不同性质肠神经活性物质在淤血性肠炎反应中的变化

【摘要】  　　目的 探讨不同性质肠神经活性物质在淤血性肠炎反应中的变化，为临床诊治肠功能紊乱提供依据。方法 取成年新西兰大白兔20只，随机分为实验组和对照组。人工夹闭实验组兔门静脉1 h，造成肠淤血炎症反应。12 h后处死动物，距幽门15 cm处切取小肠标本，免疫组化SP法检测脑啡肽(ENK)、神经降压素 (NT)、血管活性肠肽（VIP）、神经肽Y（NPY）的表达。结果 实验组ENK、NT的表达明显高于对照组（t=18.067、4.174，P<0.01）,而实验组VIP、NPY的表达与对照组无明显差异（t=0.960、1.976，P>0.05）。结论 在淤血性肠炎反应中，兴奋性神经递质ENK、NT的表达明显升高，而抑制性神经递质VIP、NPY的表达无明显变化，表明该过程中肠神经系统以兴奋性作用为主。

【关键词】  肠神经系统；神经肽类；肠炎

　　CHANGES OF NEUROPEPTIDE SECRETION BY ENTERIC NERVOUS SYSTEM IN ENTERITIS

　　LI WEIHUA, XIA YUJUN, ZHU YANPENG

　　(Department of General Surgery, No. 401 Hospital of PLA, Qingdao 266071, China)

　　［ABSTRACT］ObjectiveTo study the changes of neuropeptide secreted by enteric nervous system in enteritis.  MethodsTwenty adult New Zealand albino rabbits were randomly divided into two groups: experimental group and control group. The portal vein was clamped for one hour in the experiment group to induce intestinal congestive inflammation. The rats were sacrificed 12 hours later, an intestine segment 15 cm distal to pylorus was obtained and immunohistochemistry technique used to study the expression of  ENK, NT, VIP and NPY. ResultsThe expressions  of ENK, NT in the experimental were significantly higher than that in the control (P<0.01), but the expressions of VIP and NPY were not significantly different between the two groups (P>0.05). ConclusionDuring the progress of enteritis, the exciting neuropeptide is predominantly secreted by enteric nervous system, while the inhibitory neuropeptide does not change much.
   
　　［KEY WORDS］Enteric nervous system; Neuropeptides; Enteritis
   
　　胃肠运动的调节是一个十分复杂的过程，其神经调节主要依赖中枢神经、自主神经和肠神经系统(ENS)[1]。ENS是胃肠壁内的自主神经系统，具有独立于大脑而行使其功能的完整结构，其兴奋性递质有乙酰胆碱、速激肽、阿片肽和5羟色胺(5HT)等[2]，而其抑制性递质为血管活性肠肽（VIP）和一氧化氮（NO）。临床上多种胃肠动力障碍性疾病，如贲门失弛缓症、慢性特发性假性肠梗阻等均与肠神经元的异常有着密切关系[3]。在ENS这个复杂系统中，一种神经肽可以存在于一种神经元中，也可存在于多种神经元中[4]。研究肠神经系统神经肽在淤血性肠炎反应中的表达变化[5]，明确其作用机制，可为临床肠炎疾病的诊治提供一定的理论指导。

　　1  材料和方法

　　1.1  实验动物分组

    健康成年新西兰大白兔20只（青岛市药物研究所提供），雌雄各半，将性别相同、体质量相近、同一窝别的大白兔配对，随机分为实验组和对照组，每组10只。

　　1.2  动物模型的制作及检测方法

    耳缘静脉麻醉大白兔，打开腹腔，动脉夹夹闭实验组兔的门静脉1 h，对照组仅打开腹腔，未夹闭门静脉。12 h后处死两组实验动物，距幽门15 cm处切取小肠，常规石蜡包埋，4 μm厚切片，共5张，1张行常规染色，另4张分别行脑啡肽(ENK)兔单克隆抗体、神经降压素(NT)兔单克隆抗体、VIP兔单克隆抗体、神经肽Y（NPY）兔单克隆抗体免疫组化SP染色。利用德国Sample PCI图像分析系统将染色结果转化为灰度值，选定5个视野（200倍），取其平均值，以净灰度值作为该切片的测定值。

