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【摘要】 目的 优选金银花配方颗粒最佳提取工艺条件。方法 采用正交试验法，以绿原酸提取量和出膏率为指标，考察加水量、煎煮时间、煎煮次数对提取工艺的影响。结果 最佳提取工艺为加11倍水，煎煮3次，每次1.0h。结论 优选得到的提取工艺合理、稳定可行、质量可控。
【关键词】 中药配方颗粒;金银花;绿原酸;提取工艺
Extraction technology for granule of Honeysuckle
XU Shu，WEI Mei.Guangdong Yifang Pharmaceutical Co.,Ltd.,Foshan 528244, China
Objective To optimize extraction technology for granule of Honeysuckle.Mehotds The optimum extracting condition was determining the yield rate and chlorogenic acid content as index，and studied by orthogonal design. Several factors affecting the yield of extraction were discussed, such as amount of water, extraction time, times of extracting.Results The optimum extracting condition was adding 11 times water, extracting 3 times, 1 hours for each time.Conclusion The extraction technology selected was reasonable, stable and controllable.
[Key words] granule of traditional Chinese medicine; Honeysuckle; chlorogenic acid;extraction technology
中药配方颗粒是以优质的中药饮片为原料，饮用水为溶媒，经现代工艺提取、真空低温浓缩、喷雾干燥、干法制粒等多道工序精制而成，其疗效和安全性已得到充分肯定[1]。
金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花，具有清热解毒、抗菌消炎、凉散风热之功效。金银花含有挥发油、有机酸、黄酮类、三萜类等成分，绿原酸为其主要有效成分[2]。本试验以绿原酸提取量、出膏率为指标，采用正交设计法对金银花配方颗粒提取工艺进行优化。
1 仪器与试药
Waters 2695型高效液相色谱仪(自动进样器，四元泵，Waters 2489紫外检测器)，Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)柱，Empower2色谱工作站，Sartorius BP211D型电子天平。
金银花(购于山东平邑县田丰中药材有限公司，经鉴定为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾);绿原酸对照品(中国生物制品检定所，批号：110753-200413);水为娃哈哈饮用纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司);乙腈、磷酸为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 样品的测定方法
2.1.1 绿原酸的含量测定方法[3] 色谱条件与系统适应性试验：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)柱;乙腈-0.4%磷酸溶液(10：90)为流动相;检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000。
对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：精密量取金银花提取液0.5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算含量，即得。对照品与供试品的液相色谱图见图1、2。图1 绿原酸对照品液相色谱图图2 供试品溶液液相色谱图
2.1.2 出膏率的测定 将提取液浓缩至约100ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，取出置干燥器中冷却30min，迅速精密称重，按下式计算出膏率。
出膏率(%)= W W0×100%
式中：W为浸膏重量;W0为药材重量。
2.2 提取工艺的正交设计 以绿原酸提取量及出膏率作为指标，考察加水量(A)，煎煮时间(B)，煎煮次数(C)对试验结果的影响，并选择正交表L9(34)试验，确定金银花配方颗粒最佳提取工艺条件，正交试验安排见表1。表1 因素水平表
2.3 正交试验结果及方差分析 称取金银花9份，每份50.0g，按1～9号试验条件进行提取，测定提取液中绿原酸的含量及出膏率，结果见表2。方差分析见表3、4、5。表2 正交实验结果表3 绿原酸提取量方差分析表5 综合评分方差分析注：F0.05(2,2)=19.00，F0.01(2,2)=99.00
以绿原酸提取量为评价指标时，直观分析显示各因素作用的主次顺序为C>A>B，最佳工艺条件为A3B1C3，方差分析结果表明煎煮次数(C)有极显著水平，加水量(A)有显著水平，煎煮时间(B)无显著意义，可取任意水平。
以出膏率为评价指标时，直观分析显示各因素作用的主次顺序为C>A>B，最佳工艺条件为A3B3C3，方差分析结果表明煎煮次数(C)有显著水平，加水量(A)、煎煮时间(B)无显著意义，可取任意水平。
因两者最佳工艺不完全一致，且两者具有等同重要性，因此，以各自的最高数据为100分，其余按此折算，并合计为综合评分(综合评分=绿原酸提取量/最高绿原酸提取量×100×50%+出膏率/最高出膏率×100×50%)。
以综合评分为评价指标时，直观分析显示各因素作用的主次为顺序C>A>B，最佳工艺条件为A3B2C3，方差分析结果表明煎煮次数(C)有显著水平，加水量(A)、煎煮时间(B)无显著意义，可取任意水平。
综合分析上述结果，根据实际生产需要确定最佳工艺条件为A2B2C3，即加水量为11倍，煎煮3次，每次1.0h。
2.4 验证试验 称取金银花3份，每份50.0g，按A2B2C3工艺条件进行验证试验，以绿原酸提取量及出膏率作为指标，考查一煎得率、二煎得率、三煎得率及总得率，结果如表6所示。由表6可知正交试验优选出的最佳提取工艺合理、稳定可行、质量可控。表6 验证试验结果
3 结论
通过正交试验，确定最佳提取工艺为：加11倍水，煎煮3次，每次1.0h，经过重复性试验提示，筛选得到的金银花配方颗粒最佳提取工艺条件稳定可行，且绿原酸提取量和出膏率均较高。
4 讨论
4.1 试验结果表明，所选的3个因素对结果有着不同的影响，综合评分方差分析表明煎煮次数(C)有显著水平，加水量(A)、煎煮时间(B)无显著意义，考虑到生产成本，故加水量选择11倍，煎煮时间选择1.0h。
4.2 金银花药材价格不稳定，波动较大，年初价格约60元/kg，受甲型H1N1流感影响，现价高达350元/kg，故生产时可根据成本分析决定是否进行第三煎。
4.3 绿原酸属于热敏性物质，其受热不稳定，见光易分解。故生产金银花配方颗粒时，尽量做到提取后立刻浓缩，即使需要放置，需对储液罐增加冷却系统。浓缩尽量低温浓缩(60℃)，浓缩后立刻喷雾干燥，合理安排生产。
【参考文献】
1 周嘉琳.试论发展中药配方颗粒的重要意义.中医杂志,2007,48(2):177-178.
2 何晶.金银花的化学成分及药理作用.天津药学,2007,19(5):66-68.
3 国家药典编委会.中国药典(一部).北京：化学工业出版社，2005，152-153.