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【摘要】 目的 观察肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液sIgA的含量及理肺通络方的干预作用。方法 将40只大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、西药组，每组10只。一次性滴鼻感染肺炎支原体国际标准株(MPFH)菌液(每毫升含肺炎支原体107变色单位)造成肺炎支原体肺炎模型。造模第11 d起，除正常组外，其余各组分别灌服生理盐水、理肺通络方水煎剂、阿齐霉素溶液，2 mL/只。中药组连续服药10 d，西药组前、后3 d灌药液，中间4 d灌生理盐水。在治疗的第11 d处死动物，观察各组大鼠血清MP\|IgM滴度及右肺组织形态学，采用放免双抗夹心法检测sIgA含量。结果 模型组大鼠血清MP\|IgM阳性，光镜下显示肺组织炎性细胞浸润和组织损伤明显;与正常组比较，模型组、中药组、西药组肺泡灌洗液中sIgA含量显著降低，有高度统计意义（P<0.01）;与模型组比较，中药组、西药组sIgA含量显著升高（P <0.01）;中药组与西药组比较有统计意义（P<0.05）。结论 肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液sIgA含量下降，理肺通络合剂能提高呼吸道局部sIgA含量，且优于西药阿齐霉素，可能有助于降低再次感染的几率。
【关键词】 肺炎支原体肺炎；理肺通络方；肺泡灌洗液；分泌型IgA
分泌型免疫球蛋白A（sIgA）广泛存在于血液及各种分泌液中，它是分泌液重要的免疫蛋白种类，是机体特异性的防御因素。本实验观察了理肺通络方对肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液sIgA含量影响，探讨本方对于增加sIgA含量、提高气道局部防御功能方面的作用。
1 材料及方法
1.1 材料选择6周龄SPF级雄性Wistar大鼠40只，质量（150±10）g，由湖北省疾控中心提供[许可证号：SCXK（鄂）2003-0005],颗粒饲料喂养。理肺通络方由黄芪20 g、沙参10 g、紫菀10 g、枳实10 g、百部10 g、麻黄7 g、杏仁10 g、蜈蚣1条、甘草6 g组成，由湖北省中医医院中药房煎煮成浓度为3 g/mL药液，高压灭菌后置冰箱中备用；阿齐霉素临用前配成5.5 mg/mL溶液[按50 mg/（kg·d）计算]；sIgA放免试剂盒（北京北方生物技术研究所提供）；肺炎支原体抗体被动凝集诊断试剂盒（富士瑞必欧株式会社提供）；GL-20G-Ⅱ冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂生产）；WKYⅢ型微量移液器（上海荣泰生化工程有限公司生产）。
1.2 方法
1.2.1 实验分组及样本处理40只大鼠随机分为4组：正常组、模型组、中药组、西药组，每组10只。经3 d适应性饲养后，用乙醚麻醉动物，模型组、中药组及西药组一次性滴鼻感染肺炎支原体国际标准株(MPFH)菌液(每毫升含肺炎支原体107变色单位)0.3 mL/只，正常组予生理盐水0.3 mL/只滴鼻。造模第11 d起，分别灌胃灌服生理盐水、理肺通络方水煎剂、阿齐霉素溶液，2 mL/只。模型组、中药组连续灌胃10 d；西药组前、后3 d灌服药液，中间4 d灌服生理盐水。在治疗的第11 d处死动物，摘眼球取血，检测正常组、模型组血清MP|IgM。暴露大鼠胸腔，结扎右肺，左肺用生理盐水2 mL行肺泡灌洗，灌洗液置-70 ℃冰箱中备用，检测各组sIgA含量。取肉眼可见病变的右下叶肺组织,用10 %福尔马林固定、石蜡包埋、切片、HE染色,光学显微镜下观察。
1.2.2 肺泡灌洗液sIgA 检测本试剂盒采用放免双抗夹心法，可检测血清及各种分泌液中的sIgA。采用的双抗体均是针对sIgA中分泌成分SC的特异抗体。包被在聚苯乙烯球上的抗体与样本中的sIgA形成免疫复合物“抗体-sIgA”，然后加入标记抗体125I-抗体，形成三层夹心免疫复合物“抗体-sIgA-125I-抗体”。测定每个小球上的125I 放射性计数率(cpm)值，与标准曲线或标准值cpm对照计算，即可知样品中sIgA含量。检测操作步骤首先对样品进行1∶10稀释，具体步骤见表1。表1sIgA放射免疫操作步骤 各管cpm值先减去S0 cpm值后再计算，用双对数直角坐标作图（横坐标为浓度，纵坐标为cpm值），查出浓度应乘以稀释倍数即为原标本浓度。
