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关键词 动物实验;药物麻醉;小白鼠
摘要 目的 应用异丙酚,水合氯醛,氯胺酮等三种常用动物实验麻醉药对小白鼠的麻醉效果比较分析。研究三种麻醉药对小白鼠的致死量,麻醉起效时间及麻醉维持时间。方法 随机采购实验动物养殖基地实验用健康小白鼠200只,每只体重约50g,使用市售异丙酚,水合氯醛,氯胺酮三种麻醉药对小白鼠分组、分批不同剂量注射麻醉,观察记录麻醉后的各种数据。结果 异丙酚,水合氯醛,氯胺酮三种常用动物实验麻醉药对小白鼠的麻醉效果不同。其麻醉致死量、麻醉起效时间、麻醉维持时间差异有统计学意义。结论 麻醉对动物实验成功与否起关键作用,采用正确的麻醉剂量是动物实验成功的先决条件。
鼠类是研究实验领域常用的动物种类,在我国已培养出许多近交系品种,常用于器官移植和肿瘤治疗等方面的研究。鼠类动物实验麻醉,因其解剖、生理、对药物的反应,以及体型、习性等方面都与人类不尽相同甚至有很大的差异,我们在进行广东省科技计划项目“超声介导的125I放射性微粒植入近距离治疗眼部肿瘤研究”动物实验时发现,麻醉方法的不当可能引起鼠类动物机体的一系列病理生理变化,甚至致其死亡,影响整个实验的结果[1]。本文对实验动物常用的三种麻醉药效果进行比较分析,旨在为医学动物实验麻醉提出一些实验医学麻醉资料。
1 材料与方法
1.1 实验动物 从中山大学及广州医学院实验动物养殖基地随机采购实验用小白鼠200只,属BALB/C小鼠近交系种类。经检查每只小鼠活动正常,健康状况良好,每只体重为(50±5)g,按实验数量分批分笼关养,每日喂养动物实验基地的主食3次,辅以适量的冷白开水。
1.2 麻醉药物
1.2.1 10%异丙酚麻醉注射液 使用制剂为每支20ml(200g),为白色等渗水溶乳剂,摇匀后使用。
1.2.2 水合氯醛 使用市售10%水溶液制剂。
1.2.3 氯胺酮 使用市售10mg/ml水溶性针剂。
1.3 麻醉药给入途径 使用1ml注射器吸取药剂,分别按实验所需要注入小白鼠腿部、每种药物每只小鼠只注射1次进行实验,然后弃之,不重复使用,计时观察小鼠情况记录麻醉后的数据。
1.4 麻醉效果判断标准 给药后动物倒下,全身无力,对皮肤疼痛反应消失、肌肉松弛、呼吸平顺,此时一般心率100次/min,呼吸40次/min,表明已达到适宜的麻醉效果。若虽然动物倒下,但仍有反应,则为麻醉无效。麻醉过去一定时间后,动物四肢开始抖动,提示动物麻醉维持时间将过,接近苏醒。给药后出现动物抽搐、排尿,说明麻醉过深。
1.5 统计学方法 对所有的测量数据进行统计学处理,数据以±s表示。计量资料采用t检验,对应数据的相关性和显著性分析采用非参数相关性检验,Spearman等级相关分析法,检验水准α=0.05。
表1 三种药物对小鼠麻醉致死药量(略)
注:小白鼠体重为(50±5)g,每批次实验鼠只8只,腹腔注射。tNANOA分析P<0.05
表2 三种麻醉药品对小鼠麻醉效果对比(略)
注:每只小鼠药量为异丙酚10% 0.02ml,氯胺酮10% 0.02ml,水合氯醛10% 0.02ml,本实验共用小鼠36只,每种药物均12只。tNANOA分析P<0.05
2 结果
