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【摘要】 目的 探讨膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）在卵巢浆液性腺癌组织中的表达及其与临床病理学特征的关系。方法 采用免疫组织化学PV法检测30例卵巢良性浆液性腺瘤、30例交界性浆液性腺瘤和50例浆液性腺癌中MT1-MMP的表达。结果 MT1-MMP在卵巢浆液性腺癌（78.0%）和交界性浆液性腺瘤（56.7%）中的表达阳性率高于良性浆液性腺瘤（23.3%），其差异有显著性（χ2=22.93、8.30，P<0.05）。MT1-MMP在组织学G2/G3级、有转移和临床Ⅲ/Ⅳ期的卵巢浆液性腺癌组织中的表达阳性率（85.7%、92.9%和86.5%）明显高于组织学G1级、无转移和临床Ⅰ/Ⅱ期（3/8、59.1%和7/13），其差异有显著性（χ2=5.97～9.10，P<0.05）。结论 MT1-MMP在卵巢浆液性腺癌的发生、浸润和转移过程中起重要作用，可作为反映卵巢浆液性腺癌生物学行为的重要参考指标。
【关键词】 癌
侵袭和转移是卵巢浆液性腺癌最重要的生物学特征之一，也是病人治疗失败和死亡的直接原因。肿瘤的侵袭转移是一个复杂的、多步骤的肿瘤细胞与宿主细胞及基质间相互作用的过程。大量实验表明，基质金属蛋白酶介导的基质降解对肿瘤的侵袭和转移起着极为重要的作用，也是目前研究肿瘤侵袭和转移的热点［１］。本文采用免疫组化技术检测膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达，探讨MT1-MMP表达与卵巢浆液性腺癌发生及临床病理学特征的关系。
1 材料与方法
1.1 材料来源收集烟台毓璜顶医院妇科2000～2005年送检的50例卵巢浆液性腺癌、30例良性浆液性腺瘤和30例交界性浆液性腺瘤的手术标本存档蜡块。其中卵巢癌病人平均年龄50.2岁，术前均未行放、化疗；病理证实无转移者22例，已发生转移者28例，转移部位包括：输卵管、肠管、大网膜及各处淋巴结；参照国际妇产科联盟（FIGO）标准进行临床分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期4例，Ⅲ期27例，Ⅳ期10例；组织学分级：G1级8例，G2级18例，G3级24例。所有标本均经40 g/L的中性甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。
1.2 方法鼠抗人MT1-MMP单克隆抗体（工作液）及免疫组化PV试剂盒均购自北京中杉公司。MT1-MMP的检测采用免疫组化PV方法，具体步骤严格按说明书进行操作，石蜡切片脱蜡，以微波枸椽酸盐进行抗原修复，DAB显色，苏木精复染，脱水，透明封片，显微镜下观察。用已知阳性的乳癌组织切片做阳性对照，用PBS代替一抗做阴性对照。
1.3 免疫组化结果判断癌细胞的胞质或胞膜呈棕色细颗粒状反应为MT1-MMP阳性表达。每张切片在400倍显微镜下随机选择10个不重复的视野，每个视野下计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞的百分数，将各视野中的平均阳性百分比作为该切片的阳性细胞百分比。阳性细胞百分率>10 %为阳性。
1.4 统计学处理根据资料性质采用χ2检验分析。所有数据统计均在SPSS 10.0软件包上统计处理。
2 结 果
2.1 MT1-MMP在卵巢浆液性肿瘤中的表达MT1-MMP阳性染色表现为细胞质中出现棕黄色颗粒，主要定位于肿瘤细胞胞质。在卵巢浆液性腺癌的间质细胞，如成纤维细胞及血管内皮细胞也可见MT1-MMP阳性表达，但良性和交界性卵巢浆液性腺瘤的间质细胞中未见表达。MT1-MMP在30例卵巢良性浆液性腺瘤、30例交界性浆液性腺瘤和50例浆液性腺癌组织中的表达阳性率分别为23.3%、60.0%和78.0%。卵巢浆液性腺癌和交界性浆液性腺瘤MT1-MMP阳性率显著高于良性浆液性腺瘤（χ2=22.93、8.30，P<0.05）。卵巢浆液性腺癌MT1-MMP阳性率虽高于交界性浆液性腺瘤，但差异无显著性（χ2=2.97，P>0.05）。
2.2 MT1-MMP表达与卵巢浆液性腺癌临床病理学特征的关系MT1-MMP在卵巢浆液性腺癌组织学G2/G3级中的表达阳性率（85.7%）明显高于G1级（3/8）（χ2=9.10，P<0.05）。MT1-MMP在有转移的卵巢浆液性腺癌组织中的表达阳性率为92.9%，无转移者为59.1%，二者间比较差异有显著意义（χ2=8.19，P<0.05）。MT1-MMP表达阳性率在卵巢浆液性腺癌临床Ⅲ/Ⅳ期（86.5%）与Ⅰ/Ⅱ期（7/13）间有显著性差异（χ2=5.97，P<0.05）。
3 讨 论