1.2.3 统计学处理所有测定指标均采用±s表示,组间比较采用ｔ检验,以P<0.05、P<0.01表示有统计意义。
2 实验结果
2.1 大鼠血清Mp|IgM滴度及肺组织形态学检查实验结果显示，模型组大鼠血清MP|IgM 滴度显著增高（见表2）。光镜下HE染色，正常组肺组织仅个别大鼠小支气管有少数淋巴样细胞浸润；模型组可见肺泡间隔增宽，支气管、细支气管周围与肺泡间隔内毛细血管明显充盈，有程度不等的淋巴样细胞，个别单核细胞及分叶核白细胞浸润，间质呈明显的炎性改变（见图1、图2）。以上结果说明造模成功。表2大鼠不同稀释倍数血清MP|IgM滴度阳性例数肺泡壁未见增厚，肺泡腔内未见炎性渗出物。肺内小支气管及间质小血管周围未见明显炎性病变。图2 光镜下模型组肺组织形态学观察×200
增宽的肺泡间隔内毛细血管明显充盈，可见程度不等的淋巴样细胞，个别单核细胞及分叶核白细胞浸润，间质呈明显的炎性改变。
2.2 各组大鼠肺泡灌洗液sIgA的含量比较实验结果显示，与正常组比较，模型组、中药组、西药组肺泡灌洗液sIgA含量显著降低，有高度统计意义（P<0.01）。与模型组比较，中药组、西药组sIgA含量显著升高（P <0.01）,说明理肺通络合剂和阿齐霉素均可不同程度地提高呼吸道局部sIgA含量；中药组与西药组比较有统计意义（P<0.05）,提示理肺通络合剂对于提高sIgA含量方面作用优于阿齐霉素。见表3。 表3各组大鼠肺泡灌洗液sIgA的含量比较注： 与正常组比较＃P<0.01；与模型组比较★P <0.01；与中药组比较△P <0.05
3 讨论
肺炎支原体(MP)是呼吸道常见致病菌,主要通过飞沫或气溶胶传播, MP侵入呼吸道后，首先黏附于膜上皮细胞，然后进入上皮细胞之间，借菌体所产生的过氧化氢酶与菌膜毒性成分引起细胞损伤，致上皮细胞病变及纤毛运动减弱。MP感染后可产生血清特异性IgM、IgG、IgA，但体液抗体保护作用不完全，而呼吸道局部产生的sIgA对防止再感染有较强的作用。sIgA由黏膜固有层的浆细胞产生，在防御、廓清MP感染的过程中起着十分重要的作用[1]。由于外分泌液中sIgA含量多，又不易被蛋白酶破坏，故成为机体抗感染、抗过敏的一道重要的免疫“屏障”。sIgA可阻止病原微生物黏附于黏膜上皮细胞，其机制:一是使病原微生物发生凝集，因丧失活动能力而不能黏附于黏膜上皮细胞；二是与微生物结合后，阻断了微生物表面的特异结合点，因而丧失黏附能力；三是与病原微生物结合，可刺激呼吸道等黏膜中的杯状细胞分泌大量黏液，“冲洗”黏膜上皮，妨碍微生物黏附。此外，sIgA还有免疫排除作用。气道sIgA对于空气中吸入的某些抗原物质具有封闭作用，使这些抗原游离于分泌物，易于被排除，或将抗原物质限制于黏膜表面，不致进入机体，从而避免超敏反应的发生[2]。祖国医学认为，正气是对人体的精、气、神及在此基础上产生的抗病能力、康复能力和自身调控能力的总称。在人体与疾病的正邪斗争中，正气的强弱起着决定性的作用。所谓“正气存内，邪不可干”，“邪之所凑，其气必虚”。有报道[3]指出，肺气虚患者，肺泡灌洗液中sIgA含量较正常人降低，说明肺气虚证患者局部体液免疫处于低下状态，sIgA含量的高低可直接反应呼吸道局部的防卫功能状态。由此可推论sIgA是可以反应人体正气强弱的指标之一。理肺通络方以扶正祛邪、理肺通络为组方原则。通过扶助正气、减轻感染后的症状及病理损伤，促进康复，防止其向其他疾病演变，这是理肺通络方对肺炎支原体肺炎模型的防治作用的机理之一。方中重用黄芪以补脾肺之气，现代药理学也证明，黄芪具有免疫双向调节作用[4]；沙参养肺阴，扶正以祛邪；枳实行气化痰；紫菀下气止咳；麻黄、杏仁宣肺平喘；百部杀虫润肺止咳；蜈蚣活血搜风止痉。诸药合用，共奏理肺通络之功效。本实验结果显示，理肺通络方能有效地提高气道sIgA水平，且作用优于阿齐霉素，表明理肺通络方能提高局部防御功能，对于清除支原体寄居和防止再次感染有重要意义。
【参考文献】
[1]贾飞勇,梁东,傅文永,等. 肺炎支原体P1蛋白预防动物支原体肺炎的研究[J]. 中华儿科杂志,2001，39（5）：293-294.
[2]龚非力.医学免疫学[M].北京：科学出版社,2000：39.
[3]刘中本,吴华强,赵江云,等.肺气虚患者体液免疫变化的研究[J].中国医药学报,1994,9（4）:28-29.
[4]林海清，宋钦兰.黄芪药理作用研究进展[J].山东中医学院学报,1994,18（6）:426-427.
作者单位：湖北省中医医院，湖北武汉 430061