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［摘要］目的 探讨子痫前期病人血清可溶性血管内皮生成因子受体1（sFlt-1）水平的变化及其意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定30例子痫前期病人（子痫前期组）产前和产后48 h血清血管内皮生成因子（VEGF）及sFlt-1水平。并以45例健康孕妇作为对照（对照组），其中早期妊娠18例、中期妊娠12例、晚期妊娠15例。晚期妊娠组及子痫前期组均随访至产后（正常产后组、子痫前期产后组）。结果 中期妊娠组VEGF水平与早期及晚期妊娠组比较，差异均有统计学意义（ t=3.456、 2.274 ，P< 0.01 、0.05）。早、中期妊娠组sFlt-1水平与晚期妊娠组比较，差异有统计学意义 （t=3.494、2.244，P <0.05）。正常产后组VEGF与sFlt-1水平均较晚期妊娠组减低，差异有显著性（ t=3.595、2.338，P <0.01、0.05）。子痫前期组血清VEGF、sFlt-1水平与晚期妊娠组比较，差异均有显著性（ t=11.785、8.643，P< 0.01）。子痫前期产后组VEGF、sFlt-1水平与正常产后组比较差异无统计学意义（ t=1.986、1.018，P >0.05）。妊娠32周前发病及伴胎儿生长受限的子痫前期病人血清sFlt-1水平较妊娠32周后发病及不伴胎儿生长受限的子痫前期病人血清sFlt-1水平明显升高（ t=2.305、2.286，P <0.05）。子痫前期组血清sFlt-1水平与24 h尿蛋白总量呈明显正相关（ r= 0.517 ，P <0.01）。母体血清sFlt-1与VEGF水平呈明显负相关（ r=-0.383，P <0.05）。结论 子痫前期病人血清sFlt-1水平升高且与子痫前期发病时间和疾病严重程度相关。
［关键词］ 子痫;子痫前期;血管内皮生成因子;血管内皮生成因子受体
DETECTION OF SERUM VEGF AND SOLUBLE FMS-LIKE TYROSINE KINASE 1 IN PREECLAMPSIA
YE YUAN-HUA， LIU LING， ZHAN YING， et al
（Department of Obstetrics and Gynecology， The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College， Qingdao 266003， China）
［ABSTRACT］ObjectiveTo observe the level of serum soluble fms-like tyrosine kinase 1 （sFlt-1） in patients with pre-eclampsia and its significance. MethodsThe serum levels of VEGF and sFlt-1 were detected by enzyme linked immuosorbent as-say （ELISA） in 30 women with preeclampsia， 48 h before and after labour， and 45 normal pregnant women including early preg-nancy （18）， midtrimester pregnancy （12） and late pregnancy （15）. ResultsThe difference of VEGF levels between midtrimes-ter-pregnancy group and early- as well as late-pregnancy group significant （ t=3.456， 2.274; P <0.01， 0.05）;the difference of sFlt-1 levels between early- ， midtrimester- ， and late-pregnancy group was significant （ t=3.494，2.244;P <0.05）. The levels of VEGF and sFlt-1 of normal postpartum group were lower than those of the late-pregnancy group （ t=3.595，2.338;P <0.01， 0.05 ）. The level of VEGF of the preeclampsia group was significantly lower than that of the late-pregnancy group （ t=11.785， P < 0.01）.The level of sFlt-1 of the preeclampsia group was significantly higher than that of the late-pregnancy group （ t=8.643，P <0.01）.The levels of VEGF and sFlt-1 of the preeclamptic postpartum group were not significantly different compared with the normal postpartum group （ t=1.986，1.018;P >0.05）;the levels of sFlt-1 of the preeclamptic women with the onset before 32 ges-tation weeks and with fetal growth retardation were significantly higher than those of the women with the onset after 32 gestation weeks and not with fatal growth retardation （ t=2.305，2.286;P <0.05）. Positive relationship was observed between the level of sFlt-1 and the 24-hour proteinuria in women with preeclampsia （ r=0.517， P <0.01）. Negative relationship was seen between the level of sFlt-1 and VEGF in the maternal serum （ r=-0.383， P <0.05）. ConclusionThe level of sFlt-1 in patients with pre-eclampsia increases and is associated with the onset time and the severity of the illness.
