苏安心鼻吸剂在家兔体内外药物成分的分析

【摘要】  目的 分析苏安心鼻吸剂家兔体内外的药物化学成分,判断药物在家兔体内可能存在的代谢产物,为中药吸入制剂的开发奠定基础。方法 采用气相质谱联用(GCMS)的技术,对苏安心鼻吸剂中苏合香、冰片等药物的化学成分进行了鉴别,同时,分析家兔经鼻吸入上述药物后血液中可能存在的药物成分,测定不同时间段冰片在家兔体内的血药浓度。结果 体外方面,苏安心鼻吸剂中含有肉桂酸苄酯、苯甲酸苄酯、冰片、18去松香烷等药物成分;家兔体内,冰片分别在第30分钟和第4小时出现血药峰浓度,同时观察到2羟基苯甲酸甲酯的存在,而体外其它成分在家兔体内未观察到。结论 体外的肉桂酸苄酯、苯甲酸苄酯、冰片等成分和方中苏合香、冰片的成分一致。冰片在家兔体内以原型成分吸收入血、分布、代谢和排泄,而苯甲酸苄酯和肉桂酸苄酯的代谢产物为2羟基苯甲酸甲酯。从冰片的两个血药峰浓度现象可知冰片具有吸收快、消除快的特点,说明该制剂具有良好的速效、长效作用。

【关键词】  中药鼻吸剂;GCMS;体内外;成分分析

　【Abstract】 Objective To identify in vitro and in vivo drug components from Suanxin nasal inhalant and obtain the possible metabolites in rabbits,which may found a good base for the development of nasal inhalant of tradition Chinese medicine. Methods Rabbits were selected as the models and the method of gas chromatography and mass spectrum (GCMS) was used to identify in vitro and in vivo chemical components of volatile drugs borneol and styrax in nasal inhalant. And the blood concentrations of borneol in rabbits in interval time were determined. Results The in vitro drug components included benzyl benzoate,benzyl cinnamate,18norabietane and borneol etc. However,only borneol and 2hydroxy methyl benzoate were found in vivo,and the former having two peak blood concentrations at 30 minutes and 4 hours after administration,respectively. Conclusion The in vitro drug components benzyl benzoate,benzyl cinnamate,and borneol are in accordance with the components from styrax and borneol. The analysis of the in vivo chemical components showed that original borneol and metabolite 2hydroxy methyl benzoate from benzyl benzoate and benzyl cinnamate entere into the rabbit blood to get an effectiveness,and other components in vitro were not found in vivo. The two peak concentrations of borneol in blood suggests that borneol has a characteristic of quick absorption and quick excretion and Suanxin nasal inhalant has a quick and prolonged effectiveness to cure cardiovascular diseases.

　　【Key words】 Suanxin nasal inhalant; gas chromatography and mass spectrum; in vitroin vivo; components analysis

　　吸入给药是一种重要的非注射给药途径,与其他给药途径相比,具有吸收迅速、生物利用度高、避免肝脏首过代谢等优越性,已成为全球研究的热点。中药吸入制剂相关研究报道的也较多[15]。苏安心鼻吸剂是一种专门夜间定时释药的新剂型,特指将不具备透皮作用的裱褙材料的一面贴于鼻子下方“人中”部位,附着或涂抹于裱褙材料另一面上的挥发性药物以气体形式经鼻子吸入肺部发挥局部或全身治疗作用的一种吸入制剂[6]。它主要由苏合香、冰片等挥发性药物组成,具开窍与行气活血之效,对夜间突发引起的危难病症心绞痛、胸闷憋气等具有良好的宽胸止痛效果[7]。

　　本文运用气相一质谱联用(GCMS)技术对苏安心鼻吸剂在家兔体内外的药物成分进行分析,并测定了冰片在家兔体内6个小时的血药浓度,为制剂质量标准的建立奠定基础。

　　1 材料与方法

　　1.1 仪器与试药

　　6890N型GCMS联用仪,Enhanced Data Analysis数据处理系统(美国安捷伦公司);旋转蒸发仪RE52AA(上海亚荣生化仪器厂),KQ2200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),XW80A型漩涡混合器(上海医科大学仪器厂);802型台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂);电子天平(上海精密科学仪器厂)。

　　家兔(购自福建中医学院实验动物中心),苏安心鼻吸剂(自制,每份0.45 g),冰片对照品(购于中检所,批号110743200504),无水乙醇、乙腈、氯仿等其它试剂均为分析纯。

　　1.2 方法

　　1.2.1 分析条件

　　DB5MS弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm i.d×0.25 μm);柱温:80℃5℃/min220℃(保持15 min);载气:He,流速:1 ml/min;进样口温度:250℃;分流进样,分流比10∶1.质谱条件:电子轰击(EI)离子源,电子能量:70eV;扫描范围:33 u500 u;GCMS接口温度:230℃;倍增器电压:1000 V;NIST107谱库。按上述色谱分析条件,每次进样5 μl.

