%、食盐0.5%）分别碾碎, 按1:2的比例混匀，并用铁丝筛筛出细粉末， 烤干备用。兔饲料由长江大学医学院动物中心提供。
1.2.2 奶粉饲料
奶粉：三鹿牌，高铁高锌奶粉，石家庄三鹿集团股份有限公司出品。临用时将烤干碾碎的细粉末泥土与奶粉按1:2的比例混匀。
1.3 砚台 直径10.40 cm 。
1.4 搪瓷盘 23 cm×17 cm 。
1.5 铁丝筛 180目，孔径0.087毫米，浙江省上虞市五四沙筛厂生产。
1.6 玻璃烧杯 小烧杯（2.5 cm×3 cm），中烧杯（5.5 cm×6 cm）。
1.7 网罩 钢丝网罩，塑料网罩。
2 方法
2.1 钉螺饲养方法
将阳性钉螺分为A、B、C、D四组，采用不同的光照、饲料、活动空间条件饲养，A组：用砚台饲养，将草纸铺于砚台内, 上层加混合饲料，放入阳性钉螺50只，用脱氯水保湿, 加盖（留有0.3 cm间隙），无灯光照射, 温度24~28 ℃，每日拣出死亡钉螺,每3~4日换一次草纸。 B组：用奶粉饲料饲养，方法同A组。C组：用搪瓷盘饲养，搪瓷盘内层垫海绵，上层铺草纸，加混合饲料，放入阳性钉螺50只，外加洗净的绿纱网罩，用脱氯水保湿, 温度24~28 ℃,白天用日光灯持续照射,晚上熄灯, 每3~4日换一次草纸，每日拣出死亡钉螺。D组：用奶粉饲料饲养，方法同C组。
2.2 尾蚴释放方法
用脱氯水将钉螺洗4次，分15个实验组，采用不同水质、容器、网罩、天气、温度、光照条件释放尾蚴，解剖镜下计数。四组钉螺释放尾蚴的方法大致相同，其A、B、C、D组释放尾蚴依次为2、1、3、4次，见表1。表1 钉螺释放尾蚴的15组不同条件（略）
3 结果
3.1 钉螺饲养结果
A组饲养钉螺存活时间为15 d，释放尾蚴2次后100%死亡；B组钉螺存活时间为10 d，释放尾蚴1次；C组钉螺存活时间为45 d，释放4次尾蚴后100%死亡；D组钉螺存活时间为29 d，释放尾蚴3次。见表2 。表2 不同条件下钉螺存活时间与释放尾蚴的次数及钉螺死亡率（略）
3.2 尾蚴释放结果
1、2、3组在5 h中无尾蚴释放；6、13组60~180 min每组平均释放尾蚴825条；9、10、15组90~180 min每组平均释放尾蚴716条；7、8、11组30~180 min每组平均释放尾蚴1 783条；4、5、12组60~180 min每组平均释放尾蚴1 733条；14组60~180 min释放尾蚴1 450条。见表3。表3 不同条件下钉螺释放尾蚴的时间与尾蚴数量（略）
4 讨论
为尽可能的模拟自然环境，延长钉螺存活时间，本实验观察了光照、饲料、活动空间三个因素对钉螺存活时间的影响，表2结果显示，用搪瓷盘加混合饲料饲养、外用绿纱网罩、光照射的钉螺存活时间为45 d，释放尾蚴4次，且钉螺死亡率随释放尾蚴次数增加而增加；而用砚台饲养、无光照射组及用奶粉饲料、光照射组的钉螺存活时间分别为10 d、15 d、29 d，释放尾蚴次依次为1、2、3次；表明在相同温度下，白日持续日光灯照射,去氯水保湿,活动空间相对较大,用泥土混合饲料饲养的钉螺活动状态较好,生存时间比其他实验组长，释放尾蚴次数多。这可能与光照、较大活动空间、空气流通、混合饲料成分比奶粉更接近自然环境中钉螺的食物等有关。而砚台饲养组虽用混合饲料，但钉螺无光照、活动空间小,空气不流通，易死亡；奶粉饲料组，蛋白量虽高,营养丰富，但易滋生细菌和寄生虫导致钉螺死亡。本次实验钉螺存活最长时间为45 d，释放尾蚴4次，与人工感染获得的感染性钉螺,在常温下可连续使用60 d［2］相比较尚有一定的差距，这可能与未按时更换草纸，未注意保湿等因素有关。
尾蚴释放的成功与否与多种因素有关［3,4］，本实验观察了不同水质、容器、网罩、天气、温度、光照条件等尾蚴释放的情况，表3显示，在脱氯水或凉开水、晴天、温度29~30 ℃的条件下，30 min即有尾蚴释放，180 min每组平均释放尾蚴1 783条；同样条件下，温度为25~26 ℃时60 min开始释放尾蚴，180 min每组平均释放尾蚴1 733条；表明温度高尾蚴释放快、数量多，因温度高，光线充足，钉螺活动较活跃,有助于尾蚴释放。而相同条件下的阴雨天90 min开始释放尾蚴，至180 min每组平均释放尾蚴716条，表明阴雨天不宜释放尾蚴，这可能与阴雨天光线昏暗，影响钉螺活动有关；在用自来水、塑料网罩的条件下，5 h无尾蚴释放；表明不能用自来水和塑料网罩释放尾蚴，由于自来水中含氯,塑料具有较浓的气味，可能对钉螺有刺激或对生命力较弱的尾蚴有毒害作用。表3结果还表明容器大小对尾蚴释放无明显影响，脱氯水与凉开水均可用于释放尾蚴。
本组实验结果提示：饲养钉螺应保持光照与空气流通,提供钉螺一定的活动空间,最好选用泥土混合饲料；释放尾蚴,应选在晴天, 温度26~30 ℃，用脱氯水或凉开水，加钢丝网罩为宜。
【参考文献】
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［2］姜玉骥, 戴建荣.感染性钉螺释放尾蚴与生存情况观察［J］. 中国血吸虫病防治杂志,2002，14（3）：228-229.
［3］魏风华，陈浩峰，罗秀兰.螺旋藻和鱼腥藻饲养钉螺的实验研究［J］. 中国血吸虫病防治杂志,1999，11（5）：286-287.
［4］庄建林,姜庆五,周艺彪，等.钉螺耐寒能力的实验研究［J］. 中国血吸虫病防治杂志，2006， 18（1）：36-39.
作者单位：长江大学医学院，湖北 荆州 434000