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关键词 乳腺癌；癌旁组织；MTLC基因；聚合酶链反应
摘要 目的 研究MTLC基因在乳腺癌组织中的表达及其意义。方法 利用RT-PCR检测35例乳腺癌及其相对应的癌旁组织中MTLC mRNA的表达。结果 35例乳腺癌组织中，31例MTLC mRNA表达下调，其下调与乳腺癌的分化程度无关。结论 本结果提示MTLC基因在乳腺癌组织中表达下调，进一步说明MTLC表达降低可能与肿瘤发生发展关系密切。
EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF MTLC GENE IN BREAST CARCERS AND THEIR SURROUNDING TISSUES
Ouyang Xiaoming, Huang Shizhang, Mei Kaiyong.
Department of Pathology, The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical Colledge, Guangzhou 510260, China
Key words breast cancer; cancer surrounding tissue; MTLC gene; polymerase chain reaction
Abstract Objective To investigate expression and significance of MTLC(c-myc target from laryngeal cancer cells) gene in breast cancers (BC) and their surrounding tissues. Methods RT-PCR was performed to detect the mRNA expression of MTLC gene in 35 cases with breast cancer and their surrounding tissues. Results mRNA levels of MTLC gene were down-regulated in 31 of 35 cases with breast cancer. The down-regulation of mRNA levels of MTLC gene in breast cancer was not related to different degrees of breast cancer. Conclusion MTLC gene is down-regulated in breast cancer, which further suggests that the down-regulation of MTLC gene is closely related to the genesis and development of tumors.
乳腺癌（breast cancer,BC）是一种常见的高度恶性肿瘤，大量研究表明BC的发生可能与p53，c-myc，c-erbB2等基因有关［1］，但其确切的分子机制尚不明确。新近克隆的MTLC（c-myc target from laryngeal cancer cells）基因可促进胃癌细胞系BGC823细胞的凋亡［2］，该基因（基因库登录号AF527367）定位于染色体6q25区域，该区域与多种肿瘤有关。本研究拟利用逆转录－聚合酶链式反应（RT-PCR）分析MTLC基因与BC发生发展的关系。
1 材料与方法
1.1 标本来源
收集本院乳腺外科手术切除的新鲜BC标本35例，并取距肿瘤1.5cm的癌旁组织，迅速入液氮冻存。所有标本均经病理诊断确诊；其中浸润性导管癌Ⅰ级6例，Ⅱ级11例，Ⅲ级15例，Ⅳ级3例，所有患者术前均未进行任何放疗和化疗。
1.2 一般资料
35例患者均为女性，年龄37~65岁，平均45.1岁。所有病例均为单结节型，肿瘤直径1.0～3.4cm。
1.3 试剂
TRIZOL试剂盒购自GibcoBRL公司；逆转录酶、Taq酶购自Promega公司；PCR扩增引物由上海生工生物工程有限公司合成。正向引物：5′-ATGG ATCC CTGC ACTG GCTG ATGA GTGT GTA-3′；反向引物：5′-GTAA GCTT GAAC AGTG CCTT CACC CTCG AGGT-3′。
1.4 RT－PCR扩增
利用TRIZOL试剂盒抽提组织中的总RNA，用逆转录酶合成cDNA第一链，PCR扩增MTLC cDNA。反应条件：95℃预变性1min；95℃30s，60℃1min，72℃1.5min，30个循环；72℃延伸10min。以β－actin基因作内对照。反应产物利用1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，自动凝胶成像仪扫描电泳带，测量MTLC/β－actin相对光密度值，半定量分析MTLC基因表达。
2 结果
利用RT-PCR检测35例乳腺癌和癌旁组织中MTLC mRNA的表达，凝胶电泳结果显示扩增产物呈单一条带（见图1）；电泳带经扫描分析，确定乳腺癌组织与相对应的癌旁组织中MTLC/β－actin相对比值<0.5为表达下调，结果显示，35例乳腺癌组织中，31例MTLC mRNA表达下调，其下调与乳腺癌的分化程度无关，见表1。表1 乳腺癌和癌旁组织中MTLC/β－actin的相对表达（略）
3 讨论
MTLC是新近克隆的一个新基因，其功能尚不清楚。该基因定位于6q25，该区域与多种恶性肿瘤有关。分析证实在MTLC基因启动子区存在2个E-box，提示MTLC基因可能是c-myc癌基因的1个靶。c-myc是一个含亮氨酸拉链的转录因子，通过大量靶基因参与细胞转化、分化、凋亡及细胞周期的调控［3］。
邱广斌等［3］发现MTLC基因可促进胃癌细胞系BGC823细胞凋亡，并通过RT-PCR、免疫组化及cDNA微阵列分析观察到MTLC基因在胃癌组织中表达降低，认为MTLC可能是一种抑癌基因［4］。本研究利用RT-PCR检测了35例乳腺癌及其对应的癌旁组织，结果显示，在35例乳腺癌组织中，31例MTLC mRNA表达下调，其下调与乳腺癌的分化程度无关。进一步说明MTLC表达降低可能与肿瘤发生发展关系密切，但还需通过大量实验予以证实。
参考文献
［1］侯刚强，吴武军，邓晓慧，等. ER、PR、P53、P16和CerbB-2在乳腺癌中的表达及与临床、病理的关系［J］.四川解剖学杂志，2005，13（3）：4-6
［2］邱广斌，贺光，徐振明，等. 6q25区域一个新基因MTLC的克隆及特性分析［J］.中华医学遗传学杂志，2003，20（1）：94－97
［3］Wu KJ, Polack A, Dalla-Favera R. Coordinated regulation of iron-controlling genes, H-Ferritin and IRP2, by c-myc［J］.Science, 1999, 283: 676-679
［4］邱广斌，郝冬梅，郑志红，等. 胃癌组织中MTLC基因表达研究［J］.中华检验医学杂志，2005，28（1）：85－87
广东省广州市，广州医学院第二附属医院病理科