　　1.3  统计学分析

    应用SPSS 13.0统计软件包进行配对资料的t检验。

　　2  结果

　　2.1  苏木精伊红染色检查

    实验组可见小肠绒毛断裂，基底膜不完整，层次结构不明显，表面覆盖有坏死组织，并可见炎性细胞浸润，黏膜细胞水肿。而对照组基底膜完整，肠壁层次结构清楚，细胞无水肿，仅有少量的炎症细胞。结果表明，实验组夹闭门静脉后兔的肠壁发生了淤血性炎症反应。

　　2.2  ENK、NT、VIP、NPY的表达

    ENK、NT、VIP、NPY均在肠神经元的胞浆或胞膜中表达，呈现程度不同、基本均匀的棕黄色颗粒。实验组ENK、NT的表达明显高于对照组（t=18.067、4.174，P<0.01）,而VIP、NPY的表达与对照组无明显差异（t=0.960、1.976，P>0.05）。见表1。表1  两组ENK、NT、VIP、NPY的表达比较（略）

　　3  讨论

    ENS包括感觉、中间、运动神经元，感觉神经元能将感觉到的牵张(张力感受器)、酸度(化学感受器)、紧张性(渗透压感受器)、温度(温度感受器) 等变化信息传至中间神经元，而后传入中枢，运动神经元可将整合后的中枢信号传递到效应器，根据释放递质的性质，决定胃肠的兴奋或抑制状态，从而调控其运动，引起胃肠壁平滑肌的舒缩及扩张[6]。对于胃肠运动的调控，ENS的作用比自主神经显得更为重要[7]，因为ENS本身含有大量的神经元及神经纤维，可独立于大脑之外，组成一个完整的反射装置，担当起“微处理器”的角色，引发某种固定的应答行为，如咀嚼、吞咽、胃肠蠕动等局部神经反射[8]。而大脑则为一作用更大、范围更广的信息处理调控中心，它接受来自ENS的信息，并向其发出指令，协调胃肠运动的调控[9]。

    胃肠在脑肠轴的共同调控下，其运动总的可分为紧张性收缩与蠕动性收缩。这些运动均是基于胃肠平滑肌的电活动实现的。目前认为控制胃肠运动的反射回路存在于ENS内，且独立于中枢神经系统之外[6]。需指出的是，ENS的运动神经元由兴奋性和抑制性神经元组成，兴奋性神经元释放神经递质乙酰胆碱和P物质，激发胃肠平滑肌收缩，促使肠腺分泌[10]。而抑制性运动神经元可分泌抑制性神经递质ATP、VIP、NO、脑垂体腺苷酸环化酶活性肽，抑制肠壁肌层收缩[11]。本实验结果证实，在淤血性肠炎反应中，兴奋性神经递质ENK、NT的表达明显升高，而抑制性神经递质VIP、NPY的表达无明显变化。由此可知，当胃肠系统出现炎性反应时，肠兴奋性神经系统被激活，引起胃肠功能紊乱，这为临床疾病的诊治提供了靶向治疗的新的作用方向。在胃肠功能紊乱诊断明确后，可选择使用抑制性神经递质药物或激活抑制性神经递质，从而达到治疗疾病的目的。

【参考文献】
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　　[10]KINOSHITA K, SATO K, HORI M, et al. Decrease in activity of smooth muscle Ltype Ca2+ channels and its reversal by NFkappa B inhibitors in Crohn’s colitis model[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2003,285:G483493.

　　[11]BOSSONE C, HOSSEINI J M, PINEIROCARRERO V, et al. Alterations in spontaneous contractions in vitro after repeated inflammation of rat distal colon[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2001,280:G949957.

作者单位：1 中国人民解放军第401医院普外科，山东 青岛 266071；2 青岛大学医学院人体解剖学教研室