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【摘要】 目的 建立一种操作简单、切实可行的具有病证结合特点的血管性眩晕气虚血瘀型动物模型。方法 先将组织硬化剂注射至模型组家兔左侧颈椎横突软组织以建立慢性椎-基底动脉供血不足（VBI）模型；并在此基础上采用饥饱失常、高脂饮食等复合因素制作出气虚血瘀证模型；然后用旋转法诱发动物产生眩晕症。观察造模前后大耳白兔的行为表现、体重、跳台耗时及脑血流图变化。结果 模型动物的脑血流量明显下降，跳台耗时明显延长，体重下降，行为表现发生改变。结论 该模型具有病证结合特点，能够很好地反映眩晕程度及眩晕持续时间，而且能很好地反映中医气虚血瘀证候。
【关键词】 血管性眩晕；椎-基底动脉供血不足；气虚血瘀证；跳台耗时；脑血流量
Establishment of vascular vertiginous animal model with qi deficiency and blood stasis
LIU Chun-hua，WANG Jing-jing，HUANG Yun-feng，et al.The Affiliated Hospital of Hunan Academy of TCM，Changsha 410006，China
【Abstract】 Objective To establish a simply and feasible vascular vertiginous animal model，also according to qi
eficiency and blood stasis.Methods Chronic vertebrobasilar insufficiency(VBT)was set up by injected tissue sclerosing remedy into soft tissue on the left side of cervical vertebral transverse to induce the stenosis in the left vertebral arteries and the lower blood flow in the basilar and bilateral vertebral arteries，then the qi deficiency and blood stasis symptom model was induced by hungry and high-lipid diets，and the vertigo model was established by rolling.Results The model rabbits jumping time increased significantly，index of qi deficiency and blood stasis symptom such as body weight，behavior also increased.Cerebral blood flow of model rabbits decreased，jumping time increased significantly，and behavior，body weight also changed.Conclusion The model has the characteristic combined disease and symptom，not only shows degree and continue time of vertigo，also conforms to symptom of TCM.
【Key words】 vascular vertigo;vertebrobasilar insufficiency;qi deficiency and blood stasis;jumping time;cerebral blood flow
眩晕是机体对空间关系的定向感觉障碍或平衡感觉障碍的一组主观症状，男女老少均可发病，发病的持续时间和程度各异，我国人群中的患病率约为5‰［1］。眩晕作为一种最常见的临床综合征，也是目前医学界一个很有挑战性的症状。因为难以客观定义和测量、发病机制尚未完全阐明、病因不同而分属于不同学科等原因，目前关于实验研究方面的文献很少。探索成功的实验动物模型，不仅对中医基础研究本身还是临床实际具有积极意义；也可以为进一步研究开发治疗眩晕症的中药新药打下良好基础。笔者经过近2年的探索与实验验证，较为成功地制作出了血管性眩晕气虚血瘀型动物模型。本文将介绍模型的制作方法、部分理化检查结果及经验体会。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物及药品 清洁级健康日本大耳白兔18只，雌雄各半（湖南中医学院实验动物中心提供）。消痔灵注射液，1.25%利多卡因注射液。
