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【摘要】 目的观察中药制剂扶正固肾驱邪合剂对反复呼吸道感染小鼠免疫学的影响。方法60只小鼠随机分为正常组，模型组，玉屏风组，扶正固肾驱邪合剂高、中、低剂量组。正常组和模型组分别灌服生理盐水0.5 mL；扶正固肾驱邪合剂高、中、低剂量组分别灌服扶正固肾驱邪合剂0.5 mL/只，分别含生药4 g/mL，2 g/mL，1 g/mL；玉屏风组灌玉屏风口服液0.5 mL/只。每日1次，4周后处死。对各组小鼠的体质量、白介素-2、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋、CD3＋、脾脏指数、胸腺指数进行统计比较。结果扶正固肾驱邪合剂能明显提高小鼠的体质量、白介素-2、CD4＋、CD4＋/CD8＋、CD3＋、脾脏指数、胸腺指数，降低CD8＋，差异有统计意义（P<0.05或P<0.01）。结论扶正固肾驱邪合剂对以免疫功能低下为主要病因的小儿反复呼吸道感染的治疗有着广阔的前景。
【关键词】 扶正固肾驱邪合剂 小鼠 免疫功能 实验研究
反复呼吸道感染（RRTI）是指在单位时间内上、下呼吸道反复感染发作次数超过规定次数而言的一种临床综合征，是目前儿科的常见病及多发病，具有反复发作、病程较长、缠绵难愈的特点。现代医学认为RRTI的发病机制多集中在免疫功能缺陷、微量元素和维生素缺乏等方面。为了验证中药在调节免疫功能方面的效果，我们用扶正固肾驱邪合剂对小鼠做了免疫学方面影响的实验研究，现将结果报道如下。
1实验材料与方法
1.1实验动物
清洁级雄性ICR小鼠60只，体质量16～18 g，由浙江中医药大学动物中心提供，符合一级实验动物标准。
1.2实验药品
扶正固肾驱邪合剂（黄芪10 g、党参10 g、焦白术10 g、熟地黄10 g、制首乌10 g、五味子3 g、紫河车3 g、茯苓10 g、麦冬10 g、防风5 g、蝉蜕3 g、山楂10 g、淮山药10 g），按比例投药煎煮，由浙江中医药大学配制。玉屏风颗粒，广东环球制药有限公司生产，生产批号20070111，5 g/包，12包/盒。氢化可的松注射液，上海现代哈森（商丘）药业有限公司生产，生产批号20070223。 0.9 %生理盐水，金华市泰来医药有限责任公司生产，生产批号20070111。
1.3实验器材
WELLSCAN MK3酶标仪，芬兰LARYSTSGSI公司生产；FA1604电子天平，南京庚辰科学仪器有限公司生产；44LXJ-2离心沉淀机，上海医用分析仪器厂提供；FACS Can流式细胞分析仪，杭州众维科学仪器有限公司生产。
1.4主要试剂
小鼠白介素-2(IL|2)ELISA试剂、小鼠CD3+抗体、CD4+抗体、CD8+抗体，由北京精美生物公司提供。
1.5动物造模
反复呼吸道感染模型复制参照《实用中医证候模型学》使用的方法。小鼠腹腔注射氢化可的松0.04 mL/只，连续12 d，造成免疫功能低下（肾虚）小鼠模型。小鼠出现疲乏、自主活动明显减少、嗜睡、反应迟钝、尿量增多等肾阳虚的表现。
1.6实验分组与给药
适应性喂养5 d，确认健康后，随机分为正常组、模型组、玉屏风组、扶正固肾驱邪合剂高剂量组（简称高剂量组）、扶正固肾驱邪合剂中剂量组（简称中剂量组）、扶正固肾驱邪合剂低剂量组（简称低剂量组）6组，每组10只。高、中、低剂量分别相当于临床儿童用量的12倍、6倍和3倍。人鼠剂量换算按章元沛主编的《药理学实验》[1]人和动物的体表面积计算法计算。
于造模后第2 d开始，正常组和模型组分别灌服生理盐水0.5 mL/只；高、中、低剂量组分别灌服扶正固肾驱邪合剂0.5 mL/只，分别含生药4 g/mL，2 g/mL，1 g/mL；玉屏风组灌玉屏风口服液0.5 mL/只。每日1次，4周后处死。
1.7标本收集与指标检测
末次给药后,次日称取小鼠体质量。摘眼球取血后，颈椎脱臼法处死小鼠，剪开胸腔、腹腔取胸腺、脾脏，用无菌试纸吸干水分，在天平上称重，按公式“胸腺指数=胸腺质量/体质量（mg/g）”“脾脏指数=脾脏质量/体质量（mg/g）”分别计算胸腺和脾脏的指数。用双抗夹心法和流式细胞仪检测IL|2和CD3+，CD4+，CD8+的含量。
1.8统计学处理
所有数据均用SPSS11.5 windows统计软件进行处理。数据以均数±标准差（±s）表示，用F方差分析，检验前先进行正态性分布及方差齐性检验，若呈正态性分布、方差齐，则用t检验，否则行t′检验。
2 实验结果
2.1扶正固肾驱邪合剂对小鼠体质量及小鼠血清IL|2的影响
模型组体质量低于正常组，差异有统计意义（P<0.05），说明造模成功。治疗后中药各剂量组和玉屏风组体质量显著上升，但与正常组比较差异有统计意义（P<0.05）。高、中、低剂量组与玉屏风组比较，差异无统计意义（P>0.05）。中剂量组体质量高于高、低剂量组，差异有统计意义（P<0.05）。