［KEY WORDS］eclampsia;preeclampsia; VEGF; fms-like tyrosine kinase receptor
子痫前期是妊娠期的特有疾病，其发病机制十分复杂，涉及多种因素的作用。已有研究表明，可溶性血管内皮生成因子受体-1（sFlt-1）可能参与了子痫前期的发生与发展［1］。本研究通过检测子痫前期 病人血清sFlt-1和血管内皮生成因子（VEGF）水平，旨在探讨它们在子痫前期发病中的作用及其与病情发展的关系。
1 资料与方法
1.1 研究对象选取2004年5月～2005年3月青岛大学医学院附属医院妇产科收治子痫前期病人共30例（子痫前期组），平均年龄为（30.2±4.7）岁，平均孕周为（36.5±2.7）周。其中轻度子痫前期11例，重度子痫前期19例;妊娠32周前发病12例，妊娠32周后发病18例;11例伴胎儿生长受限。子痫前期、胎儿生长受限诊断参照文献［2］的标准。另选同期门诊及住院正常妊娠妇女45例作为对照，其中早期妊娠18例（早期妊娠组），平均年龄为（28.0±4.0）岁，平均孕周为（9.3±1.3）周;中期妊娠12例（中期妊娠组），平均年龄为（28.8±4.2）岁，平均孕周为（ 22.9± 4.3）周;晚期妊娠15例（晚期妊娠组），平均年龄为（28.6±3.2）岁，平均孕周为（38.7±0.8）周。晚期妊娠组及子痫前期组均随访至产后（正常产后组、子痫前期产后组）。所有病例既往均无高血压、心脏病、肾病、糖尿病及甲状腺功能亢进等病史，无输血及免疫治疗史。
1.2 方法
1.2.1标本采集 受检者均于清晨空腹抽取肘静脉血3 mL，晚期妊娠组与子痫前期组分别于分娩前1周内及产后48 h时采血。所有标本分离血清后-70 ℃贮存备用。
1.2.2血清VEGF、sFlt-1水平测定 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定，试剂盒分别由武汉博士德生物工程公司和青岛福林生物有限公司提供。操作按试剂盒提供说明书进行，所有标本均行复孔检测且为同批测定，均值为最终浓度，批内变异<5%。
1.2.324 h尿蛋白总量测定 按常规方法收集受检者24 h尿液送检。
2 结果
2.1各组间VEGF与sFlt-1水平比较 中期妊娠组VEGF水平与早期妊娠组及晚期妊娠组比较，差异有显著性（ t=3.456、2.274，P< 0.01、0.05）;早、中期妊娠组sFlt-1水平与晚期妊娠组相比差异有显著性 （t=3.494、2.244，P <0.05）;正常产后组VEGF水平为（26.60±2.46）ng/L，sFlt-1水平为（5.16±2.39）mg/L，与晚期妊娠组比较差异均有显著性 （t=3.595、2.338，P< 0.05 ）;子痫前期组VEGF、sFlt-1水平与晚期妊娠组相比，差异有显著性（ t=11.785、8.643，P < 0.01 ），重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较差异也有显著性 （ t= 4.48、2.212，P <0.01、0.05）; 子痫前期产后组VEGF水平为（27.14±3.39）ng/L，sFlt-1水平为（6.07±3.07）mg/L，与正常产后组比较差异均无显著性 （t=1.986、1.018，P > 0.05 ）。见表1。
2.2母体血清sFlt-1、VEGF水平与子痫前期发病时间及胎儿生长的关系 12例妊娠32周前发病的子痫前期病人血清sFlt-1、VEGF水平分别为（37.82±13.83）mg/L、（18.70±2.91）ng/L，18例32周后发病的子痫前期病人血清sFlt-1、VEGF水平分别为（26.41± 12.24 ）mg/L、（19.58±2.89）ng/L，两组比较，sFlt-1水平差异有统计学意义（ t=2.305，P <0.05），VEGF水平差异无显著性（ t=0.791，P >0.05）。11例伴胎儿生长受限的子痫前期病人血清sFlt-1、VEGF水平分别为（39.07±15.96）mg/L、（17.76±2.05）ng/L，19例不伴胎儿生长受限的子痫前期病人血清sFlt-1、VEGF水平为（27.00±11.54）mg/L、（21.47±4.06）ng/L，两者比较差异均有统计学意义（ t=2.286、2.453，P< 0.05）。
表1 各组血清VEGF、sFlt-1水平比较（略）
2.3子痫前期病人血清sFlt-1水平与24 h尿蛋白总量的关系 子痫前期病人24 h尿蛋白总量为（2.92± 1.30 ）g/L。子痫前期病人血清sFlt-1水平与24 h尿蛋白总量呈明显正相关（ r=0.517，P <0.01）。
2.4母体血清sFlt-1与VEGF水平的关系 母体血清sFlt-1与VEGF水平呈明显负相关（ r=-0.383，P <0.05）。