　　1.2.2 体外分析样品的制备

　　取3份苏安心鼻吸剂样品,称取合适重量后,将内容物摊薄,分别放入3个盛有20 ml无水乙醇的具塞三角瓶内,浸泡12小时,将溶剂滤入25 ml量瓶内,再用适量无水乙醇洗涤内容物3次,并入量瓶,无水乙醇定容后,作为样品。

　　1.2.3 体内试验过程

　　取家兔5只,雄性,2kg左右,试验前禁食12 h,将苏安心鼻吸剂贴在家兔鼻子下,用长胶布固定好,分别在第0、0.5、1、1.5、2、3、4、5、6小时时间点耳缘静脉取血。血样离心,取上清液,作好标记,备用。

　　1.2.4 体内血浆样品的制备

　　分别取家兔空白血浆和各时间段的血浆样品各300 μl,加入等量乙腈,涡旋混匀5 min,超速离心5 min(12 000 r/min),取上清液,再加等量氯仿萃取,涡旋混匀5 min,超速离心使分层,取氯仿层,备用。

　　1.2.5 冰片标准品溶液的制备

　　精密称取标准品冰片适量,用氯仿溶解,配得浓度为100 μg/ml的标准品溶液。

　　2 结果

　　2.1 体外样品中药物成分的鉴别

　　3份体外样品经GCMS测试和图谱验证,在前20个峰中,确定归一化峰面积大、清晰度高的成分有苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯、冰片、18去松香烷等,其中肉桂酸苄酯、苯甲酸苄酯、冰片分别为方中苏合香和冰片主要成分,与文献报道一致[8,9]，见图1、图2和表1.图2 冰片的总离子流图及其质谱图表1 体外鼻吸剂中所含的主要成分及其归一化峰面积数据图1 鼻吸剂中所有成分的总离子流图

　　2.2 体内样品中药物成分的分析

　　将家兔空白血浆和各自的血浆样品按上述GCMS条件进行操作,具体以家兔1第1小时的谱图为例,见图3.图3 家兔1第1小时样品血浆中冰片与空白血浆的比较图谱5只家兔对应平均血药浓度和时间的药时曲线见图4.图4 5只家兔体内冰片平均的药时曲线图由图3经GCMS结构库比较可知,7.46分钟左右为冰片峰形,8.09分钟处为2羟基苯甲酸甲酯的峰形,苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和18去松香烷的峰形没有看到。由图4可知家兔吸入冰片后体内半小时就达到血药峰浓度,6小时内出现双峰现象且冰片较好地维持在一定浓度,说明制剂具有良好速效和长效作用。

　　3 讨论

　　3.1 质量标准的建立

　　GCMS测试证明体外的肉桂酸苄酯、苯甲酸苄酯、冰片等成分和方中苏合香、冰片的成分一致,苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯和冰片等成分可作为体外质量标准和体内药物分析的基础;冰片以原形成分入血产生疗效,可作为体内药动学和含量测定的研究对象。

　　3.2 药物体内过程

　　家兔体内,冰片分别在第30分钟和第4小时出现血药峰浓度,同时观察到2羟基苯甲酸甲酯的存在,而体外其它成分在家兔体内未观察到，说明冰片在家兔体内以原型成分吸收入血、分布、代谢和排泄,而苯甲酸苄酯和肉桂酸苄酯的代谢产物为2羟基苯甲酸甲酯。另从冰片出现两个血药峰浓度后浓度又迅速减小的现象看,说明冰片在体内吸收快且消除迅速,不存在体内蓄积现象,与文献报道一致[10],也证明该制剂具有良好的速效与长效作用。

　　3.3 方法学分析

　　本文试验期间,冰片浓度由龙脑和异龙脑两个成分的峰面积之和通过求算而得,GCMS采用的方法可行,精密度、重现性等均良好,因重点在于讲述家兔体内外药物成分的分析,故省略不写。

【参考文献】
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