模型组血清IL|2的含量明显低于正常组，差异有高度统计意义（P<0.01），说明造模成功。扶正固肾驱邪合剂高、中、低剂量及玉屏风颗粒能明显提高小鼠血清IL|2的水平，与模型组比较，差异有高度统计意义（P<0.01），但没有达到正常小鼠的水平（P<0.01）。中剂量组与玉屏风组之间差异有高度统计意义（P<0.01）；但高、中、低剂量各组间比较，差异无统计意义（P>0.05）。见表1。表1扶正固肾驱邪合剂对小鼠体质量及血清IL|2的影响
2.2扶正固肾驱邪合剂对小鼠CD4＋，CD8＋，CD4＋/CD8＋的影响
模型组CD4＋低于正常组，差异有高度统计意义（P<0.01），说明实验造模成功。治疗后中药各剂量组及玉屏风组CD4+均显著上升，与模型组比较差异有统计意义（P<0.05）。正常组高于中药各剂量组及玉屏风组，差异有统计意义（P<0.05）；中药各剂量组与玉屏风组比较，差异无统计意义（P>0.05）。
模型组CD8＋含量高于正常组，有高度统计意义（P<0.01）。治疗后中药各剂量组及玉屏风组CD8+均显著下降，与模型组比较差异有统计意义（P<0.05）。中药各剂量组与玉屏风组比较，差异无统计意义（P>0.05）。中药各剂量组间比较，差异无统计意义（P>0.05）。
模型组CD4＋/CD8＋低于正常组，差异有高度统计意义（P<0.05）。治疗后模型组CD4＋/CD8＋低于中药各剂量组及玉屏风组，差异有统计意义（P<0.05）。正常组高于中、低剂量组及玉屏风组，差异有统计意义（P<0.05）。中药各剂量组与玉屏风组比较，差异无统计意义（P>0.05）。高、中、低剂量组组间比较，差异无统计意义（P>0.05）。见表2。表2扶正固肾驱邪合剂对小鼠CD4＋，CD8＋，CD4＋/CD8＋的影响 注：与正常组比较▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较* P<0.05，**P<0.01
2.3 扶正固肾驱邪合剂对小鼠CD3＋、脾脏指数、胸腺指数的影响
模型组CD3+低于正常组，差异有高度统计意义（P<0.01）。模型组CD3+低于中药各剂量组及玉屏风组，差异有高度统计意义（P<0.01）。中药各剂量组及玉屏风组低于正常组，差异有统计意义（P<0.05）。中剂量组CD3+高于玉屏风组，差异有统计意义（P<0.05）。中剂量组与高、低剂量组比较，差异有统计意义（P<0.05）。
模型组的小鼠脾脏指数低于正常组，差异有统计意义（P<0.05）。模型组低于中药各剂量组及玉屏风组，差异有统计意义（P<0.05）。中药各剂量组及玉屏风组与正常组比较，差异无统计意义（P>0.05）。中药各剂量组之间比较，差异无统计意义（P>0.05）。
模型组的小鼠胸腺指数低于正常组，差异有高度统计意义（P<0.01）。中药各剂量组及玉屏风组与模型组比较，能明显提高小鼠胸腺指数水平，差异有高度统计意义（P<0.01）。中药各剂量组之间比较，差异无统计意义（P>0.05）。见表3。表3扶正固肾驱邪合剂对小鼠CD3+、脾脏指数、胸腺指数的影响 注：与正常组比较▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较* P<0.05，**P<0.01；与中剂量组比较#P<0.05
3 讨论
RRTI与小儿的体质特点密切相关。小儿“稚阳未充，稚阴未长”，主要表现在“肺脾不足，肾常虚”，盖肺气不足，常致卫外不固，脾气不足不能生化气血，而肾虚更是不能藏精滋润化气，温煦肺脾。故小儿感邪以后，调治不当，常致正气内耗、邪恋不清，从而成为一种互为因果的恶性循环，即正气不足→易感邪→正气更虚→反复感邪。根据其机理当属中医本虚标实之证，其病机不在邪多，而在正气不足，特别是肺、脾、肾三脏不足。
扶正固肾驱邪合剂就是根据小儿体质特点、RRTI发病机理所制定的。调补肺脾肾以固其本，兼驱留恋之邪以治其标。方中熟地黄、淮山药、制首乌滋补肾阴；麦冬、五味子养阴敛肺；紫河车壮阳；黄芪、党参补脾肺之气以固表；焦白术、茯苓健脾利湿；防风、蝉蜕祛风除邪；山楂消积活血。
目前，对RRTI患儿细胞免疫功能研究最多的是CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+的水平以及IL|2。我们以此为主进行实验研究，就是为中医治疗RRTI寻求有力的科学依据。实验证明，扶正固肾驱邪合剂能使小鼠IL|2得到明显提高。如表2所示，CD4+，CD4+/ CD8+模型组较正常组降低，CD8+升高，差异有高度统计意义，提示CD4+，CD8+之间平衡失调。这可能是RRTI的重要原因，同时也可能是反复病原体感染机体反应的结果。实验提示，扶正固肾驱邪合剂能提高免疫功能低下小鼠的CD4+T细胞、CD3+T细胞、CD4+/ CD8+,降低CD8+T细胞。以上实验结果表明，该合剂可显著增强细胞免疫功能，平衡T淋巴细胞群，增强复感小鼠的免疫功能和发挥正常的抗感染免疫作用。
【参考文献】
[1]章元沛.药理学实验[M].北京：人民卫生出版社，1996：239.
作者单位：宁波市中医医院,浙江宁波315010