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【摘要】 目的观察中药复方益智宁煎剂对注意缺陷多动障碍(ADHD)动物模型自发性高血压大鼠(SHR)前额叶皮质及纹状体多巴胺（DA）的影响。方法将11周龄的雄性SHR分为益智宁高剂量组、低剂量组和生理盐水对照组,分别予益智宁和生理盐水灌胃,用高效液相色谱—电化学法检测前额叶皮质、纹状体中多巴胺的含量。结果益智宁可明显升高SHR纹状体多巴胺含量,高剂量组、低剂量组与生理盐水对照组比较差异有统计意义(P<0.05),但高、低剂量组间无明显差异；3组间前额叶皮质中多巴胺的含量比较，差异无统计意义(P>0.05)。结论益智宁治疗肾虚肝亢型ADHD的作用机制之一可能与调节单胺类神经递质有关，其对额—纹状体环路DA的调控主要在于提高纹状体DA含量，纹状体为作用靶点之一。
【关键词】 益智宁；自发性高血压大鼠；纹状体；多巴胺
注意缺陷多动障碍（attention deficit hyperactivity disorder, ADHD），又名儿童多动症，以注意力缺陷、多动、冲动为主要表现，是常见的儿童行为精神障碍，患病率高，且常伴有学习障碍、品行障碍、抽动障碍及某些情绪障碍，严重危害儿童的身心健康。目前西医对本病的治疗存在不少争论，尚无正规的预防策略。我院儿科李宜瑞教授于20世纪90年代初开设专科门诊，以中医药治疗ADHD，积累了丰富经验，其中针对肾虚肝亢型的益智宁方应用最多，疗效确切、作用稳定、安全、无毒副作用。为探讨本药可能的作用机制，本实验采用研究ADHD最常用模型动物—自发性高血压大鼠（SHR），观察益智宁煎剂对SHR前额叶皮质和纹状体多巴胺（DA）的影响，现将实验结果报道如下。
1实验材料
1.1动物
SHR27只,雄性,周龄11周,体质量200～230 g(购于上海斯莱克公司)。
1.2主要仪器及试剂
Waters 510高效液相色谱仪(美国Waters公司生产),HP1049A电化学检测器(美国安捷伦公司生产),RC5C高速低温离心机(美国杜邦公司生产)，标准品多巴胺为Sigma公司生产，三氯次酸,Na2EDTA为国产分析纯级,实验用水为三蒸水。
1.3药物制备
益智宁方由夜交藤、熟地黄、龟板、生龙骨、远志、石菖蒲、党参、茯苓、浮小麦、五味子等组成。生药由广州中医药大学附属医院门诊部药房提供,制备成水煎剂后,含生药1.154 g/mL,贮存于4 ℃冰箱中备用。
2实验方法
2.1实验分组与处理方法
27只SHR按体质量随机分为益智宁高剂量组、益智宁低剂量组和生理盐水对照组3组,每组各9只,分别予益智宁0.025 mL/g、0.0125 mL /g,生理盐水0.0125 mL/g灌胃,每天1次,连续14 d。
2.2标准检测与方法
上述各组均在灌胃后第15 d上午8:00统一取材,取材前12 h禁食。断头处死动物,在冰台上迅速分离出双侧前额叶皮质、纹状体，分别放入玻璃匀浆器中,按5 mL/g的比例加入4 ℃的2 %三氯次酸,温和匀浆,匀浆液用吸管转移至离心管中,再用适量Na2EDTA荡洗匀浆器,洗液并入离心管,低温高速离心(4 ℃,10 000 r/min,15 min),取上清液50 μL测定DA。色谱柱为NU|CLEOSILRC18(250 mm×4 mm,10 μm,德国MA|CHEREY|NAGEL公司提供),流动相为磷酸二氢钠溶液(25 mmol/L,内含乙二胺四乙酸二钠0.5 mmol/L,辛烷磺酸钠3 mmol/L,pH 4.8)∶乙腈=100∶14(V/V),用前经0.45 μm滤膜真空抽滤,流速0.8 mL/min;玻璃碳工作电极,Ag/AgCl参比电极,检测电位0.6 V;SHR前额叶皮质、纹状体DA含量(μg/g湿组织)=CV/W[C为SHR前额叶皮质、纹状体样品测定的质量浓度(μg/mL),V为样品预处理过程中加入液体体积总量(mL),W为前额叶皮质、纹状体湿重(g)]。