MT1-MMP是近年来发现的第一个位于细胞膜上的基质金属蛋白，通过作用于多种细胞外基质成分和细胞黏附分子，参与许多重要的生理和病理过程［1,2］。目前对于MT1-MMP是由肿瘤细胞还是由成纤维细胞分泌尚存在争议。AFZAL等［3］用分子杂交方法研究显示，MT1-MMP同MMP-2一样定位于肿瘤间质细胞。OHTANI等［4］用免疫电镜发现MT1-MMP分布于癌细胞、巨噬细胞的胞膜和成纤维细胞的粗面内质网，根据MT1-MMP的双重表达，推测癌细胞中的MT1-MMP与浸润性生长有关，而成纤维细胞中的MT1-MMP起调节癌细胞浸润生长的作用。本文研究显示，MT1-MMP主要表达于卵巢浆液性肿瘤细胞质，而且在卵巢浆液性腺癌的间质细胞，如成纤维细胞及血管内皮细胞也可见MT1-MMP阳性表达，但良性和交界性浆液性腺瘤的间质细胞中未见表达；MT1-MMP在卵巢浆液性腺癌和交界性浆液性腺瘤中的表达阳性率均显著高于良性浆液性腺瘤，而在浆液性腺癌和交界性浆液性腺瘤间则无明显差别。说明MT1-MMP可能参与卵巢浆液性腺癌的发生发展过程，癌细胞分泌高水平的MT1-MMP，同时可诱导间质细胞分泌MT1-MMP，共同促进浆液性腺癌的浸润及转移。卵巢交界性浆液性腺瘤高表达MT1-MMP可能是发生腹膜播散和远处转移的因素之一。激活的MT1-MMP具有多种生物学功能，不仅可以水解多种细胞外基质成分，如纤维粘连蛋白、层粘连蛋白等，还可以裂解细胞黏附分子如CD44、整合素前体等［１］。近年来的研究显示，在多种肿瘤组织中均有MT1-MMP蛋白及其mRNA的过度表达，MT1-MMP的表达与肿瘤的发生、发展密切相关，但在卵巢癌中的研究报道较少。国外研究显示，MT1-MMP的表达与肝癌的侵袭及转移密切相关［5,6］。BANDO等［7］报道，MT1-MMP在胃癌中的表达与其病理级别、淋巴结转移、血管侵袭及腹膜播散也密切相关，并认为MT1-MMP可作为判断胃癌侵袭能力和预后的指标。SAKATA等［8］报道，卵巢癌组织中MT1-MMP的表达显著高于良性和交界性卵巢肿瘤组织，而且其表达与卵巢癌的病理学分级有关。本文研究结果显示，MT1-MMP在卵巢浆液性腺癌中异常高表达，随着其组织学分级和临床分期的增加，MT1-MMP表达阳性率增高；有转移者MTl-MMP表达阳性率明显高于无转移者。本文结果说明，卵巢浆液性腺癌中MT1-MMP过表达，可导致细胞外基质的降解和改建，促进肿瘤新生血管形成，参与卵巢浆液性腺癌的浸润、转移和病程的进展，可作为反应卵巢浆液性腺癌生物学行为的重要指标，并可能会成为今后治疗的靶点。
【参考文献】
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［3］AFZAL S, LALANI E N, POULSOM R, et al. MT1-MMP and MMP-2 mRNA expression in human ovarian tumors: possible implications for the role of desmoplastic fibroblasts［J］. Hum Pathol, 1998,29（2）:155-165.
［4］OHTANI H, MOTOHASHI H, SATO H, et al. Dual over-expression pattern of membrane-type metalloproteinase-1 in cancer and stromal cells in human gastrointestinal carcinoma revealed by in situ hybridization and immunoelectron microscopy［J］. Int J Cancer, 1996,68（5）:565-570.
［5］MURAKAMI K, SAKUKAWA R, IKEDA T, et al. Invasiveness of hepatocellular carcinoma cell lines: contribution of membrane-type 1 matrix metalloproteinase［J］. Neoplasia, 1999,1（5）:424-430.
［6］HARADA T, ARII S, MISE M, et al. Membrane-type matrix metalloproteinase-1（MT1-MTP） gene is overexpressed in highly invasive hepatocellular carcinomas ［J］. J Hepatol, 1998,28（2）:231-239.
［7］BANDO E, YONEMURA Y, ENDOU Y, et al. Immunohistochemical study of MT-MMP tissue status in gastric carcinoma and correlation with survival analyzed by univariate and multivariate analysis［J］. Oncol Res, 1998,5（4）:1483-1488.
［8］SAKATA K, SHIGEMASA K, NAGAI N, et al. Expression of matri metalloproteinases （MMP-2, MMP-9, MTl-MMP） and their inhibitors （TIMP-1, TIMP-2） in common epithelial tumors of the ovary［J］. Int J Oncol, 2000,17（4）:673-681.
作者单位：（1 青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院，山东 烟台 264000； 2 烟台海港医院； 3 滨州医学院病理学教研室； 4 青岛大学医学院附属医院病理科）