头孢他啶与阿奇霉素针对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌体外联合药敏研究

【摘要】  目的 评价头孢他啶与阿奇霉素联合作用，对泌尿系48株大肠埃希菌、36株肺炎克雷伯菌的体外抗菌效应。方法 采用琼脂稀释法测定抗菌药物单独应用和最佳组合效应时的最低抑菌浓度(MIC)值，计算体外部分抑菌浓度指数(FIC)，判断联合抑菌效应。结果 头孢他啶与阿奇霉素联合应用后对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌MIC值均无明显降低(P>0.05)，根据FIC指数分布，表现为无关作用的为60.42%和88.89%；相加作用的为31.25%，8.33%；协同作用的为8.33%和2.78%；未发现拮抗作用。结论 头孢他啶与阿奇霉素联合应用对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的体外抗菌作用以无关为主。

【关键词】  大肠埃希菌；肺炎克雷伯菌；头孢他啶；阿奇霉素

  近年来，大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌已成为我院泌尿系感染列居前二位的重要致病菌，且多重耐药菌株逐年增加，对抗菌药物敏感性日趋下降，使临床治疗其所致的感染更加困难。因此，抗菌药物的联合应用成为临床医生的首选治疗方案。本试验选用头孢他啶和阿奇霉素对48株大肠埃希菌、36株肺炎克雷伯菌的体外联合作用进行研究，旨在为临床治疗上述二种常见革兰氏阴性杆菌所引起的泌尿系感染选择有效抗菌药物提供试验数据。

    1  材料与方法

    1.1  菌株  收集2007年1-7月，自我院泌尿系感染患者尿液标本分离出的大肠埃希菌48株，肺炎克雷伯菌36株。并以大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌产超广谱β内酰胺酶株ATCC700603作为质控菌株。

    1.2  抗菌药物和溶剂  抗菌药物标准品头孢他啶与阿奇霉素由上海君创生物科技有限公司提供。头孢他啶的溶剂为碳酸钠(其重量为所称头孢他啶重量的10%)，稀释剂为蒸馏水；阿奇霉素的溶剂为950mL/L乙醇，稀释剂为MuellerHinton(MH)肉汤液体培养基[1]。

    1.3  仪器与试剂  多点接种器购自天津京章公司，MuellerHinton(MH)肉汤购自杭州天和生物制品有限公司，比浊仪为生物梅里埃公司产品。

    1.4  抗菌药物敏感试验  采用琼脂稀释法进行抗菌药物最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)测定。各种药物单独MIC测定采用不同浓度范围。头孢他啶与阿奇霉素联合浓度范围分别为0.13-64mg/L和0.03-32mg/L。抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration, FIC)指数计算与判读标准[2]：FIC指数= MIC甲药联用/ MIC甲药单用+ MIC乙药联用/ MIC乙药单用。抗菌药物的联合效应：FIC指数≤0.5为协同作用；0.52.0为拮抗作用。

    1.5  统计学方法  使用WHONET软件进行统计学处理。

    5期〖2〗李忠民，胡地侠，张秀芳，等. 头孢他啶与阿奇霉素针对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌体外联合药敏研究

    2  结    果

    2.1  抑菌结果  头孢他啶与阿奇霉素两药联合应用后，仍呈现单独使用头孢他啶的MIC50值(表1)。表1  抗菌药物单用与联合应用的MIC50结果注：药物单独应用与联用后的MIC50, P>0.05

    2.2  FIC指数构成比  根据FIC指数分布，头孢他啶与阿奇霉素联合应用对大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌表现为无关作用的为60.42%和88.89%；相加作用的为31.25%和8.33%；协同作用的为8.33%和2.78%；未发现拮抗作用(表2)。表2  头孢他啶与阿奇霉素对大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌联合应用的FIC指数构成比

