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【摘要】 目的：探讨急性胰腺炎脑损伤的早期诊断及发病机制，为临床治疗提供参考。方法:采用逆行胰胆管注射牛黄胆酸钠制成大鼠急性胰腺炎模型，观察制模后脑组织病理改变、iNOS的变化以及脑脊液中S-100B蛋白的含量，分析S-100B蛋白在急性胰腺炎脑损伤早期诊断中的作用。结果:脑脊液中的S-100B蛋白在SAP模型中制模后6h即有上升，与急性胰腺炎脑组织的镜下病理学评分、NO、iNOS呈正相关。结论:脑脊液的S-100B蛋白可以作为急性胰腺炎脑损伤的诊断指标且其可能参与了急性胰腺炎脑损伤的病理过程。
【关键词】 急性胰腺炎；脑损伤；S-100B蛋白
Brain injury and the variation of S-100B protein in
rats in acute pancreatitis
LI Xiao-long,CHEN Ji-yun
(Department of General Surgery,The First Affiliated Hospital of Chifeng college,Chifeng 024000,China)
【Abstract】 Objective:To provide a new trial for clinical diagnoses in acute pancreatitis.and explain the mechanism of brain damage in acute pancreatitis-associated brain injury.Methods:Acute pancreatitis-associated brain injury was induced in rats by retrograde injection TCA into biliopancreatic ducts.S-100B protein were quantitated in cerebrospinal fluid(CSF).The brain injury were measured by iNOS activity and histopathologic scoring.The variation of S-100B protein were observed. Analysis of correlation among them were performed.Results:S-100B protein in CSF increased at 6 hours after induction in severe acute pancreatitis. S-100B protein level in CSF were positively correlated with each of the histopathologic scoring of brain tissue.Conclusion:Protein S-100B in CSF perhaps involved in the development of acute pancreatitis-associated brain injury，and be looks as the standard of diagnosis of acute pancreatitis- associated brain injury.
【Key words】 Acute pancreatitis;Brain injury;Protein S-100B
胰性脑病是重症急性胰腺严重的并发症之一，病死率高达67%～100％，复发者多数死亡［1］。然而，目前仍无明确的临床检验指标，胰性脑病的实验模型亦尚不成熟，故本实验采用牛黄胆酸钠逆行胰胆管注射诱发大鼠胆源性胰腺炎的模型，并对急性期脑脊液中S-100B蛋白的表达进行观察。
1 材料与方法
1.1 试验动物和主要试剂 雄性Sprague－Dawley大鼠，体重280～320g，由苏州大学医学院试验动物中心提供。大鼠S－100B蛋白试剂盒购自Dialone公司。
1.2 动物模型制备和分组 参照Aho［2］的方法制备AP模型，实验前禁食12h，自由饮水。4％水合氯醛麻醉后无菌手术，用细针自十二指肠壁逆行穿刺进入胰胆管，缓慢匀速注入牛黄胆酸钠溶液或生理盐水，剂量为0.1ml∕100g。5 min后松开无损伤血管夹，缝合切口，皮下注射生理盐水,自由饮水。
48只大鼠分为：①坏死组：3h、6h、12h各8只，给予5％牛黄胆酸钠。②对照组：3h、6h、12h各8只，给予生理盐水。