1)本实验实际共使用采购来的小白鼠184只,其中麻醉致死量实验共使用小白鼠112只,分为14组,异丙酚及氯胺酮各为5组,水合氯醛分为4组(原准备亦为5组,后实验4组后取得所需数据后取消一组),由量多至量少依批次实验给药,观察小白鼠的麻醉存活情况,记录数据,具体实验结果见表1。
2)麻醉药量效果对比和麻醉药物维持麻醉效果时间共实际使用小白鼠72只,每种药物每次实验使用小白鼠12只,实验结果见表2,表3。
3)本实验共死亡小鼠45只,小鼠的死亡时间为注射麻醉药物后的3~60min,其中在注射麻药后10~20min死亡31只,占该实验死亡小鼠的68%。
表3 三种麻醉药品对小鼠麻醉的有效维持时间(略)
注:每只小鼠药量为异丙酚10% 0.02ml,水合氯醛10% 0.02ml,氯胺酮10% 0.02ml,本实验共用小鼠36只,每种药物均12只。麻醉有效维持时间的范围标准是动物维持全身无力、肌肉松弛、反应消失、呼吸平顺
3 讨论
实验动物麻醉是动物实验中一个重要的环节,实验人员应具备相关的麻醉基本知识,麻醉方法和剂量不当可引起动物机体的一系列病理生理变化,甚至动物死亡而影响整个实验的结果。本研究使用目前国内较常用的异丙酚,水合氯醛,氯胺酮这三种麻醉药物对实验小白鼠进行麻醉的致死量,有效量,维持麻醉时间等进行比较。
异丙酚,水合氯醛,氯胺酮三种药物比较,氯胺酮对小白鼠的死亡率最高,次之为异丙酚,水合氯醛相对来说麻醉死亡率较低。异丙酚与氯胺酮每只小鼠使用0.02ml注射液的死亡率为零,是安全的麻醉剂量线,相对于致死量较为安全线在0.02~0.04ml之间。水合氯醛的麻醉安全使用量为异丙酚和氯胺酮的10倍,约0.2ml,但相对的安全线较小,只在0.2~0.3ml之间,与异丙酚和氯胺酮有差异。麻醉最快速有效的是氯胺酮,用药5min即有66%实验小鼠获得麻醉效果,而对比之下水合氯醛未见一只实验小鼠获得麻醉效果,用药15min后,氯胺酮组84%实验小鼠获得麻醉效果而水合氯醛组只有25%实验小鼠获得麻醉效果,异丙酚的麻醉效果介于氯胺酮与水合氯醛之间,用药5min后,有1/3实验小鼠获得麻醉效果,15min后有75%实验小鼠获得麻醉效果。
麻醉维持时间最长的是氯胺酮,麻醉开始后3h仍有100%的麻醉效果;异丙酚次之,3h后仍有实验小鼠的91.6%维持麻醉效果;水合氯醛为三种麻醉维持时间相对较短的一种,3h后1/3的实验小鼠失去麻醉效果,4h后2/3的实验小鼠失去麻醉效果,而氯胺酮及异丙酚此时仍有1/3以上维持麻效。
麻醉质量直接关系到动物实验成功。麻醉质量控制十分重要,对实验动物的麻醉药物最适量、方法正确,可以对实验动物的生理功能影响降低到最低限度,从而可以充分保障实验结果的稳定性[2]。纵观以上三种麻醉药品的麻醉效果及统计学分析结果,对实验小鼠麻醉作用各有长处及短处,存在差异性,本实验结果可为小鼠动物实验麻醉学方面提供客观的相关医学数据。
4 参考文献
[1] 牛义民,张天宏.外科动物手术学[M].贵阳:贵州科技出版社,2004:50-59
[2] 孙敬方.动物实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2004:192-196
广东省科技计划项目(No.2003C34305)
广东省医学科研基金项目(No.A2003326)
广州市儿童医院功能科
中山大学第一附属医院耳鼻咽喉科
510260 广东省广州市,广州医学院第二附属医院