1.1.2 高脂饲料 每100g高脂饲料中含胆固醇1g，蛋黄粉15g，猪油5g（湖南中医学院实验动物中心提供）。
1.1.3 主要仪器设备 REG-IG2型血流图诊断仪（湖南益灵新技术有限公司）。可调速动物眩晕产生仪，用湘潭化成机电设备有限公司生产的YCT112-4A型调速电机改制，在其直流调速电机前加一个调速器，使旋转速度0～150r/min自由可调，同时在电机上连接一个圆形金属盒，大小（直径×高）：35cm×35cm。逃避刺激反射训练仪：自制一大小为（长×宽×高）：70cm×65cm×65cm的木笼子，底板为铁丝网，在笼内安置一个25cm的高台，其面积为65cm×30cm大小。
1.2 实验方法
1.2.1 实验动物分组方法 将16只家兔按体重大小编号（1~16号），然后用随机排列表分成两组，即正常组和对照组，每组动物各8只。
1.2.2 椎-基底动脉供血不足模型制作方法 参照郑重等［2］、朱明双等［3］方法，采用颈椎旁硬化剂注射法：以消痔灵与利多卡因混合液（比例为1∶1）10ml，注射于家兔第3～5颈椎左侧横突侧面，于7天后重复注射一次。6周内造模成功。
1.2.3 气虚血瘀证模型制作方法 参照周梦圣等［4］、赵辉等［5］方法，采用饥饱失常、喂饲高脂饲料等复合因素制作。从实验第1天起，模型组每天上午8点一次性给予全量高脂饲料［10g/(kg·d）］，1/2量普通饲料［15g/(kg·d）］；晚8点给予1/2量普通饲料。
1.2.4 逃避刺激反射训练方法 参照傅继华等［6］方法，用塑料球形刷从训练箱底面扫刺家兔脚掌，造成疼痛刺激，迫使其跃上高台，随即给予胡萝卜片奖励；如此5遍为1次完整训练，每天上、下午各1次，连续3天，使之建立牢固的条件反射。
1.2.5 脑血流图的描记与分析方法 采用REG-IG2型血流图自动分析诊断仪（湖南益灵新技术有限公司），在实验第3、42天各测定脑血流图1次，参见谢锦琪等［7］方法：硫化钠脱毛后第3天在安静清醒状态下测量家兔脑血流图，先把家兔俯卧固定在固定架上，采用枕-乳突导联，然后将改良后的矩形电极放置在前额正中、左右乳突和枕后正中部位，主振频率90kHz，二电极法，定标Z=0.1Ω，记录家兔脑血流图，由计算机采样作拐点分析（包括二阶导数），计算波幅、面积（S）、速率（V）、阻力指数（F1）、弹性指数（Z1）等参数的变化。
1.2.6 眩晕诱发产生方法及跳台耗时的观测方法 参照傅继华等［6］方法，于实验第42天，将家兔置于眩晕产生仪内以90～120r/min转速匀速旋转5min，然后休息30min，立即放入逃避刺激反射训练箱内，并给以疼痛刺激。将家兔放入训练箱起到跳上木条并保持30s以上不再跌落所需要的时间称为跳台耗时。
1.3 统计学方法 计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组样本均数间比较，符合方差齐性采用t检验，方差不齐者用t检验，组内比较采用配对t检验。采用SPSS 11.5统计软件进行处理分析。
2 结果
2.1 体重、行为表现比较 两组动物均全部生存，在实验的前2天内两组动物体重均稍有下降；然后正常组逐日上升，至第42天平均增加0.56kg，模型组动物体重逐日下降，至第42天平均减少0.39kg。两组体重比较见表1。
表1 两组动物前后体重变化比较 （略）注：△P>0.05
由表1可以看出，造模前，两组体重差异无统计学意义（P＞0.05）；造模前后两组对比，模型组体重明显减轻并具有统计学意义，而正常组体重增长明显，差异均具有非常显著性（P＜0.01）。正常组动物自开始至实验结束，皮毛始终光滑、润泽、温暖，动作灵活，每日粪便量100g/只左右，粪质干燥或软。模型组在自第2天起开始急切觅食，异常活跃，甚至啃咬笼框，第9天后比较安静，第14天后逐渐皮毛无光泽、枯槁、结穗打结、稀疏脱落；开始第4天粪量减少，自第25天开始部分出现轻~中度稀便，但始终未见重度稀便情况发生。
2.2 跳台耗时比较 已建立逃避刺激条件反射的家兔，旋转前能很快跳上木条，而旋转后，由于眩晕无法控制肢体运动而跳台耗时均有明显延长，见表2。
表2 两组兔跳台耗时比较 （略）
由表2可以看出，旋转前，两组跳台耗时差异无显著性，旋转后，两组耗时均明显延长，经组内旋转前后配对t检验，其差异有显著性（P＜0.001）；且旋转后两组跳台耗时延长仍有差异，模型组明显长于正常组，差异有显著性（P＜0.001），说明造模导致了受到旋转刺激的家兔肢体运动协调性下降，亦反映了眩晕持续时间延长、程度有所加重。
2.3 脑血流图比较 见表3、表4与图1~4。
表3 模型组造模前后脑血流图比较 （略）