2.3统计方法
各组数据用±s表示,组间比较用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析。
3 实验结果
见表1。
表1 各组前额叶皮质、纹状体DA含量的测定结果比较注：与生理盐水对照组比较* P<0.05。
益智宁高、低剂量组和生理盐水对照组3组前额叶皮质中DA含量经统计学处理，组间比较，差异均无统计意义(P>0.05)。益智宁高、低剂量组纹状体中DA含量均显著高于生理盐水对照组，经统计学处理，差异有统计意义(P<0.05)；但高、低剂量之间差异无统计意义。
4讨论
ADHD发病机制非常复杂,神经解剖研究认为额—纹状体环路异常是本病最可能的病因[1],影像学研究也证实ADHD存在原发或继发纹状体异常[2];在神经生化方面,脑内DA功能缺陷学说最受支持[3],国外学者发现患者活体脑内纹状体中多巴胺转运体(DAT)水平明显高于正常对照组,提示ADHD患者存在DA清除过度,致使突触间隙DA的有效含量不足[4]。神经药理的研究则直接支持了中枢DA缺陷假说[5],治疗ADHD最常用的药物中枢兴奋剂(哌甲酯、苯丙胺等)能促进中枢DA的释放,阻滞突触前DAT对DA的重摄取,从而提高突触间隙DA的含量。SHR作为遗传动物模型,是目前研究ADHD使用最为广泛的模型动物,有较高的应用价值[6]。SHR不仅在外在表现上与ADHD患儿的临床特征一致,存在持续注意力的缺陷,其神经生化方面的改变也与人类相似,SHR的前额叶皮质、纹状体等部位DAT密度增高,突触间隙DA含量下降[7-8]，而运用利他林、苯丙胺等精神兴奋剂后也能改善其类似ADHD的症状[6]。
中医学认为,ADHD主要由脏腑功能失常、阴阳失调所致,其病机特点是阳动有余而阴静不足。大量临床研究提示,肾虚肝亢为本病最常见的证型,李宜瑞教授在长期临床实践中总结出的益智宁方即针对此证型。全方主药有熟地黄、龟板、龙骨、石菖蒲、远志、党参、茯苓、浮小麦等,具有滋肾平肝、养心健脾、宁神益智之功,通过调理脏腑、平衡阴阳,从而改善症状。本实验中,益智宁组纹状体的DA含量明显高于生理盐水对照组,但对前额叶皮质的DA含量则未见明显影响,提示益智宁可能具有相应的作用靶点,其治疗ADHD的作用机制之一与调节单胺类神经递质有关,其对额—纹状体环路DA的调控主要在于提高纹状体DA含量,纹状体为作用靶点之一。此外，益智宁高剂量组前额叶皮质的DA含量虽高于低剂量组,但统计分析未显示二者有明显差异,是否存在量效关系尚难定论。本实验中未发现益智宁对前额叶皮质的DA有明显影响,可能与DA在前额叶皮质的含量不多有关,DA在纹状体的含量则占全脑的70 %[9]。
ADHD的发病机制除涉及DA系统外,还与去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5|HT)等有关。同时额—纹状体环路不同部位和不同的神经递质在发病中所起作用也不尽相同,益智宁对其他神经递质尤其是NE、5|HT的作用值得进一步研究。
【参考文献】
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作者单位：1.广州中医药大学第一附属医院，广东 广州；2.广州中医药大学，广东 广州