3 讨论
3.1正常妊娠及子痫前期病人血清sFlt-1水平的变化 目前发现的VEGF受体有4种，包括FLT-1、KDR、FLT-4、NRP-1，而sFlt-1为FLT-1的可溶性形式，血循环中sFlt-1可与游离VEGF结合，从而拮抗VEGF的作用。关于妊娠期sFlt-1水平变化文献报道较少，LEVINE等［3］研究表明，早孕及中孕期妇女血清sFlt-1水平保持恒定，至妊娠33～36 周后开始升高，每周增加约145 ng/L，直至分娩。本文的研究结果与文献报道结果相似，早孕期与中孕期sFlt-1水平比较无明显差异，晚孕期则明显升高。许多研究表明，妊娠期血清VEGF水平随孕周增加而升高，至中孕时达最高，后又逐渐下降［4］。本文结果与之相似。妊娠中期血清VEGF水平升高与胎盘VEGF表达增强有关，而升高的VEGF对胎盘血管的发育和功能的维持起着重要作用［5］。从本文的结果可以看出，在胎盘及胎盘血管发育快速的早孕及中孕期，以血清VEGF升高为主，随着胎盘的成熟及其血管的发育完善，血清sFlt-1水平开始升高，而VEGF水平则随之减低，但妊娠晚期sFlt-1水平升高的意义尚不清楚。本文结果表明，子痫前期病人血清sFlt-1水平明显高于正常晚期妊娠，而重度子痫前期病人sFlt-1水平则明显高于轻度病人，提示血清sFlt-1水平与子痫前期病情发展密切相关。关于sFlt-1与子痫前期的关系，本文结果表明，子痫前期病人血清sFlt-1升高的同时，VEGF明显减低，推测sFlt-1可能通过降低血清VEGF水平，导致sFlt-1/VEGF失衡，参与子痫前期的病情发展。MAYNARD等［6］对小鼠微小肾动脉灌注VEGF及sFlt-1，以观察对血管张力的影响，结果显示，sFlt-1对血管张力并无影响，但可拮抗VEGF对血管的舒张作用，并呈剂量依赖关系，进一步证明sFlt-1通过拮抗VEGF发挥作用。但HERTIG等［7］的研究表明，子痫前期病人在其临床症状出现前6～11周，其血清sFlt-1水平明显升高，但不伴有VEGF水平的降低，提示sFlt-1并非完全通过拮抗VEGF而诱发子痫前期。MAYNARD等［6］观察了sFlt-1对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞的影响，sFlt-1可影响血管内皮细胞的形态。但sFlt-1是否直接影响内皮细胞功能尚未见报道，因此，sFlt-1是否还通过其他方式参与子痫前期的发病及病情进展尚有待于进一步研究。关于子痫前期病人血清sFlt-1水平升高的原因，TSATSARIS等［8］研究表明，可能与子痫前期病人胎盘sFlt-1 mRNA上调，sFlt-1过度表达有关。本文研究中，子痫前期病人产后血清sFlt-1水平明显减低，亦间接证明子痫前期病人血清sFlt-1水平升高可能与胎盘产生过多有关。3.2血清sFlt-1水平与子痫前期发病时间、胎儿生 长以及尿蛋白的关系 本文对子痫前期病人血清sFlt-1水平与子痫前期发病时间及胎儿生长的关系进行了分析，结果显示，妊娠32周前发病或伴有胎儿生长受限的子痫前期病人血清sFlt-1水平均明显升高，进一步证明血清sFlt-1水平与子痫前期病情发展密切相关。关于血清sFlt-1水平与子痫前期病人尿蛋白的关系，本文结果提示，子痫前期病人血清sFlt-1水平与24 h尿蛋白总量呈明显正相关。MAYNARD等［6］对妊娠小鼠注射整合sFlt-1基因的腺病毒后，其肾小球出现内皮细胞过度肿胀、肾小球毛细血管阻塞等类似人类子痫前期的肾小球的病理改变，并出现蛋白尿，在对非妊娠小鼠的实验中也有同样发现，提示sFlt-1可能直接作用于肾小球造成肾脏损害，而不依赖妊娠的存在。但子痫前期病人sFlt-1对肾脏的作用机制尚需进一步研究。
［参考文献］
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［7］ HERTIG A， BERKANE N， LEFEVRE G， et al. Maternal serum sFlt-1 concentration is an early and reliable predictive marker of preeclampsia［J］. Clin Chem， 2004，50:1072-1073.
［8］ TSATSARIS V， GOFFIN F， MUNAUT C， et al. Over-ex-pression of the soluble vascular endothelial growth factor in preeclamptic patients: pathophysiological consequences［J］. J Clin Endocrinol Metab， 2003，88:2348-2351.
（本文编辑 厉建强）
（青岛大学医学院附属医院产科，山东 青岛 266003）