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关键词 轮状病毒；腹泻；聚丙烯酰胺凝胶电泳；儿童
1 对象与方法
1.1 研究对象
本组研究对象为唐山市中心区四所综合医院2003年1月1日—2005年12月31日因患腹泻住院的社区感染儿童以及住院期间患腹泻病的院内感染儿童,共计1 122例。分别从每例患儿采集粪便标本1份,置标本于-20℃冰箱保存。采样时间为腹泻病症状出现后1~14d,99.2%的标本在腹泻发病后5d内收集。儿童腹泻病的诊断标准为大便次数增多,呈水样、蛋花汤样或稀糊样。
1.2 患儿年龄与性别
1 122例儿童中,除20例未查找到有关疾病的详细资料外,其余1 102例患儿均有详细病史记载,年龄为2d~13岁。
1.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测
1 122份标本冻融后,挑取少许粪渣或水样便加Tris2 CaCl2缓冲液稀释至400L,加40L的10%十二烷基磺酸钠,56℃水浴30min,用1∶1酚/氯仿抽提RNA。采用垂直板状聚丙烯酰胺凝胶电泳,Laemili不连续缓冲系统,浓缩胶质量分数为3%,分离胶质量分数为10%,硝酸银染色,根据病毒核酸条带的不同特征来区分A、B、C组轮状病毒。
2 结果
2.1 轮状病毒检测结果及电泳型的分布规律
1 122份标本中,426份检出A组轮状病毒RNA,轮状病毒阳性检出率为38.0%,未发现B组、C组轮状病毒。493份轮状病毒RNA阳性的标本中,RNA长型345份(81%),短型43份(10.1%),混合型16份(3.8%)，包括14份长型与长型混合及2份长型与短型混合,RNA部分降解未能分型22份（5.2%）。各年检测具体情况见表1。表1显示轮状病毒电泳型均以长型占优势。表1 唐山地区腹泻儿童不同年份轮状病毒RNA电泳型分布（略）
2.2 轮状病毒感染与季节的关系
轮状病毒全年都有检出,自当年秋季的10月份起轮状病毒阳性检出率明显上升,继之在冬季呈流行趋势,3年中冬季11月至次年2月轮状病毒阳性检出率最高,均达到50%以上,最高可达75%,而其他时间的阳性检出率为11%~32%。根据2003年与2004年冬季5岁以下因原发腹泻病住院儿童的资料,轮状病毒腹泻在2003年11月—2004年2月占65.1%，2004年11月—2005年2月占58.1%。
2.3 轮状病毒感染患儿的月龄与性别分布
1 102例有明确临床资料的受检患儿中426例轮状病毒阳性,患儿月龄、性别分布见表2。在426例阳性儿童中,≥5岁占0.5%,<5岁占99.5%,其中<6个月龄占4.0%,≥6个月<2岁占86.4%,2~5岁占9.23%,轮状病毒腹泻病总的平均发病月龄为15.1个月。轮状病毒RNA阳性组中男性患儿239例,女性患儿187例,男女比为1∶28。表2 A组轮状病毒感染者的性别、月龄分布（略）
2.4 轮状病毒感染的临床特征
426例轮状病毒阳性的腹泻病儿童均有腹泻症状,平均腹泻6.0d,24h最多腹泻次数平均7次;221例(51.9%)患儿有呕吐,平均呕吐1.5d;323例(75.8%)有发热,平均发热2.5d,平均发热高峰39.1℃;103例(24.2%)患儿伴轻中度脱水。
3 讨论
A组轮状病毒是儿童腹泻的主要病原体,自1973年Bishop发现轮状病毒以来,人们对轮状病毒流行病学作了大量的研究,20世纪70~80年代的有关资料显示在世界各地轮状病毒的检测阳性率为11%~70%［1］。欧美等发达国家近10多年的研究表明在5岁以下住院儿童中,患轮状病毒腹泻的儿童占腹泻患儿的20%~50%［2］,国内一项多中心研究显示，轮状病毒总检出率为48.4%，各地标本检出率在32.0%~63.0%［3］，唐山地区总阳性率为38.0%，就国内而言，高于北京友谊医院报道［4］的总检出率25.4%，低于长春市儿童医院报道［5］的检出率52.9%，与上海地区的40.1%［6］接近。电泳结果分析可见唐山地区轮状病毒以长型为主,短型较少,另外还存在少部分混合感染，总的RNA分型结果与国内情况［7］一致。
本病的的流行有很强的季节性，在全球均以寒冷的冬季为发病高峰期。本研究发现在唐山地区腹泻儿童中,轮状病毒感染自当年的秋季10月份起开始呈流行趋势,继之在冬季呈流行高峰,3年中冬季11月至次年2月轮状病毒阳性检出率最高,均达到50%以上。尤其是11月份。轮状病毒主要感染对象是5岁以下儿童,几乎5岁以下儿童至少经历1次轮状病毒感染［1］,而轮状病毒腹泻主要发生于6个月~2岁婴幼儿,6个月龄以下婴儿由于母乳喂养及母体抗体的保护,发生率低。本研究显示轮状病毒腹泻儿童的年龄分布符合该病的流行规律,5岁以下儿童是轮状病毒易感人群,占99.5%,6个月龄以上至2岁儿童是轮状病毒腹泻的高发人群,占86.4%,总体年龄分布与国内外的报道基本一致。本组无一例发生重度脱水导致死亡,但轮状病毒作为腹泻儿童的最主要病因所造成的疾病负担不容忽视,目前轮状病毒疫苗的研制已逐步成熟,WHO明确推荐疫苗的使用,其目的在于降低发展中国家儿童病死率,减轻发达地区疾病负担。随着唐山地区的医疗卫生状况不断改善,轮状病毒已上升为儿童腹泻的主要病因,了解轮状病毒的流行特征有助于将来制定预防策略。
参考文献
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