由表3可以看出，模型组脑血流图检查各参数造模前后比较，波幅、面积（S）、速率（V）、弹性指数（F1）均有所下降，而阻力指数（Z1）反而增加，并且具有统计学意义（P＜0.05），说明造模后家兔脑血流量相对减少。
表4 造模后模型组与正常组第42天脑血流图比较 （略）
由表4可以看出造模后，模型组和正常组波幅、S、V、F1、Z1比较，差异均有显著性（P＜0.05或P<0.01），说明模型组动物的脑血管紧张度增高、弹性减退，相对脑血流量低于正常组。
3 讨论
3.1 制作血管性眩晕动物模型的实验依据 机体平衡依赖于视觉、本体觉和前庭系统相互作用及周围和中枢神经系统之间复杂的相互联系、整合、调制而维持，当平衡系统中任何一处病变，感受的信息发生矛盾冲突时，则可发生平衡系统之间信息匹配不当，出现平衡障碍症状-眩晕。椎-基底动脉供应前庭蜗器官、延髓旁外侧区以外的脑干（前庭神经核群主要所在区）、小脑及部分颞叶和枕叶的血液，故椎-基底动脉供血不足（VBI）可导致前庭功能障碍而引起眩晕、恶心、耳鸣及脑干、小脑等病变。缺血发作时，脑干神经元代谢受损，突触效能降低，长期反复发作则神经元异常改变持续存在，即使间隙期也可不恢复［8］。消痔灵注射液［9］即775注射液主要成分为硫酸铝钾，水溶液能使局部组织产生无菌性炎症，致蛋白质和胶体变性、凝固，形成较强的瘢痕组织。在颈椎左侧面注射后，逐渐（4～6周内）使颈椎侧面肌肉纤维化挛缩、动脉壁纤维化粘连和管腔缩窄等，使注射侧椎动脉损害并纤维化；同时因左侧颈部软组织受炎症刺激、瘢痕挛缩，破坏了颈椎力学平衡，使右侧椎动脉受到机械牵张而血流受到影响，达到缓慢降低椎动脉血流的目的，从而使前庭系统出现供血逐渐减少或不足。符合血管性眩晕临床慢性起病的发病特点。在以上病理模型基础上，根据平衡三联原理通过旋转的方法诱发眩晕症的产生。
3.2 制作气虚血瘀证动物模型的实验依据 中医理论认为“饥则气损”，正如《灵枢·玉版篇》说：“人之所受气者，谷也”，《灵枢·五味篇》说：“谷不入半日则气衰，一日则气少矣”。可见用减少食量来制作气虚动物模型是符合中医理论的。“气为血之帅，气行则血行”，气虚则血脉鼓运无力，血行失畅停而为瘀，瘀血阻于脑络，清阳失展，清窍不利则发为眩晕。且“肥甘厚味易致膏粱之疾”，中医理论认为肥甘厚味滋腻碍胃而伤脾，又可助生痰湿导致瘀血证的发生。因此，采用饥饱失常、高脂饮食的方法造成气虚血瘀证动物模型是有理论依据的。
3.3 自拟制定出血管性眩晕气虚血瘀型家兔模型评分法 气虚证：(1)精神萎顿（3分）；倦怠嗜卧（5分）；对抗性、攻击性完全消失（7分）。 (2)毛发枯黄无光泽（3分）；结穗打结（5分）；稀疏脱落（7分）。(3)大便轻度稀（3分）；中度稀（5）分；重度稀（7分）。 (4)体重减轻0~0.1kg（3分）；体重减轻0.11~0.2kg（5分）；体重减轻0.2kg以上（7分）。血瘀证：舌质暗淡或绛紫（10分）；血液流变学低、高切指标增高（10分）。眩晕证：脑血流图显示椎-基底动脉系统供血较造模前减少（波幅或面积减少20%以上）（10分）；旋转后跳台耗时延长20s以上（10分）。 凡气虚评分达8分或以上者，同时血瘀证、眩晕证评分达10分或以上判定为成功模型。
3.4 制作过程中的几点体会 本实验过程中发现旋转刺激需给予的转数是个值得探讨的问题，转数小达不到产生眩晕的目的，转数过高刺激太大则易导致家兔蜷伏不动，跳台耗时测量不准。另外，疼痛刺激强度没能量化也是本实验有待改进之处。（本文图片见封三）
【参考文献】
1 史玉泉.实用神经病学.上海：上海科学技术出版社，1994，1056-1075.
2 郑重，张泉，邓小筑，等.电针改善前庭功能障碍所致颈源性眩晕的实验研究.中国临床康复，2004，8（1）：102.
3 朱明双，郑重，黄勇，等.注射硬化剂法制作家兔颈椎病椎动脉型模型.成都中医药大学学报，2000，23（3）：18.
4 周梦圣，李秋莲.模拟中医气虚动物模型的研究.中医杂志，1989，9：41.
5 赵辉，王键，李净，等.多因素复合制作气虚血瘀证脑缺血的动物模型体会.河南中医，2001，24（4）：18.
6 傅继华，余书勤，刘军，等.实验性眩晕动物模型的建立.中国药科大学学报，2002，33（6）：518.
7 谢锦琪，张时娥.颈椎病200例脑血流图分析.实用新医学，2001，3（1）：43.
8 郭兰.益气清脑治疗气虚血瘀型眩晕的临床观察.北京中医，2003，22（6）：37.
9 张远，廖淞林，马术士，等.消痔灵注射液的实验研究.中医杂志，1980，21：69-71.
（编辑：魏 冉）
基金项目：湖南省教育厅课题项目（编号：01C235），湖南省卫生厅科研基金课题（编号：C2005-045）
作者单位： 1 410006 湖南长沙，湖南省中医药研究院附属医院
410007 湖南长沙，湖南中医学院中西医结合基础研究室（△中西医结合系研究生）
410007 湖南长沙，长沙民政学院康复医学系