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【摘要】 目的：为了证明血培养阳性标本快速直接药敏试验的准确性和可行性。方法：我院2005年6月-2006年12月期间200份阳性血液标本，选取18种抗菌药物，采用纸片扩散法，对直接药敏试验和常规药敏试验进行比较，全自动血液培养系统Bactec9240和BACTED PLUS＋血液培养瓶均购自美国BD 公司。细菌鉴定使用法国梅里埃公司的API鉴定板条。结果：200份阳性血液标本中分离到210株细菌，其中革兰阴性杆菌144株，革兰阳性球菌66株。直接药敏试验和常规药敏试验的平均符合率为87.4％。结论：血培养阳性标本直接药敏试验结果是快速和准确的，它能够缩短阳性血培养的报告时间，降低病人的死亡率。
【关键词】 血培养阳性；直接药敏试验；常规药敏试验；比较
目前有很多实验室对阳性的血培养标本进行直接的药敏试验，由于缺乏操作的标准，尽管大家都进行初步药敏试验，但还是要经过转种培养分离的菌种采用常规标准药敏试验来进行确认［1］。本研究使用标准的操作步骤，对直接药敏和常规药敏结果进行比较，来证明直接药敏方法的可行性。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源
（1）临床菌株210株，来自我院2005年6月至2006年12月期间200份阳性血液标本。标准菌株金黄色葡萄球菌ATCC29253，大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。
1.1.2 仪器和试剂
（1）全自动血液培养系统Bactec9240，（2）BACTED PLUS＋血液培养瓶，（3）细菌鉴定系统为法国生物梅里埃API鉴定板条，（4）血平板和巧克力平板购自广州乐通泰公司，（5）MH干粉和药敏纸片购自英国OXIOD公司，（6）一次性10 ml无菌针筒和无菌拭子购自美国BD公司。
1.2 方法
1.2.1 当全自动血液培养系统Bactec9240阳性报警后，快速取出阳性瓶。使用无菌针筒抽取10 ml培养液放入无菌试管做梯度离心，1 500 r/min离心5分钟，收集上清液，再经3 000 r/min离心15分钟，取沉淀［2］。用无菌生理盐水洗涤两次后收集菌细胞悬液。涂片革兰染色观察细菌形态，如果发现革兰阳性球菌呈链状，选用MH+5%羊血平板做初步药敏，其他选用MH平板（真菌除外）。向MH平板内接种1~2滴菌悬液，使用无菌拭子均匀涂抹，贴上药敏纸片。（同时对标准菌株进行质控）菌悬液同时接种血平板和巧克力平板，35 ℃+5%CO2环境中孵育培养。18~24 h培养后，量取直接药敏纸片抑菌圈直径的大小并且根据2005 NCCLSI的标准判断敏感、耐药和中介结果。所有直接药敏的菌株，都再根据純培养结果，再进行菌株鉴定和标准的药敏试验，通过测定MIC（最小抑菌浓度）。
1.2.2 纸片的选用和结果判断
革兰阴性杆菌选用头孢曲松，头孢他啶，头孢吡肟，复合磺胺，环丙沙星，哌拉西林，头孢哌酮/舒巴坦和亚胺培南，革兰阳性球菌选用青霉素，苯唑西林，氨苄西林，复合磺胺，环丙沙星和万古霉素。
1.2.3 数据分析
直接纸片法药敏结果最终的标准结果进行比较，将两者结果差异分别定义为3种：重大误差是指直接法敏感，标准法耐药；主要误差是指直接法耐药，标准法敏感；次要误差是指标准法敏感或耐药，而直接法中介。
2 结果
210株血培养阳性标本细菌构成比，革兰阴性杆菌以大肠埃希菌为主，革兰阳性球菌以凝固酶阴性葡萄球菌为主，见表1表1 血培养阳性标本细菌构成比（略）
直接药敏和标准药敏的符合率：其中革兰阴性杆菌的平均符合率为：87.2%，革兰阳性球菌平均符合率为：87.6%，两者的平均符合率为87.4%，见表2和表3。表2 革兰阴性杆菌直接药敏和标准药敏的差异（略）表3 革兰阳性球菌直接药敏和标准药敏的差异（略）
3 讨论
血培养是临床诊断菌血症和败血症的关键，但是使用传统的方法，往往需要2~3天获得药敏的结果，这使病人得不到及时有效的治疗，所以让临床医生得到快速准确的药敏试验显得尤为重要。如何对血培养分离的细菌进行快速准确的药敏试验，是临床微生物工作者需要解决的问题。本试验评估了直接药敏试验的准确性得出以下结论：直接药敏和标准药敏的符合率为87.4，大部分的差异为次要差异89株（9.0%），只有7株（0.7%）细菌的直接药敏出现重大误差，还有29株（2.9%）出现主要误差。由于常规药敏法是根据抑菌环直径和抗生素抑菌浓度的负相关而设计的定性试验，不可避免存在许多局限性［3］，根据文献报道纸片扩散法药敏试验方法学误差大约在±2 mm左右［4，5］，所以如果将次要误差忽略后再比较两者方法，其符合率为96.3%，这和国内某些文献研究报道的数据>95%十分接近［6］。利用直接法进行药敏试验，可以在全自动血液培养仪报警后的第二天将准确的药敏结果报告给临床医生，这为临床选择用药提供了及时准确地依据，避免了经验用药，减少了并发症和院内感染，对提高菌血症和败血症等感染性疾病的治愈率有重要的意义，同时通过计算MIC50可估计一个地区、一个医院某种细菌对某种抗生素的耐药型体状态、严重程度及发病趋势，有利于细菌性感染的流行病学调查和医院耐药菌株监测。
【参考文献】
［1］GARY V. Evaluation of a Direct Blood Culture Disk Diffusion Antimicrobial Susceptibility Test［J］.ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY，Nov.1981：696-698.
［2］朱德全.血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏的探讨［J］. 中华医院感染学杂志，2005,15(7):1300-1303.
［3］陈秀枢，制片扩散法抗生素敏感试验的局限性及其补充方法［J］.临床检验杂志，1994，12：3.
［4］王 鑫，杨敬芳，时东彦，等.评价3种方法检测酵母样真菌对氟康唑敏感性［J］.中国感染与化疗杂志，2006，6（3）：186-189.
［5］杜 银.不同试验因子对药敏试验结果的影响［J］.黑龙江畜牧兽医，2002，45（12）：23-24.
［6］漆 坚.全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定及药敏试验比较［J］.国际检验医学杂志，2006,27(5):397-398.
作者单位：焦作市第二人民医院检验科，河南 焦作 454001