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【摘要】 目的：试验室进行腹水肝癌脱落细胞学检测,外周血AFP检测及荧光PCR定量检测外周血中γ-谷胺酰转移酶mRNA亚型的测定,比较这三种方法的临床应用价值。方法:腹水中脱落细胞经过巴氏染色,进行高倍显微镜下镜检；外周血AFP用ELISA,荧光定量PCR技术。结果:肝癌脱落细胞检测阳性率为16%，AFP阳性率为50%，肝硬化AFP阳性率10.5%，慢性肝炎AFP阳性率为10%；γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型检测，肝癌阳性率为50.8%。其中包括8例AFP阴性者。结论:腹水脱落细胞检测准确率高,阳性率低,取材特殊,适合临床进行腹水回输时使用；AFP阳性率高,假阳性率高,适合肝癌大规模筛查； 荧光PCR定量检测γ-谷胺酰转移酶mRNA-H亚型检测灵敏度高,特异性高,可为AFP阴性肝癌提供补充诊断。
【关键词】 原发性肝癌；肝腹水脱落细胞；AFP；γ-谷胺酰转移酶mRNA亚型
原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,本文比较实验室诊断原发性肝癌三大方法的临床价值，以供临床选用。
1 材料与方法
1.1 对象 2006～2007年于我院治疗的肝硬化患者200例，其中，50例有腹水者进行肝癌脱落细胞检测。经影像学（彩超、CT、PSA）、病理确诊的原发性肝癌120例，其中，肝癌肝腹水者30例进行肝癌脱落细胞检测。另外,慢性肝炎患者50例，门诊健康体检50例，肝外转移5例。
1.2 材料 脱落细胞检测：巴氏染液按教科书的方法配制而成，显微镜为奥林巴斯。AFP试剂盒：上海科华。检测γ-谷氨酰转移酶mRNA-H亚型仪器:美国BIO-RNA荧光自动PCR扩增仪。试剂：美国雅陪公司。
1.3 方法 ①肝腹水2 000转/min离心15分钟,取沉渣制片、染色、封片、镜检。②抽外周血2ml,2 000转/min离心15分钟,取血清,ELISA方法(按说明书)。③抽外周血5ml至EDTA抗凝管中,用淋巴分离液以1 500转/min,20分钟取得单个核细胞,按试剂说明书操作［1］。
2 结果
2.1 腹水肝癌脱落细胞检测结果 肝硬化腹水50例，肝癌脱落细胞全部为阴性；肝癌腹水30例，肝癌脱落细胞阳性5例(16%)，阴性25例(83%)。
2.2 AFP检测结果(AFP＞25μg/L为阳性) 肝硬化200例，阳性21例(10.5%)，阴性179例(89.5%)；原发性肝癌120例，阳性60例(50%)，阴性60例(50%)；肝外转移者5例，阳性1例(20%)，阴性4例(80%)；慢性肝炎50例，阳性5例(10%)，阴性45例(90%)；健康体检者50例，阴性50例(100%)。
2.3 外周血中γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型检测结果 肝硬化200例，阴性200例(100%)；原发性肝癌120例，阳性61例(50.8%，其中有8例AFP为阴性)，阴性59例(49.2%)；肝外转移者5例，阴性5例(100%)；慢性肝炎50例，阴性50例(100%)；健康体检者50例，阴性50例(100%)。
3 讨论
3.1 肝癌脱落细胞检测价值 本文50例肝硬化腹水中,肝癌脱落细胞检测结果为0,而30例肝癌患者腹水中有5例为阳性(16%),由此可见,肝癌脱落细胞检测对肝癌的诊断和鉴别诊断起决定性作用。但是,此方法也存在一些缺点,如某些良性细胞发生异型时,会被误认为是癌细胞,即使在腹水中发现癌细胞,对肿瘤的定位有时也很困难。为了防止漏检,要制备多张片子进行检测,而且诊断耗时长。对于患者来讲放腹水非常痛苦,所以,医生很少采用它。在临床上开展的腹水回输项目中，必须采用肝癌脱落细胞检测，以免发生医源性癌细胞转移。
3.2 AFP检测价值 血清中的AFP是一种蛋白性标志物，既可以由原发病灶的肝癌细胞分泌，也可以由部分活动性肝硬化的肝细胞、部分慢性活动性肝炎肝细胞所分泌。因此，临床上常常出现假阳性。据报道，在我国有30%～40%的肝癌患者血清AFP始终为阴性，这就限制了血清AFP在肝癌检测中的应用。虽然AFP特异性、敏感性不很理想，仍是大规模体检、筛查肝癌所最常用的血清标志物。
3.3 γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型检测价值 本文120例原发性肝癌患者中有61例（50.8%）为阳性，其中包括8例AFP阴性患者，而肝硬化、肝外转移者、慢性肝炎、健康体检者均为阴性。提示γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型可作为原发性肝癌诊断的特异性指标，对血清AFP阴性或低值的原发性肝癌有意义。荧光定量PCR是最近发展起来的新技术，克服了普通PCR技术易污染、灵敏度低的不足。此种新技术与γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型相结合，有助于为临床医生提供更早的发现、诊断的辅助指标。
【参考文献】
［1］ 韩国庆，秦成勇.原发性肝癌患者外周血γ-谷氨酰转移酶mRNA-H亚型的检测［J］.中华肝病杂志，2002，(10)：126-128.
作者单位：吉林北方肝胆医院检验科,吉林 长春 130062