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关键词 海洋水螅类；生物活性；化学成分
海洋水螅类Tubuaria marina属于腔肠动物门(coelenterata)，其形态看上去像是海草，实际上是动物。在沿海水产养殖筏架上常常布满该生物，渔民将其称为“海虫子”，能危害水产养殖，故作为有害杂物除去。虽然该类生物在世界各地广泛分布，但目前关于该类动物活性和化学成分的报道很少［1］。本文研究了海洋水螅类动物Tubuaria marina的抗菌及细胞毒活性，并从中分离鉴定出了3种已知结构化合物。报告如下。
1 材料与方法
1.1 受试菌株 受试微生物为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌、白色念球菌和毛霉以及绿藻Scenedesmus subspicatus，Chlorella vulgaris和Chlorella sorokiniana。
1.2 动物样品粗提物的制备 动物样品采自浙江舟山。采集后首先于阴凉通风处晾干，然后用95%的工业乙醇冷浸提取，每次浸泡7d，共浸泡提取3次；经过滤的浸泡液用旋转蒸发仪尽量蒸干，得到含水的粗提液用乙酸乙酯萃取至有机相几乎没有颜色，乙酸乙酯经旋转蒸发除去。剩余的动物样品再用乙酸乙酯浸泡2次，每次7d，所得的浸泡液用旋转蒸发仪蒸干。合并上述二种方法得到的粗提物，得粘稠膏状物。
1.3 抗菌活性测试 取少量膏状粗提物用50%的氯仿/甲醇（v/v）溶液溶解，然后滴在事先灭菌的φ9mm的纸片上，使得每片纸片含粗提物1.5mg。上述纸片在无菌操作台晾干后，轻轻地贴在培养基表面。受试真菌平板于28℃培养约2d，细菌平板于37℃培养约18h，观察是否有抑菌圈出现。
1.4 对卤虫的细胞毒活性测试 卤虫卵在室温下用海水通气孵化2d，长出幼虫后即可用于测试。取20只左右的卤虫置于细胞培养板内，粗提物用DMSO溶解后，加入细胞培养板中。培养一定时间后，在10倍解剖镜下观察统计死亡率。
1.5 化合物分离鉴定 将上述粗提物悬浮在甲醇和环己烷两相中，剧烈振摇后静置分层，环己烷相为油脂类，故弃去。甲醇相经过硅胶柱层析分离，获得6个组分F1-6。组分F2种经Sephadex LH-20柱层析和制备薄层层析分离，得化合物1；F5和F6经反复的Sephadex LH-2柱层析，得已知化合物2和3。上述化合物通过核磁共振与质谱等手段而解析得出其结构。
2 实验结果
2.1 活性 见表1。对卤虫的细胞毒活性实验表明，在粗提物最大浓度为100μg/ml时，卤虫死亡率为2%，未显示出细胞毒性。
表1 抗菌活性结果 略
2.2 化合物结构鉴定 见图1。
化合物1为白色固体，根据EI-MS和CI-MS得出其分子量为386，通过搜索质谱数据库，得到一系列甾醇类化合物。该化合物1H NMR显示在δ5.35(d，1H，5-H) 有一个双键氢，在δ3.51(m，1H，3-H)处的氢为与羟基碳相连的氢，δ1.02和0.66处有2个甲基单峰，分别为18-CH3和19-CH3 2个与季碳相连的甲基；δ0.88（d，3H）和0.92(d，3H)为异丙基的氢核信号，此外，在δ1.1-2.3处有复杂的亚甲基和次甲基信号峰。其13C NMR表明含有27个碳原子，其中2个不饱和碳δ140.7和121.7，一个与羟基相连的碳δ71.7。通过检索文献［2］，最后确定该化合物为胆甾-5-烯-3β-醇（Cholest-5-en-3beta-ol，1）。化合物2为油状，其EI-MS得出分子量为126，用该分子量搜索质谱数据库，得出5-甲基-尿嘧啶等化合物。其1H NMR更进一步证实该化合物为胸腺嘧啶，其中δ1.70处的单峰为甲基峰，δ7.22为不饱和氢。经过对比文献［3］，证实该化合物就是5-甲基-尿嘧啶（5-Methyluracil，2）。化合物3的性质与2相似，其1H NMR只显示出2个不饱和氢，即δ7.38和5.42，他们互相耦合，呈现双峰。通过比较文献，得出该化合物为尿嘧啶［4］（Uracil，3）。
图1 化合物结构 略
3 讨论
近年来，从海洋腔肠类动物，如海葵、柳珊瑚、软珊瑚等发现了许多高活性的新结构化合物，但对于海洋水螅类的研究并不多见。张立新等［5］的对青岛采集的海筒螅的活性研究发现，其乙酸乙酯提取物具有体外抑制肿瘤细胞生长的活性，但没有明显抗菌效果，进一步的研究从中分离出三种已知结构化合物［1］。我们的研究与之相反，在以卤虫为模型的细胞毒筛选中，未显示出细胞毒性，但是却显示出了较好的抗菌活性，特别是对革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、放线菌Streptomyces viridochromogenes和真菌毛霉显示出较好的活性。这一差异可能与不同的样品采集地点有关。从二种样品中都分离出了胆甾-5-烯-3β-醇，可能是这一类动物螅茎的共有化学成分，也是一种在海洋无脊椎动物中较为常见的物质。由于样品量较少，且各种微量成分组成很复杂，我们未能鉴定出与抗菌活性有关的物质，今后应加大样品采集量，进一步分析其化学成分，以发现有活性的新结构物质。
4 参考文献
［1］ 张立新，范晓.海筒螅中3种化学成分的分离鉴定［J］.海洋科学，2002，26（9）：5-7
［2］ 龚运涯.天然有机化合物的13C核磁共振化学位移［M］.昆明：云南科技出版社，1986：324
［3］ Laskin AI，Chevalier HA.CRC Handbook on Microbiology［M］.II，Cleveland:CRC Press，1973：343
［4］ Q Huang.Studies on metabolites of mycoparasitic fungi. III. New sesquiterpene alcohol from Trichoderma koningii［J］.Chem Pharm Bull，1995，43(6):1035-1038
［5］ 张立新.山东沿海21种海洋无脊椎动物抗肿瘤活性初步筛选［J］.海洋科学，2003，27(7):63-66
河北省唐山市，华北煤炭医学院