    3  讨    论

    我院临床治疗泌尿系感染主要应用喹诺酮类药物，但近年来由于其在临床上的广泛应用，耐喹诺酮类药物菌株逐年增加[3]，在我院耐药率已达到68.33%，已不能作为治疗泌尿系感染的首选药物。针对临床医生认为头孢他啶与阿奇霉素联合应用抗菌效果良好的观点，本研究采用头孢他啶与阿奇霉素体外联合作用于大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌，观察它们的联合抗菌效应，为其治疗泌尿系感染提供实验依据。

    头孢他啶为第三代头孢菌素类抗生素。对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌和流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌等有高度抗菌活性。对硝酸盐阴性杆菌、产碱杆菌等亦有良好抗菌作用。对于细菌产生的大多数β内酰胺酶高度稳定，故其对上述革兰氏阴性杆菌中多重耐药菌株仍具有抗菌活性。其作用机制为与细菌细胞膜上的青霉素结合蛋白(penieillin binding proteins, PBPs)结合，使转肽酶酰化，抑制细菌中隔和细胞壁的合成，影响细胞壁黏肽成分的交叉连结，使细胞分裂和生长受到抑制，细菌形态变长，最后溶解和死亡。阿奇霉素是大环内酯类抗生素亚类之一，即氮杂内酯类抗生素的第一个药物。阿奇霉素的作用机制是通过和50s核糖体的亚单位结合及阻碍细菌转肽过程,从而抑制细菌蛋白质的合成。一般理论上认为：大环内酯类药物不宜与β内酰胺类药物联合应用，可出现拮抗作用[4]，临床上应加以避免。因头孢他啶为细菌繁殖期杀菌剂，而阿奇霉素为快速抑菌剂，头孢他啶与大环内酯类抗生素阿奇霉素合用，由于后者迅速抑制细菌蛋白质合成，阻止细菌生长、繁殖，而使细菌处于静止状态，致使作用于繁殖期杀菌剂的头孢他啶干扰细胞壁合成的作用不能充分发挥，从而降低头孢他啶的杀菌效果。而近年来有新理论认为：阿奇霉素除了抑制细菌蛋白质合成外，还具有很强的细胞内穿透作用，使药物在菌体内有较高浓度[4]，同时可破坏某些微生物的细胞壁和胞浆膜的完整性，还可能影响到细菌的主动流出系统。

    从本研究抗菌药物联合应用前后可以看出：药物联合前后，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的MIC值未下降，仍然呈现单一应用头孢他啶的MIC值，联用后抑菌作用未显著优于单一应用头孢他啶，且大肠埃希菌的耐药性低于肺炎克雷伯菌；体外联合药敏试验部分抑菌浓度(FIC)指数是评价抗菌药物联合效应的重要参数，本研究数据显示两者联合作用于肠杆菌科细菌以无关作用为主，大肠埃希菌为60.42%，肺炎克雷伯菌为88.89%；有31.25%的大肠埃希菌在药物联合后呈现相加作用，但肺炎克雷伯菌只有8.33%；二种药物联合作用后呈现协同作用的比例均极低，但药物联合后并未出现理论上预期的拮抗作用。本研究结果提示，一定要依据细菌种类、根据药敏试验结果选择有效的抗生素，以免给患者增加经济负担和不必要的药物毒副作用。

【参考文献】
  参考文献：

[1]叶应妩,王毓三. 全国临床检验操作规程 [M]. 第2版.南京：东南大学出版社, 1997:562563.

[2]刘恭植,余传霖,张颖悟,等. 微生物学和微生物学检验 [M]. 北京：人民卫生出版社, 1987:108109.

[3]燕成岭，樊淑珍，曹银芳，等. 泌尿系感染的病原菌分布及耐药性分析 [J]. 中华医院感染学杂志, 2007, 2(17):224226.

[4]肖伟，于秀娟，徐立升. 阿奇霉素与头孢曲松的联合抗菌活性 [J]. 中华医学检验杂志, 2000,2(23):117.

作者单位：河北省张家口市第一医院，河北张家口 075000