1.3 标本收集和检测 制模3h、6h、12h后，4%水合氯醛(10ml/Kg)麻醉下取腹卧位，显露出寰枕膜处细针穿刺抽取脑脊液约50～100μl,离心后取上清液置于去酶处理冻存管中于-70℃冰箱中保存。腹主动脉穿刺取血同时处死大鼠，取血清冻于-70℃冰箱中保存。对于胰腺和胰周大体病理采用Hughes胰腺大体病理评分法进行评分。左侧大脑半球全部，10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，H-E染色，光镜观察。右侧新鲜大脑标本于视神经交叉处作冠状位切片取大鼠脑组织1mm数块, 由专科医生行透射电镜观察。右侧脑组织在电镜标本取完后于液氮中保存。对于胰腺镜下病理改变采用简化的Schmidt 镜下病理评分法进行评分，对于脑组织的镜下病理改变采用孔雷等所做的脑组织病理评分法进行评分［3］。
1.3.1 脑脊液中S－100B蛋白含量测定 采用ELISA法，将待测大鼠标本自-70℃冰箱中取出采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定脑脊液及血液S-100B蛋白含量,利用酶标仪在492nm波长处读取OD值。以标准OD值绘制标准曲线,用待测样品的OD值在标准曲线上查出样品中S-100B蛋白的水平。
1.3.2 脑组织中的一氧化氮合成酶（NOS）活性测定 按NOS试剂盒说明书操作。
1.4 统计学处理 数据以均数±标准差(±s)表示，采用SPSS11.5统计软件对各组数据进行均数差别的检验和相关分析。
2 结果
2.1 胰腺病理 大体和镜下病理改变分别符合坏死组和对照组改变。大体和镜下病理评分在3h、6h和12h三个时段各组间比较差异有非常显著性（P＜0.01）。
2.2 脑组织病理 脑组织病理评分结果见表1。表1 脑组织病理评分注：与对照组比较：a表示P＜0.05，b表示P＜0.01
2.3 脑脊液中S-100B蛋白检测 见表2。表2 脑脊液中S-100B蛋白的含量注：与对照组比较：a表示P＜0.05，b表示P＜0.01
2.4 脑组织中的一氧化氮合成酶（NOS）活性测定 见表3。表3 脑组织的iNOS的活性注：与对照组比较：a表示P＜0.05，b表示P＜0.01
2.5 脑脊液中的S-100B蛋白与脑组织病理及其中的一氧化氮合成酶表达的相关指标比较
2.5.1 脑组织病理评分与脑脊液中的S-100B蛋白 3h, 相关系数0.281,P值＞0.05;6h,相关系数0.500,P值＜0.05;12h,相关系数0.627,P值＜0.01。
2.5.2 脑组织的iNOS与脑脊液中的S-100B蛋白 3h, 相关系数0.259,P值＞0.05;6h,相关系数0.703,P值＜0.01;12h, 相关系数0.554,P值＜0.01。
3 讨论
S-100B蛋白是脑组织中一种亚细胞组分，被认为是含有神经系统特异性的蛋白质，具有高度脑特异，生物半衰期约2h［4］。由于S-100B分布特异性高，含量极低且相对稳定。病理条件下，细胞破裂S-100B渗漏到胞外，所以，S-100B浓度升高提示细胞坏死。本实验中发现，急性重症胰腺炎脑组织中S-100B蛋白在制模后6h开始呈持续性升高，且和脑组织的病理变化及生化改变呈正相关，说明S-100B蛋白是可以反应急性重症胰腺炎脑损伤程度的指标。提示可以选用脑脊液中S-100B的测定来监测急性胰腺炎脑损伤。
S-100B蛋白有广泛的生物学活性，生理浓度下发挥多种重要的生理功能；过量则诱导细胞凋亡，甚至坏死［6］。本实验中发现，急性重症胰腺炎大鼠脑脊液中S-100B蛋白的含量较对照组明显升高，提示S100B蛋白有可能参与了重症急性胰腺炎脑损伤的病理过程。
【参考文献】
［1］ 钱祝银,刘训良.胰性脑病研究进展［J］.江苏医药,1996,22:551-552.
［2］ Aho HJ，Koskensalo ML，Nevalainen TJ.Experimental pancreatitis in the rat.Sodium Taurocholate-induced acute hacmorrhagic pancreatitis［J］. Scand J Gastroenterol，1980，15：411-416.
［3］ 孔 雷，韩天权，于颖彦，等.胰酶、细胞因子、高渗液和感染对大鼠脑损伤的形态学研究［J］.胰腺病学，2004，4：98-101.
［4］ Usul A，Kato K，Abe T，et al.S-100 a0 protein in blood and urine during open-heart surgery［J］.Clin Chem，1989，35：1942-1944.
［5］ Schaler BW，Heizmarm CW.The S100 family of EF-hand calcium binding proteins：functions and pathology［J］.Trends Biochem Sci,1996,21：134-140.
作者单位：赤峰学院附属医院，内蒙古 赤峰